盐酸氨溴索联合环丙沙星抗铜绿假单胞菌成熟生物膜作用研究

目的构建铜绿假单胞菌发光菌株,建立铜绿假单胞菌生物膜(biofilm,BF)模型,研究盐酸氨溴索对铜绿假单胞菌成熟BF的影响及与环丙沙星合用是否具有协同杀菌作用。方法将携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的质粒转染铜绿假单胞菌,平板培养法培养铜绿假单胞菌BF,建立铜绿假单胞菌BF体外模型,经盐酸氨溴索作用后,扫描电镜(scanning elec-tron microscope,SEM)观察盐酸氨溴索对BF形态结构的影响,荧光显微镜定性观察盐酸氨溴索对BF内活菌的作用,通过发光菌株荧光强度定量分析盐酸氨溴索单独作用以及与环丙沙星联用后BF内活菌量。结果盐酸氨溴索作用后电镜观察可见黏液样物变稀疏,不规则。盐酸氨溴索浓度大于0.49mg/mlBF内活菌数减少(F=18,P<0.05);盐酸氨溴索与环丙沙星存在协同作用(F=15.1,P<0.05),且随着盐酸氨溴索浓度升高协同作用增强。结论盐酸氨溴索破坏铜绿假单胞菌成熟BF形态结构,减少其内活菌数;盐酸氨溴索与环丙沙星存在协同作用,增强其杀菌能力。

6年临床常见病原菌对环丙沙星耐药趋势分析

目的 :调查我院 1998- 2 0 0 3年间临床常见病原菌对环丙沙星耐药性趋势 ,为临床合理用药提供依据。方法 :用MicroScanWalkAway- 4 0全自动微生物鉴定和药敏试验。结果 :10种临床常见菌 :金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、变形杆菌属、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌 6年间对环丙沙星的耐药率增加 ,总耐药率从 1998年 4 4 0 %上升到 2 0 0 3年 5 2 7% ,其中金黄色葡萄球菌的耐药率增长最明显 ,年平均增加 7 4 % ;比较病原菌 1998～ 2 0 0 0年和 2 0 0 1～ 2 0 0 3年同一菌株间耐药率的变化 ,除鲍曼不动杆菌的耐药率有所下降外 ,其余 9种病原菌的耐药率均增加 ,且金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌前三年与后三年的耐药率差异有统计学意义。结论 :临床常见病原菌对环丙沙星的耐药率较高 ,临床经验用药应予以注意。

HPLC法测定盐酸环丙沙星乳膏剂和凝胶剂的含量

目的:建立一种理想的盐酸环丙沙星乳膏剂和凝胶剂含量测定方法,统一4个企业的新药转正标准。方法:用甲醇与0.1mol/L 盐酸的混合溶液(1:1)在80℃水浴中加热15分钟萃取软膏,应用高效液相色谱法测定了环丙沙星的含量。色谱条件:Kromasil C_(18)(250mm×4.6mm,5μm)柱;流动相为0.05mol/L 枸橼酸(用三乙胺调节 pH 为3.5)-乙腈(82:18),流速为1ml·min^(-1);紫外检测器,检测波长为277nm。结果:环丙沙星的色谱峰与杂质峰能够较好的分离,4个企业的产品的25%平均加样回收率为96.9%(RSD=0.5%),50%平均加样回收率为98.3%(RSD=1.6%)。结论:方法简便,快速,样品回收率高,重现性好,可用于不同企业生产的环丙沙星软膏的含量测定,能够对药品质量进行控制。

HPLC-PDAD法检测3种中兽药散剂中违规添加4种喹诺酮类药物的研究

为了建立检测中兽药散剂中违规添加氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星4种喹诺酮类药物的反相高效液相色谱法（HPLC-PDAD），采用Atlantis T3（十八烷基硅烷键合硅胶．4．6min×250mm，5μm）色谱柱，流动相为磷酸溶液：乙腈：甲醇（85．5：7.0：7．5），流速为1．0mL／min。检测波长为283nm。4种喹诺酮类药物检查方法的线性关系良好，r〉0．9999；回收率均在98．4％～104．6％范围内，RSD均在0．9％～2．3％之间；4种喹诺酮类药物在肥猪散、健胃散、银翘散3种中兽药散剂中的检出限均为200mg／kg。该方法可用于中兽药散剂中违规添加喹诺酮类药物的检测。

三金片、坦索罗辛及环丙沙星治疗慢性前列腺炎的疗效观察

目的观察三金片联合坦索罗辛及环丙沙星治疗慢性前列腺炎的临床疗效。方法选择2009年1月～2011年1月于我院住院治疗的慢性前列腺炎患者58例,根据随机数字表法随机分为联合组和对照组各29例。对照组29例予坦索罗辛及环丙沙星治疗,联合组给予三金片联合坦索罗辛及环丙沙星治疗片,比较两组的疗效及副作用。结果与对照组比较,联合组的总有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论三金片联合坦索罗辛及环丙沙星治疗慢性前列腺炎疗效确切,安全性好,值得临床广泛推广和应用。

喹诺酮类抗菌药的应用及其耐药性分析

目的:分析我院住院患者的喹诺酮类抗菌药环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LEV)的临床应用情况,为合理使用抗菌药物提供依据。方法:回顾性分析2008年1月-2010年12月CIP、LEV的总消耗金额、用药频度(DDDs)、日治疗费用(DDC)和病原菌耐药性资料。结果:喹诺酮类抗菌药的总消耗金额、用药频度均为LEV排第一,CIP排第二;日治疗费用为LEV低于CIP;细菌耐药率的差别不显著,但大部分病原菌耐药情况与前几年相比均有明显好转。结论:喹诺酮类抗菌药的使用情况及大部分细菌耐药性均有明显改善,喹诺酮类抗菌药临床使用趋于合理。

环丙沙星-聚羟基丁酸电纺纤维毡包封率的测定

采用紫外分光光度法测定环丙沙星-聚羟基丁酸电纺纤维毡包封率的方法,该方法灵敏、简便、重现性好,具有良好的线性关系。

以铕离子为荧光探针测定痕量环丙沙星

本文研究了环丙沙星(CIP)同铕离子形成的配合物体系的荧光光谱特性及实验条件对荧光强度的影响。在pH值为8.02的Tris-HCl条件下,Eu3+和环丙沙星(CIP)能形成配合物发生分子内能量转移,发射铕离子的特征荧光,其最大激发和发射波长为265 nm和615 nm。加入阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)后,可极大地增强体系的荧光强度,据此建立了一种以铕离子为荧光探针分析痕量环丙沙星含量的新方法,方法的线性范围为2.46×10-7mol·dm-3～9.84×10-5mol·dm-3,相关系数r=0.9965,检出限为1.92×10-7mol·dm-3。该法用于环丙沙星片剂和针剂的测定,回收率在98%～103%之间,结果令人满意。

口服环丙沙星对三硝基苯磺酸诱导小鼠肠炎的影响

目的评价口服环丙沙星在小鼠三硝基苯磺酸(TNBS)肠炎模型中的作用,探讨Toll样受体4 (TLR4)在肠炎发生中的作用。方法40只BALB／c小鼠随机分成正常对照组(10只);TNBS肠炎组(2t)只);环丙沙星干预组(10只)。评价下列指标:小鼠一般情况,肠黏膜病理学改变,远段结肠内容物细菌培养,结肠黏膜TLR4表达(免疫组化和RT-PCR法)和血清TNF-α(ELISA法)水平。结果环丙沙星干预组小鼠死亡率、肠道炎症(Ameho criteria结肠组织学评分)明显减轻,低于了NBS肠炎组(70％vs 20％,4．21±0．61 vs 1．54±0．71,P<0．01)。菌落计数(×109 CFU／mL)环丙沙星组低于正常组及TNBS肠炎组(1．36±0．23 vs 1．83±0．28 vs 2．54±0．42,P<0．01)。结肠TLR4表达情况(tlr4／β-actin光密度比值):TNBS肠炎组>环丙沙星干预组>正常对照组(0．76±0．05 vs 0．40±0．03 vs 0．24±0．02,P<0.01)。小鼠血清TNF-α水平(pg／mL):TNBS组>对照组(40．50±12．48 vs 20．41±2．11,P<0．01),环丙沙星干预组<TNBS组(27．85±16．71 vs 40．50±12．48,P>0．05)。结论环丙沙星可以减轻小鼠TNBS肠炎,机制可能与其减少肠道细菌、下调结肠TLR4表达有关。

环丙沙星和皮维碘软膏对烧伤感染创面的疗效观察

目的:对比环丙沙星和皮维碘软膏对烧伤感染创面的疗效。方法:对198例烧伤感染同一创面分别应用丙沙星和皮维碘软膏进行治疗比较。结果:环丙沙星组局部抗感染力强、抗菌作用持续时间长、愈合时间明显缩短、治疗费用明显减少等方面明显优于皮维碘软膏组。结论:局部应用环丙沙星治疗烧伤感染创面明显优于皮维碘软膏。

环丙沙星离子选择性电极的制备及应用

目的制备一种以环丙沙星与四苯硼钠缔合物为活性物的PVC膜环丙沙星选择性电极。方法用此电极以标准曲线法对盐酸环丙沙星及二种制剂进行含量测定。结果电极的响应范围10^-1～10^-1mol／L，斜率为37．4mV／pC，测得平均回收率为97．7％，RSD=2．4％（n=8）。结论方法灵敏度高，操作简便、结果与HPLC法相符。

耐环丙沙星铜绿假单胞菌的耐药性分析

目的了解本地区铜绿假单胞菌的耐药情况及超广谱β-内酰酶(ESBLS)的检出率,以指导临床合理用药。方法对90株临床分离菌用纸片扩散法(K-B法)进行药物敏感性试验;纸片扩散表型确证法进行ESBLS检侧。结果本地区铜绿假单胞菌对氨苄西林、萘啶酸、哌拉西林、头胞噻肟、头胞吡肟、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、司帕沙星、加替沙星、氨曲南、头胞他啶、亚胺培南、头胞呋辛的耐药率分别是90.0%、83.3%、77.2%、29.4%、5%、8.9%、65.0%、60.0%、62.2%、50.0%、7.2%、18.3%、0、47.2%;ESBLS的检出率为24.4%。结论本地区铜绿假单胞菌耐药情况不容乐观且多重耐药菌株较多;氟喹诺酮药物之间交叉耐药明显;产ESBLS率较高。

荧光铁载体-铽(Ⅲ)-环丙沙星三元配合物的光谱研究

在pH=8.0的50 mmol/L Tris-HCl缓冲溶液中,利用紫外光谱、荧光光谱、荧光寿命和等温滴定量热分析研究了环丙沙星(CIP)、Tb^(3+)与荧光铁载体(Pvd)三者之间的结合性质.结果表明,CIP与Tb^(3+)以3∶1摩尔比结合,结合常数约为1013L^3/mol^3,Tb(CIP)3配合物的形成使Tb^(3+)在544 nm处的荧光敏化.Pvd可与Tb^(3+)以1∶1摩尔比结合,Pvd-Tb^(3+)配合物在544 nm处并未出现Tb^(3+)的荧光敏化峰.三者之间的荧光滴定实验与等温滴定量热分析均证明了Pvd-Tb^(3+)-CIP三元配合物的形成,其中CIP与Pvd-Tb^(3+)的结合常数为(3.10±0.39)×103L/mol.配合物中CIP对Tb^(3+)特征荧光的敏化效应为抗菌素抗荧光假单胞菌机理的深入研究提供了可行的方法.

环丙沙星离子选择性电极的制备及应用

目的:制备一种以环丙沙星与四苯硼钠缔合物为活性物的PVC膜环丙沙星选择性电极。方法:用此电极以标准曲线法对盐酸环丙沙星及其两种制剂进行含量测定。结果:电极的响应范围10^(-1)～10^(-5)mol·L^(-1),斜率为37.4 mV/pC,平均回收率为97.7%,RSD=2.4%(n=8)。结论:方法灵敏度高,操作简便,结果与HPLC法相符。

广东省汕头市92株淋球菌药物敏感性检测

目的:了解汕头地区2009年淋球菌对多种抗菌药物耐药的发生率及产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)和四环素高度耐药淋球菌(TRNG)的流行状况。方法:采用琼脂稀释法测定5种抗菌药物最低抑菌浓度(MIC),纸片酸度法测定青霉素产β-内酰胺酶菌株。结果:92株淋球菌对青霉素耐药率为84.8%、四环素耐药率为89.1%、环丙沙星耐药率为92.4%;未发现大观霉素及头孢曲松耐药菌株。检出PPNG高达31株(33.7%)。TRNG为47株(51.1%)。青霉素、四环素和环丙沙星的MIC50及MIC90均已超过耐药标准。结论:大观霉素和头孢曲松为汕头地区治疗淋病的首选药物。

HPLC法测定盐酸环丙沙星含量方法的建立

目的:建立盐酸环丙沙星含量测定的HPLC法。方法:以Diamonsil^(TM)(钻石)C_(18)为固定相,0.05mol/l枸橼酸溶液—乙腈(82:18)为流动相,在检测波长277nm条件下测定环丙沙星含量,并与药典方法进行比较。结果:在建立的色谱条件下,在浓度5～30μg/ml范围内线性良好,且与其杂质能完全分离,相关系数为0.9985。结论:本法准确、方便、可靠。

盐酸环丙沙星片的稳定性研究

目的:通过考察盐酸环丙沙星片的稳定性,确定其有效期。方法:在不同温度、湿度和时间下,取样检测其含量、溶出度的变化。结论:通过检测结果确定盐酸环丙沙星片在不同温度、湿度条件下贮存的有效期。

广州淋球菌基因特征及其多抗原序列分型与环丙沙星耐药相关性研究

目的探讨2014年广州市97株淋球菌环丙沙星耐药株的基因特征及其多抗原序列分型（NG～MAST）与淋球菌耐环丙沙星的相关性。方法用琼脂稀释法测定淋球菌对环丙沙星的最低抑菌浓度（MIC），PCR分别扩增淋球菌的gyrA、parC基因和NG—MAST分型基因porB、tbpB基因并测序，获取耐药菌株的sT型别。结果97株淋球菌中95株（97．9％）对环丙沙星耐药。95株环丙沙星耐药菌株均在gyrA基因对应丝氨酸的第91和95位点上发生了突变，其中93株菌出现了parC基因突变。41株高水平耐药株（MIC≥16m∥L）中35株（85．4％）出现了parC基因87位点突变，54株低水平耐药株中32株（59．3％）出现此突变，差异有统计学意义（Z：7．64，P〈O．05）。96株淋球菌分离株配对后，50株为网站已编号型别，共35个不同的ST型，其中10个ST型含有2—4个不同的分离株，sT型别中最常见ST5309。对淋球菌菌株系统进化树分析，淋球菌流行株可分为两群，第1群84株中MIC≥16mg／L的菌株39株占46．4％，第2群12株中只有1株MIC值为16mg／L，差异有统计学意义（r=6．27，P=0．012）。结论淋球菌对环丙沙星的高水平耐药主要与parC基因87位点突变相关。NG—MAST分型与环丙沙星耐药程度高低可能存在相关性。

人脐带间充质干细胞培养上清液与环丙沙星体外联合应用对金黄色葡萄球菌的作用

目的探讨联合应用人脐带间充质干细胞（hUCMSC）培养上清液与环丙沙星对金黄色葡萄球菌的作用。方法取足月剖宫产健康胎儿的脐带组织，分离、培养、鉴定hUCMSC后选取第3代细胞进行实验；取笔者单位烧伤患者创面分离培养的金黄色葡萄球菌菌株用于以下实验。按随机数字表法（下同）将细胞分为0、10、100、1000ng／mLLPS组，添加相应质量浓度LPS处理12h后，换为间充质干细胞（MSC）培养液培养，培养6、12、24h，每组收集6孔细胞培养上清液，ELISA法测定LL-37含量。将90个血琼脂平板培养基分为环丙沙星对照组、环丙沙星＋上清液组、环丙沙星＋上清液＋LL-37抗体组，每组30个。环丙沙星对照组培养基涂布1．5×10^8CFU／mL生理盐水配制的菌液；环丙沙星＋上清液组培养基涂布1．5×10^8CFU／mL由生理盐水和2倍生理盐水体积的hUCMSC培养上清液（用MSC培养液培养，下同）配制的菌液；环丙沙星＋上清液＋LL-37抗体组培养基涂布1．5×10^8CFU／mL由生理盐水和2倍生理盐水体积的hUCMSC培养上清液配制的菌液，菌液中加入2μg／mLLL-37抗体2．6μL。培养12、24、48h，每组取10个血琼脂平板培养基，观察血琼脂平板培养基上金黄色葡萄球菌菌落分布情况，测量环丙沙星抑菌环直径，读取环丙沙星对金黄色葡萄球菌的MIC。计算环丙沙星＋上清液组和环丙沙星＋上清液＋LL-37抗体组培养12、24、48h时环丙沙星的部分抑菌浓度（FIC）指数并评定协同效果。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD-t检验、Kruskal—Wallis检验、Mann-WhitneyU检验。结果（1）培养各时相点，10、100、1000ng／mLLPS组细胞培养上清液中LL-37含量均较0ng／mLLPS组高（t值为11．22～33．36，P值均小于0．01），100、1000ng／mLLPS组细胞培养上清液中LL-37含量均较10ng／mLLPS组高（t值为2．24～18．73，P〈0．05或P〈0．01），1000ng／mLLPS组细胞培养上清液中LL-37含量均较100ng／mLLPS组高（t值为12．46～14．70，P值均小于0．01）。（2）培养12、24、48h，环丙沙星对照组、环丙沙星＋上清液组、环丙沙星＋上清液＋LL-37抗体组血琼脂平板培养基中细菌菌落随时间延长逐渐融合。环丙沙星对照组培养12、24、48h环丙沙星抑菌环直径变化不大，分别为26、24、23mm。环丙沙星＋上清液组、环丙沙星＋上清液＋LL-37抗体组培养12、24、48h环丙沙星抑菌环直径分别为82、71、68mm和74、59、56mm，明显大于环丙沙星对照组。（3）培养各时相点，环丙沙星对照组环丙沙星对金黄色葡萄球菌的MIC明显大于环丙沙星＋上清液组和环丙沙星＋上清液＋LL-37抗体组（z值为6．22～6．71，P值均小于0．01）；环丙沙星＋上清液十LL-37抗体组环丙沙星对金黄色葡萄球菌的MIC均明显大于环丙沙星＋上清液组（z值均为6．72，P值均小于0．01）。（4）环丙沙星＋上清液组、环丙沙星＋上清液＋LL-37抗体组培养12、24、48h时环丙沙星的FIC指数分别为0．011、0．032、0．032，0．122、0．350、0．350，即hUCMSC培养上清液对环丙沙星产生了协同抗菌作用。结论hUCMSC能够分泌LL-37且分泌水平随着LPS浓度的增加而提高。hUCMSC培养上清液联合环丙沙星抗金黄色葡萄球菌，可以有效降低环丙沙星用量，中和LL-37后，hUCMSC培养上清液的协同抗菌作用降低。

高效液相色谱法测定大鼠血浆和肺泡灌洗液中环丙沙星浓度

目的建立一种测定大鼠血浆和肺泡灌洗液中环丙沙星浓度的高效液相色谱(HPLC)法。方法用甲醇直接蛋白沉淀法、去离子水直接稀释法分别对血浆和肺泡灌洗液进行处理,离心取上清,以莫西沙星为内标,用HPLC测定。色谱柱:Agilent SB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相:乙腈-0.1%甲酸水,流速:1.0 m L·min^(-1),柱温:25℃,进样量:15μL。考察该方法的专属性、标准曲线与最低定量下限、精密度与回收率、稳定性。结果血浆和肺泡灌洗液中的内源性物质不影响环丙沙星的测定。在血浆和肺泡灌洗液中,环丙沙星分别在1.00~100.00μg·m L^(-1)(r=0.999 6)、0.05~2.00μg·m L^(-1)(r=0.998 5)内线性关系良好,最低定量下限分别为1.00和0.05μg·m L^(-1)。环丙沙星在血浆和肺泡灌洗液中的批内精密度分别为0.49%~3.77%和2.21%~5.00%,批间精密度分别为7.72%~8.83%和6.84%~9.51%,提取回收率分别为104.61%~113.29%和100.65%~103.96%;环丙沙星血浆和肺泡灌洗液稳定性符合相关要求。结论该方法简单、准确、可操作性强,适用于伏立康唑大鼠血浆及肺泡灌洗液浓度测定。