假两性畸型小鼠睾丸胆固醇侧链裂解酶mRNA的异常表达

为了解假两性畸型（Ｔｆｍ）小鼠睾丸胆固醇侧链裂解酶（Ｐ４５０ｓｃｃ）ｍＲＮＡ的水平及影响其转录的机理，用反转录－多聚酶链反应比较了５ｄ、２０ｄ、２５ｄ和３０ｄ正常小鼠、Ｔｆｍ小鼠及３０ｄ手术隐睾小鼠睾丸Ｐ４５０ｓｃｃ的ｍＲＮＡ水平，正常小鼠在５～２０ｄ时，Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ水平较低，从２５ｄ起明显增高，至３０ｄ时ｍＲＮＡ水平是５ｄ时的７５倍；Ｔｆｍ小鼠在５ｄ时，Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ水平稍高于正常小鼠，但随后直至３０ｄ其水平未见明显增高，在３０ｄ时，Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ总量低于正常小鼠１／１０；３０ｄ手术隐睾小鼠的Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ水平低于正常３０ｄ小鼠１／２，高于Ｔｆｍ小鼠５倍。结果提示，２５ｄ的Ｌｅｙｄｉｇ细胞功能的形成需要受体介导的雄激素作用，而Ｔｆｍ小鼠由于编码雄激素受体基因突变，间接导致青春期Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ的低水平。

色胺酮抑制胸腺基质淋巴细胞生成素促肥大细胞增殖的药理机制

目的探讨色胺酮抑制由胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)促肥大细胞增殖的药理机制,为色胺酮治疗肥大细胞相关过敏性皮炎提供理论依据。方法在TSLP刺激人源肥大细胞系-1(HMC-1)细胞增殖的前提下,同步采用色胺酮处理增殖的细胞,观察对细胞增殖的影响和相关蛋白水平变化。噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度色胺酮处理对细胞活力的影响;溴脱氧尿苷渗入试验和Ki67 mRNA水平检测不同处理组细胞增殖情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测鼠双微体基因2(MDM2)、P53、Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)剪切蛋白水平变化;实时荧光定量聚合酶链反应检测白细胞介素7受体α(IL-7Ra)和TSLPR mRNA的含量。结果 MTT比色法结果表明,色胺酮无细胞毒性;溴脱氧尿苷渗入试验和Ki67 mRNA水平的检测均显示色胺酮抑制TSLP刺激的肥大细胞增殖;色胺酮抑制TSLP刺激的HMC-1中MDM2蛋白表达水平,蛋白灰度分析比较差异有统计学意义;色胺酮处理后,HMC-1细胞中,P53蛋白和凋亡标志蛋白Caspase-3、PARP剪切蛋白水平升高,且蛋白灰度分析比较差异有统计学意义;TSLP上游调控蛋白IL-7Ra和TSLPR mRNA水平在色胺酮的作用下受到抑制。结论色胺酮可抑制TSLP促肥大细胞增殖,对治疗肥大细胞相关过敏性皮炎有一定的潜力。

通用引物聚合酶链反应一次检测4种疱疹病毒DNA

为了能一次性分型检测４种疱疹病毒ＤＮＡ，防止漏诊，故采用在疱疹病毒高度同源序列ＤＮＡ聚合酶基因中设计一对通用引物的方法，对４种疱疹病毒（单纯疱疹病毒Ⅰ型、Ⅱ型、爱泼斯坦巴尔病毒、人巨细胞病毒）ＤＮＡ进行扩增，继而用凝胶电泳和限制性内切酶ＢａｍＨＩ或ＳｍａＩ酶切扩增产物进行鉴别，建立了能一次性分型检测上述４种病毒的聚合酶链反应（ＰＣＲ）法。敏感性和特异性试验表明，灵敏度可测到１ｆｇＤＮＡ，相当于６个病毒颗粒，且引物仅对４种疱疹病毒扩增。用建立的ＰＣＲ法和酶切分型法检测病毒性脑炎患者脑脊液和慢性宫颈炎患者宫颈分泌物中的疱疹病毒，取得较好结果。该法的建立为疱疹病毒感染的临床早期准确诊断、判定药物疗效和流行病学研究等提供了有效的手段。