期刊文献+
共找到56篇文章
< 1 2 3 >
每页显示 20 50 100
Clonging and Analysis of RrF3’ H in Rosa rugosa
1
作者 Jinfen Jin Zhongjian Li Lanyong Zhao 《American Journal of Molecular Biology》 2020年第1期51-60,共10页
Rosa rugosa is an important garden ornamental plant which belongs to the genus Rosa of the family Rosaceae. The current wild and cultivated R. rugosa are mostly purple, pink, a small amount of white, but lack of yello... Rosa rugosa is an important garden ornamental plant which belongs to the genus Rosa of the family Rosaceae. The current wild and cultivated R. rugosa are mostly purple, pink, a small amount of white, but lack of yellow, orange and so on. Flavonoids 3’-hydroxylase belongs to CYP75B subfamily of cytochrome P450, and is an essential enzyme in anthocyanins synthesis. In this experiment, RrF3’H gene was cloned from the petal of Rosa rugosa ‘Hunchun’ using RT-PCR, and bioinformatics analysis was performed. The RrF3’H gene’s full length of opening reading frame was 1687 bp, encoding 510 amino acids. The formulas of proteins encoded by RrF3’H were C2666H4149N699O734S24. The derived protein had a molecular weight of 58,506.95 Da. The aliphatic index was 90.94. It belongs to unstable hydrophilic protein. The protein consists of 46.76% α-helix, 31.04% random coil, 7.66% β-corner and 14.54% extended strand. The protein contains 21 Ser phosphorylation sites, 12 Thr phosphorylation sites, and 2 Tyr phosphorylation sites. The protein contained two O-glycosylation sites, located at positions 98 and 263 of the amino acid sequence respectively. The protein has a signal peptide site and a transmembrane structure. In addition, by comparing the expression levels of RrF3’H, we found RrF3’H was positively correlated with the depth of flower color. 展开更多
关键词 clonging and ANALYSIS of RrF3’H in ROSA RUGOSA
下载PDF
酿酒酵母S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:16
2
作者 杨静 王旻 +2 位作者 孙进 韦平和 汤卫国 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期253-255,共3页
目的 构建S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因工程菌 ,为酶促转化法生产S 腺苷甲硫氨酸奠定基础。方法 应用PCR技术从S 腺苷甲硫氨酸高产酿酒酵母染色体DNA中扩增得到S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因sam2 ,将其克隆至表达载体pT7 7,转化大肠杆菌 ,1%... 目的 构建S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因工程菌 ,为酶促转化法生产S 腺苷甲硫氨酸奠定基础。方法 应用PCR技术从S 腺苷甲硫氨酸高产酿酒酵母染色体DNA中扩增得到S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因sam2 ,将其克隆至表达载体pT7 7,转化大肠杆菌 ,1%琼脂糖电泳比较大小 ,筛选重组子。结果 SDS PAGE显示重组菌S 腺苷甲硫氨酸合成酶亚基分子量约为 4 2KDa ,平均表达量约占菌体总可溶性蛋白的 4 2 % ,酶活达到 14 .1U/g湿菌体 ,比宿主菌酶活提高 15 .7倍。结论 酿酒酵母SAM合成酶基因在大肠杆菌中高效表达 。 展开更多
关键词 S-腺苷甲硫氨酸合酶 克隆 表达
下载PDF
茶树巯基蛋白酶抑制剂基因的cDNA克隆与序列分析(英文) 被引量:12
3
作者 王朝霞 李叶云 +1 位作者 江昌俊 余有本 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期177-182,共6页
对多种已知植物巯基蛋白酶抑制剂(cystatin)基因的氨基酸序列进行比对分析,根据其高度保守的氨基酸序列设计一对简并引物,并从茶树品种龙井43鲜叶中提取总RNA,用RT-PCR法扩增出-204 bp的cDNA特异片段,然后通过3'/5'RACE的方法,... 对多种已知植物巯基蛋白酶抑制剂(cystatin)基因的氨基酸序列进行比对分析,根据其高度保守的氨基酸序列设计一对简并引物,并从茶树品种龙井43鲜叶中提取总RNA,用RT-PCR法扩增出-204 bp的cDNA特异片段,然后通过3'/5'RACE的方法,分别扩增出3'端和5'端的序列,从而获得茶树巯基蛋白酶抑制剂基因的cDNA全长序列,所得序列全长627 bp,编码101个氨基酸,分子量约11.062 KDa.该基因在推测的氨基酸序列中含有巯基蛋白酶抑制剂家族中高度保守的、与其活性有关的QXVXG结构,且经Blast分析表明,该基因序列与其他植物巯基蛋白酶抑制剂基因的氨基酸序列同源性为54%~77%. 展开更多
关键词 茶树 巯基蛋白酶抑制剂基因 CDNA 克隆
下载PDF
蚯蚓纤溶酶基因P_(239)的原核表达、纯化及活性测定 被引量:7
4
作者 陈飞 孟宪志 +4 位作者 李莉 单风平 吴红艳 桓明辉 陈杰 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期19-21,共3页
通过RT PCR方法从蚯蚓 (Lumbricusbimastus)中获得蚯蚓纤溶酶基因 ,命名为P2 3 9,含有 85 2个核苷酸 ,成熟肽编码 2 3 9个氨基酸 ,通过Genbank序列同源性比较 ,与已知的蚯蚓纤溶酶有一定的同源性 ,为首次获得的新基因。随后构建了 pBV2 ... 通过RT PCR方法从蚯蚓 (Lumbricusbimastus)中获得蚯蚓纤溶酶基因 ,命名为P2 3 9,含有 85 2个核苷酸 ,成熟肽编码 2 3 9个氨基酸 ,通过Genbank序列同源性比较 ,与已知的蚯蚓纤溶酶有一定的同源性 ,为首次获得的新基因。随后构建了 pBV2 2 0 /P2 3 9重组质粒 ,在大肠杆菌DH5α中进行原核表达 ,再经亲和层析柱纯化复性 ,其产物经活性测定 ,确定不仅具有激酶作用 ,而且具有直接溶栓活性。 展开更多
关键词 蚯蚓纤溶酶 基因克隆 重组表达 蛋白纯化 活挂测定
下载PDF
小麦基因克隆研究进展 被引量:4
5
作者 李根英 孟庆华 +2 位作者 隋新霞 管延安 黄承彦 《麦类作物学报》 CAS CSCD 2003年第2期92-96,共5页
小麦的基因克隆研究主要集中在品质、抗病、抗逆性、光合、春化等几个方面。在品质方面,已克隆了编码小麦高、低分子量谷蛋白亚基的基因、小麦淀粉合成酶基因及编码黑麦碱的基因;在抗病、抗逆性方面,已克隆了6个与白粉病有关的cDNA、几... 小麦的基因克隆研究主要集中在品质、抗病、抗逆性、光合、春化等几个方面。在品质方面,已克隆了编码小麦高、低分子量谷蛋白亚基的基因、小麦淀粉合成酶基因及编码黑麦碱的基因;在抗病、抗逆性方面,已克隆了6个与白粉病有关的cDNA、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因、抗小麦根节线虫基因、盐胁迫应答基因、水分胁迫诱导基因、与重金属解毒有关的基因;另外,还克隆了小麦叶绿体基因组中与光合作用有关的psbA基因和与春化有关的基因Vrc79、Vrc54、Vrc203、Vrc17、Vrc28等。在小麦中还克隆到一个GTP结合蛋白的cDNA克隆、EIF转录因子的cDNA克隆及异构酶基因家族FKBP73基因的启动子序列。 展开更多
关键词 小麦 基因克隆 品质 抗逆性 光合作用 春化作用
下载PDF
牦牛金属硫蛋白-Ⅲ(MT-Ⅲ)cDNA分子克隆及序列分析 被引量:7
6
作者 刘斌 吴建平 +3 位作者 张利平 马彬云 杨联 高凤芹 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第3期5-10,共6页
利用基因特异引物YMT-ⅢSP1和YMT-ⅢSP2,通过RT-PCR从牦牛大脑组织中克隆出了牦牛MT-Ⅲ基因编码区全长.将牦牛MT-ⅢcDNA序列在CBI上进行同源性搜索发现牦牛MT-Ⅲ编码区序列与羊、猪、人、鼠的同源性分别为95%、92%、89%、86%,该序... 利用基因特异引物YMT-ⅢSP1和YMT-ⅢSP2,通过RT-PCR从牦牛大脑组织中克隆出了牦牛MT-Ⅲ基因编码区全长.将牦牛MT-ⅢcDNA序列在CBI上进行同源性搜索发现牦牛MT-Ⅲ编码区序列与羊、猪、人、鼠的同源性分别为95%、92%、89%、86%,该序列在不同哺乳动物中相当保守,并通过牦牛MTs(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)编码区序列之间的分析表明,MT-Ⅰ与MT-Ⅱ编码的蛋白质性质、功能之间差异较小,而MT-Ⅲ与MT-Ⅰ/Ⅱ编码的蛋白质性质、功能之间差异相对较大.牦牛MT-Ⅲ基因编码的MT-Ⅲ蛋白由68个氨基酸组成,其中19个半胱氨酸,具有MTs保守的短肽结构如:C-X-C、C-C-X-C-C、C-X-X-C、KKS以及MT-Ⅲ特异的MDPE、CPCP等结构,在分子进化上很保守.分析表明了牦牛MT-Ⅲ蛋白质是一个低分子量,富含半胱氨酸.不含芳香族氨基酸,也无二硫键的蛋白质. 展开更多
关键词 牦牛 金属硫蛋白-Ⅲ cDNA分子克隆 序列分析
下载PDF
丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活基因4的克隆化研究 被引量:8
7
作者 杨倩 刘妍 +5 位作者 成军 王建军 王春花 纪冬 党晓燕 张树林 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2003年第3期248-250,共3页
目的 丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 5A(NS5A)病毒蛋白反式激活作用的新的靶基因NS5ATP4的基因序列的确立及基因克隆化研究。方法 依据我室构建的NS5A反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,利用生物信息学技术获得新基因NS5ATP4的编... 目的 丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 5A(NS5A)病毒蛋白反式激活作用的新的靶基因NS5ATP4的基因序列的确立及基因克隆化研究。方法 依据我室构建的NS5A反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,利用生物信息学技术获得新基因NS5ATP4的编码序列 ,对其可能的氨基酸序列进行分析比较 ,并对其基因利用多聚酶链反应技术 (PCR)进行克隆化研究。结果 发现了HCVNS5A反式激活作用的新的靶基因NS5ATP4。结论 这一发现 ,为阐明HCVVNS5A蛋白的反式激活作用及其机制 。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白5A 反式激活 基因克隆化 氨基酸序列
下载PDF
生长抑素基因在大肠杆菌pThioHis表达系统中的克隆与表达 被引量:3
8
作者 刘永庆 潘杰彦 +5 位作者 陈溥言 杜念兴 赵国屏 褚仲海 邓芳 杨胜利 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第1期19-23,共5页
目的 在大肠杆菌表达系统中高效表达生长抑素 (SS)基因。方法 以天然SS的氨基酸和基因序列为标准 ,将大肠杆菌使用频率较低的密码子分别更换成了使用频率较高的密码子 ,在SS基因的两端加上了合适的酶切位点 ,头部 :KpnI和NcoI;尾部 :P... 目的 在大肠杆菌表达系统中高效表达生长抑素 (SS)基因。方法 以天然SS的氨基酸和基因序列为标准 ,将大肠杆菌使用频率较低的密码子分别更换成了使用频率较高的密码子 ,在SS基因的两端加上了合适的酶切位点 ,头部 :KpnI和NcoI;尾部 :PstI(这一酶切位点可与NsiI的切口互补 )。克隆至pThioHisA质粒的KpnI/PstI酶切位点后 ,再克隆至pThioHisA质粒的KpnI/NsiI酶切位点 ,使SS基因分别位于多克隆位点的尾部和前部。结果 重组质粒经酶切鉴定和基因序列测定证明 ,基因完全正确 ,在大肠杆菌TOP10中均得到较好的表达 ,IPTG诱导后 4h表达量基本达到最高 (37℃ ) ;在A60 0 0 .4~ 1.5之间用IPTG诱导均可获得到较好的表达 ,但以 0 .6左右为最佳诱导时机 ;在LB、TB和 2YT培养基中表达量依次为 :TB >LB >2YT ;表达的SS融合蛋白基本为水溶性的 ,具有良好的SS抗原性和免疫原性。 展开更多
关键词 基因克隆 基因序列测定 SS融合蛋白 生长抑素基因 大肠杆菌pThioHis表达系统
下载PDF
茶树甜菜碱醛脱氢酶基因(CsBADH1)的全长cDNA克隆与表达分析 被引量:5
9
作者 曹红利 郝心愿 +3 位作者 岳川 马春雷 王新超 杨亚军 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期99-108,共10页
甜菜碱是一种能在逆境下大量积累的无毒性渗透相溶物质,而甜菜碱醛脱氢酶(BADH)是甜菜碱合成途径中的关键酶之一。本实验采用SMART-RACE技术获得了茶树甜菜碱醛脱氢酶基因的全长cDNA序列,命名为CsBADH1(GenBank登陆号:JX050145),并对其... 甜菜碱是一种能在逆境下大量积累的无毒性渗透相溶物质,而甜菜碱醛脱氢酶(BADH)是甜菜碱合成途径中的关键酶之一。本实验采用SMART-RACE技术获得了茶树甜菜碱醛脱氢酶基因的全长cDNA序列,命名为CsBADH1(GenBank登陆号:JX050145),并对其进行相关的生物信息学分析。结果表明:CsBADH1的cDNA序列全长1 972 bp,其开放阅读框(ORF)为1 518 bp,编码505个氨基酸,预测分子量为54.8 kD,理论等电点(PI)为5.652,是疏水性很强的蛋白,且具有BADH基因典型的高度保守十肽基序(VTLELGGKSP)和与醛脱氢酶(ALDHs)功能有关的半胱氨酸残基(C)。系统进化树分析表明,茶树BADH氨基酸序列与人参(Panax ginseng)的亲缘关系最近,相似度达87%,其余相似性也大部分在80%以上。实时荧光定量PCR分析结果显示:该基因在经历一定时间的冷驯化后表达量升高,说明CsBADH1基因可能参与茶树的冷驯化作用。 展开更多
关键词 茶树 冷驯化 甜菜碱醛脱氢酶(BADH) 基因克隆 表达分析
下载PDF
茶树GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶基因cDNA全长的克隆与表达分析 被引量:5
10
作者 肖瑶 周天山 +2 位作者 李佼 张佳欣 余有本 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期55-63,共9页
抗坏血酸(Vc)是重要的抗氧化剂,在茶树体内的各种生理代谢及抵御非生物胁迫中起重要作用,Vc含量关系到绿茶品质优劣。GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶(GMP)是茶树Vc生物合成途径中的关键酶之一。本研究通过RACE-PCR方法从茶树中克隆了GMP c DNA... 抗坏血酸(Vc)是重要的抗氧化剂,在茶树体内的各种生理代谢及抵御非生物胁迫中起重要作用,Vc含量关系到绿茶品质优劣。GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶(GMP)是茶树Vc生物合成途径中的关键酶之一。本研究通过RACE-PCR方法从茶树中克隆了GMP c DNA全长序列,共计1510 bp,其中包含1 086 bp的开放阅读框(ORF),编码361个氨基酸,推测蛋白分子量为39.599 k Da。BLAST分析表明,茶树GMP基因氨基酸序列与猕猴桃的亲缘性最高,达到96%。实时定量PCR分析表明,茶树新梢芽下第三叶中GMP基因表达量最高,嫩茎中最低,不同品种茶树新梢叶片中表达量存在明显差异。高温胁迫初期,GMP基因表达量及抗坏血酸含量迅速升高,然后逐渐下降且均低于同期对照。 展开更多
关键词 茶树 GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶 基因克隆 表达分析
下载PDF
蒙古马肌生成抑制基因(MSTN)的克隆及序列分析 被引量:5
11
作者 王全喜 红海 芒来 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2006年第5期45-49,共5页
肌生成抑制基因(MSTN)在发育和成熟的骨骼肌中特异表达,并对肌肉发育和再生具有负调控作用。依据马肌生成抑制素(MSTN)编码序列设计引物,以蒙古马基因组DNA为模板,利用PCR技术,扩增出MSTN基因的几个片段后,测序并按顺序拼接,得到DNA全... 肌生成抑制基因(MSTN)在发育和成熟的骨骼肌中特异表达,并对肌肉发育和再生具有负调控作用。依据马肌生成抑制素(MSTN)编码序列设计引物,以蒙古马基因组DNA为模板,利用PCR技术,扩增出MSTN基因的几个片段后,测序并按顺序拼接,得到DNA全序列。序列分析结果表明,MSTN基因由2个内含子和3个外显子组成,碱基数量分别为第一外显子373 bp、第二外显子374 bp、第三外显子381 bp;第一内含子1 833 bp、第二内含子2 018 bp,共有4 979个碱基。该序列首次登录到GenBank,登录号为AY840554。 展开更多
关键词 蒙古马 MSTN 基因 克隆 测序
下载PDF
瑞典能源柳无性系嫁接与整形可塑性研究 被引量:4
12
作者 何景峰 张文辉 王小鸽 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2009年第6期65-69,共5页
以1 a生瑞典能源柳无性系为材料,进行不同嫁接时间、不同砧木、不同嫁接方法和整形可塑性试验。结果表明:嫁接成活率春季较秋季高15.1%;乡土树种旱柳和金丝柳均可做砧木,金丝柳的嫁接成活率较高,在6个无性系中,插皮接法成活率较旱柳高10... 以1 a生瑞典能源柳无性系为材料,进行不同嫁接时间、不同砧木、不同嫁接方法和整形可塑性试验。结果表明:嫁接成活率春季较秋季高15.1%;乡土树种旱柳和金丝柳均可做砧木,金丝柳的嫁接成活率较高,在6个无性系中,插皮接法成活率较旱柳高10.0%,带木质部芽接高6.5%;嫁接方法以改良插皮接最优,嫁接伤口愈合好,普通插皮接次之,带木质部芽接和劈接法成活率最差;柳树主枝适合于进行小于180°的弯曲造型;平茬具有复壮作用,首先促进了分枝,其次是增加了分枝基径和高的相对生长量,叶片数的增幅最小。 展开更多
关键词 瑞典能源柳 无性系 嫁接方法 整形可塑性
下载PDF
几种基于pCAMBIA系列多用途新型植物表达载体的改建及优化 被引量:3
13
作者 李敬涛 孙新华 +4 位作者 余刚 贾承国 杜茜 李启云 潘洪玉 《吉林大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期371-375,共5页
以pCHF3,pCAMBIA1301,pCAMBIA3300和pCAMBIA3301载体为骨架,构建CaMV 35S和rd29A启动子驱动多克隆位点(MCS:SacⅠ,KpnⅠ,SmaⅠ,BamHⅠ,XbaⅠ,SalⅠ,PstⅠ)的通用型重组植物双元表达载体,得到两种启动子驱动下MCS与eGFP融合的应用型亚细... 以pCHF3,pCAMBIA1301,pCAMBIA3300和pCAMBIA3301载体为骨架,构建CaMV 35S和rd29A启动子驱动多克隆位点(MCS:SacⅠ,KpnⅠ,SmaⅠ,BamHⅠ,XbaⅠ,SalⅠ,PstⅠ)的通用型重组植物双元表达载体,得到两种启动子驱动下MCS与eGFP融合的应用型亚细胞定位双元表达载体,并建立了对大量候选基因进行高通量筛选和功能验证的通用型表达载体系统. 展开更多
关键词 植物双元表达载体 CaMV 35S RD29A 多克隆位点 增强型绿色荧光蛋白
下载PDF
犬瘟热病毒疫苗株H蛋白基因片段的克隆与表达及表达产物抗原性的初步鉴定 被引量:2
14
作者 王好 钱爱东 +1 位作者 刘晔 扈荣良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期601-604,611,共5页
根据发表的犬瘟热病毒(CDV)参考株Ondetstepoort的序列设计一对引物,以CDV感染的Vero细胞总RNA为模板,经RT-PCR扩增得到549bp DNA片段,将该片段以正确的阅读框架定向克隆于pGEX-4T-1中,然后将重组质粒转化宿主菌RosettaTM,在37℃、1.0mm... 根据发表的犬瘟热病毒(CDV)参考株Ondetstepoort的序列设计一对引物,以CDV感染的Vero细胞总RNA为模板,经RT-PCR扩增得到549bp DNA片段,将该片段以正确的阅读框架定向克隆于pGEX-4T-1中,然后将重组质粒转化宿主菌RosettaTM,在37℃、1.0mmol/L IPTG诱导下外源基因获得良好表达。经SDS-PAGE鉴定,表达的融合蛋白约46ku,与预期值一致。Western blot试验显示,CDV免疫的小鼠血清可特异的识别该重组蛋白,表明该重组蛋白具有一定的免疫原性。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 H基因 克隆表达 WESTEM BLOT
下载PDF
鸭瘟病毒GD株TK、dUTPase和PK基因的克隆及序列分析 被引量:2
15
作者 董嘉文 黄永亮 +2 位作者 牛学锋 刘晓慧 郭霄峰 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第5期53-57,共5页
根据已发表的鸭瘟病毒(DPV)TK、dUTPase、PK基因序列,设计合成了3对特异性引物,对DPV GD株的3个基因进行PCR扩增,产物克隆至PTA2载体并进行测序。结果表明,TK基因ORF全长为1 077 bp,编码358个氨基酸;dUTPase基因ORF全长为1 344 bp,编码... 根据已发表的鸭瘟病毒(DPV)TK、dUTPase、PK基因序列,设计合成了3对特异性引物,对DPV GD株的3个基因进行PCR扩增,产物克隆至PTA2载体并进行测序。结果表明,TK基因ORF全长为1 077 bp,编码358个氨基酸;dUTPase基因ORF全长为1 344 bp,编码447个氨基酸;PK基因ORF全长为1 158 bp,编码385个氨基酸。与GenBank上其他DPV毒株的同源基因进行比较,TK基因核苷酸的同源性为99.5%~100%,氨基酸同源性为98.9%~100%;dUTPase基因核苷酸的同源性为99.9%,氨基酸同源性为99.8%;PK基因核苷酸的同源性为99.8%~100%,氨基酸同源性为99.7%~100%。这表明TK、dUTPase、PK基因在DPV基因组中高度保守,为构建DPV基因缺失转移载体奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 基因 克隆 序列分析
下载PDF
罗非鱼无乳链球菌EsxA基因克隆与原核表达 被引量:3
16
作者 马艳平 梁志凌 +3 位作者 马江耀 刘振兴 郝乐 柯浩 《动物医学进展》 北大核心 2016年第4期35-39,共5页
Ⅶ型分泌系统(T7SS)是近年来发现的分泌系统,分泌两种胞外蛋白,EsxA基因编码的ESAT6蛋白和EsxB基因编码的CFP-10蛋白。分泌蛋白具有良好的免疫原性,促进细菌从巨噬细胞吞噬体逃逸、影响巨噬细胞凋亡及裂解细胞等生物学功能,与致病性密... Ⅶ型分泌系统(T7SS)是近年来发现的分泌系统,分泌两种胞外蛋白,EsxA基因编码的ESAT6蛋白和EsxB基因编码的CFP-10蛋白。分泌蛋白具有良好的免疫原性,促进细菌从巨噬细胞吞噬体逃逸、影响巨噬细胞凋亡及裂解细胞等生物学功能,与致病性密切相关。以罗非鱼源无乳链球菌为模板,克隆到294bp的EsxA基因,将目的序列克隆到pMD18-T载体,经测序,目的序列与无乳链球菌EsxA基因同源率在99%以上。EsxA基因克隆到pET32a载体中,重组载体在28℃、0.5mmol/L IPTG诱导条件下表达量最大,可溶性表达。将纯化的ESAT6蛋白免疫Balb/c鼠,成功制备ESAT6蛋白鼠多克隆抗体,经Western blot,ESAT6蛋白具有良好的反应原性。研究结果为进一步进行无乳链球菌ESAT6蛋白的免疫学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 Ⅶ型分泌系统 无乳链球菌 EsxA基因 克隆与表达
下载PDF
细粒棘球蚴延伸因子-1基因的克隆、测序及特性分析 被引量:9
17
作者 王健 赵嘉庆 +2 位作者 王娅娜 丁淑琴 赵巍 《宁夏医学杂志》 CAS 2005年第8期510-513,共4页
目的对细粒棘球蚴(E.granulosus)翻译延伸因子(translationelongationfactor)EF-1基因片段进行分子克隆及序列分析。方法从细粒棘球蚴原头蚴中提取RNA,采用RT-PCR技术扩增出细粒棘球蚴EF-1基因片段,与pGEM-T载体重组并转化E.ColiJM109,... 目的对细粒棘球蚴(E.granulosus)翻译延伸因子(translationelongationfactor)EF-1基因片段进行分子克隆及序列分析。方法从细粒棘球蚴原头蚴中提取RNA,采用RT-PCR技术扩增出细粒棘球蚴EF-1基因片段,与pGEM-T载体重组并转化E.ColiJM109,经筛选扩增获得重组基因克隆,再进行序列测定和分析。结果成功构建了EF-1/pGEM-T/JM109克隆体系,测序表明该基因开放阅读框为693bp,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为99%,推导编码氨基酸序列同源性为99%。结论扩增获得的基因片段可能为细粒棘球蚴(E.granu-losus)翻译延伸因子EF-1基因片段。 展开更多
关键词 棘球蚴病 基因 结构 克隆 分子 序列分析
下载PDF
家鸽mtDNA ATPase8和ATPase6基因的分子克隆及序列分析 被引量:3
18
作者 张慧霞 吴建平 +1 位作者 张利平 宗卉 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第5期9-15,共7页
利用特异引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,从家鸽(Columbalivia)肝脏组织的总DNA中扩增到目的片段,并将扩增产物克隆到pMD18-T载体中,经菌落PCR与酶切鉴定、序列测定及序列分析.结果表明:克隆得到了家... 利用特异引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,从家鸽(Columbalivia)肝脏组织的总DNA中扩增到目的片段,并将扩增产物克隆到pMD18-T载体中,经菌落PCR与酶切鉴定、序列测定及序列分析.结果表明:克隆得到了家鸽ATPase8-ATPase6基因842 bp及COII的部分序列共861 bp.用DNA分析软件对家鸽ATPase8和ATPase6基因与Genbank中的5种鸟类的ATPase8和ATPase6基因序列进行比较分析,表明家鸽与其他5种鸟类的ATPase8和ATPase6基因具有较高的同源性(88.1%~75.0%),其中与山斑鸠(Streptopelia orientalis)的同源性最高,分别为88.1%和86.5%.家鸽ATPase8和ATPase6基因核苷酸序列的组成中,(A+T)含量分别为55.95%和54.68%,与其它5种鸟类的(A+T)含量(53.5%~60.12%)和(51.9%~54.24%)相近,说明鸟类ATPase8和ATPase6基因序列组成对A+T核苷酸的偏倚程度比较低;而且家鸽该片段的基因组织结构与其他鸟类的基本一致,显示鸟类线粒体基因排列的保守性.家鸽与其他5种鸟类的ATPase8和ATPase6基因序列同源性的分子进化树聚类结果表明家鸽与山斑鸠亲缘关系最近. 展开更多
关键词 家鸽 线粒体基因组 克隆 序列分析
下载PDF
含云南蛮耗细茎野生种血缘甘蔗新品种(系)的宿根性研究 被引量:5
19
作者 经艳芬 楚连璧 +6 位作者 桃联安 孙友方 杨李和 安汝东 董立华 周清明 段惠芬 《中国糖料》 2008年第2期4-7,共4页
对瑞丽站育成含云南蛮耗细茎野生种血缘的第一个云蔗系列甘蔗新品种——云蔗99-155、云瑞99-113、云瑞99-131、云瑞99-178和云瑞99-601五个甘蔗新品系两新1宿品比试验,及部分品种(系)在云南省甘蔗品种区域试验的蔗茎产量、宿根能力、主... 对瑞丽站育成含云南蛮耗细茎野生种血缘的第一个云蔗系列甘蔗新品种——云蔗99-155、云瑞99-113、云瑞99-131、云瑞99-178和云瑞99-601五个甘蔗新品系两新1宿品比试验,及部分品种(系)在云南省甘蔗品种区域试验的蔗茎产量、宿根能力、主要经济性状进行了统计分析,结果表明:(1)在站内品比试验中,5个品种(系)的产量、宿根能力均明显优于对照ROC10,其中,宿根能力最强的云瑞99-113较ROC10高27.42%,最弱的云瑞99- 601亦较ROC10高14.20%;5个新品种(系)均达到国家甘蔗品种审定标准。(2)在云南省区试中,云蔗99-155宿根能力较ROC10优势突出,达101.62%,蔗茎单产居15个参试品种之首;云瑞99-113宿根能力与ROC10相当,蔗茎单产比ROC10高7.92%,初步显示出云南蛮耗细茎野生种对甘蔗品种宿根性及适应性改良的效果。 展开更多
关键词 甘蔗 细茎野生种 新品种(系) 宿根能力
下载PDF
大黄欧文菌中蔗糖异构酶基因的克隆表达及应用 被引量:1
20
作者 李莎 任贲 +2 位作者 林璐 徐虹 蔡恒 《南京工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2011年第1期84-89,共6页
以大黄欧文菌(Erwinia rhapontici)NX-5基因组DNA为模板,PCR扩增得到编码蔗糖异构酶(SIase)的基因palⅠ,构建克隆载体pUC18-palⅠ。经测序正确后,将palⅠ亚克隆至表达载体pET-22b(+)上,并在E.coliBL21(DE3)中成功表达相对分子质量约为66... 以大黄欧文菌(Erwinia rhapontici)NX-5基因组DNA为模板,PCR扩增得到编码蔗糖异构酶(SIase)的基因palⅠ,构建克隆载体pUC18-palⅠ。经测序正确后,将palⅠ亚克隆至表达载体pET-22b(+)上,并在E.coliBL21(DE3)中成功表达相对分子质量约为66 000的可溶性蛋白。通过Ni-NTA柱对表达产物进行纯化,纯酶的比活为40 U/mg。转化条件研究表明:重组菌能够高效转化质量分数为50%的蔗糖溶液,转化液中异麦芽酮糖得率为85%。 展开更多
关键词 蔗糖异构酶 大黄欧文菌 克隆表达 条件优化
下载PDF
上一页 1 2 3 下一页 到第
使用帮助 返回顶部