一种新的口服半合成青霉素—Cloxacillin

Cloxacillin(5—甲基—3—隣氯苯基—4—异(口恶)唑青霉素;别名:BRL1621)是一种新的半合成青霉素。与 Oxacil-in(5—甲基—3—苯基—4—异(口恶)唑青毒素;别名:BRL1400)同属于3,5—双取代—4—异(口恶)唑青霉素类。所不同者,仅较 Oxacillin 在苯环上多一个氯原子。本抗菌素具有耐酸及耐青霉素酶的特点,因此可供口服,以治疗耐青霉素葡萄球菌所致的感染疾病。作者用试管稀释法作细菌敏感度试验,测定 Cloxacillin 和 Oxacillin 对新近提出之耐青霉素-G 葡萄球菌22株、肺炎球菌12株及 A 组乙族溶血性链球菌(group A beta hemolytic streptococci)15株的最小制菌浓度(MIC)。其差别在试验和临床上的意义不大。在玻璃器内试验证明,耐药菌株生成的速度甚慢。用杯碟法试验,发现两药的血清蛋白结合率也接近(约为80—90%)。本品的注射溶液在酸性介质(pH5.5—6.0)中经七小时后,失去效价15—25%。作者将35名健康男女志愿者分为三组,每人空腹时服用0.5克或1.0克一次,然后分别在1/2、1、2、及4小时测定血药浓度。结果发现,在服 Cloxacillin 1—2小时后的平均吸收峯高于 Oxacillin 1—2小时的平均吸收峯一倍左右。证明 Cloxacillin 较 Oxacillin 在消化道吸收更佳。两种抗菌素的口服吸收率受进食的影响甚大,其吸收高峯的出现。

双纸片氯唑西林增效试验检测高产AmpC酶的阴沟肠杆菌

目的 尝试建立易于操作、适合临床应用的检测高产 Amp C酶阴沟肠杆菌的方法。方法 在标准头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南纸片上分别附加 0、10、2 0、30、4 0、5 0 μg氯唑西林 ,按标准纸片扩散试验程序分别测定未附加氯唑西林时和附加氯唑西林后上述纸片对 10 8株受试菌的抑菌环直径 ,根据氯唑西林对 4种抗生素的增效作用判断受试菌是否高产 Amp C酶 ,检测结果与头孢西丁三维试验的结果进行对比。结果 三维试验证实 ,在 10 8株阴沟肠杆菌中 ,高产 Amp C酶菌株 32株 ,非高产 Amp C酶菌株 76株。以 5 0 μg氯唑西林为酶抑制剂时 ,如果分别考虑头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南作为药敏指示剂时的检测结果 ,双纸片氯唑西林增效试验的阳性率分别为 90 .6 % (2 9/ 32 )、6 8.8% (2 2 / 32 )、6 5 .6 % (2 1/ 32 )、5 9.4 % (19/ 32 ) ;如果同时考虑头孢他啶和头孢噻肟 (或头孢曲松 )作为药敏指示剂时的检测结果 ,双纸片氯唑西林增效试验的阳性率达到了 10 0 % (32 / 32 )。同样条件下 ,用双纸片氯唑西林增效试验检测 76株非高产 Amp C酶的阴沟肠杆菌 ,未发现假阳性菌株。结论 以 5 0 μg氯唑西林为酶抑制剂、联合使用头孢他啶和头孢噻肟 (或头孢曲松 )作为药敏指示剂 。

邻氯青霉素单克隆抗体的制备及特性鉴定

采用碳化二亚胺法,将邻氯青霉素(cloxacillin)与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术获得了一株能稳定分泌抗邻氯青霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株2H8-B1-F4。间接ELISA方法测定,抗体亚类为IgG1,其细胞上清抗体效价为1∶1000,腹水效价为1∶4×105。与其结构类似物苯唑青霉素、双氯青霉素的交叉反应率为21.3%和19.6%,和氨苄青霉素、羟氨苄青霉素和苄青霉素无交叉反应。体外传代培养和冻存复苏后抗体分泌稳定。为进一步研制检测邻氯青霉素的ELISA试剂盒奠定基础。

苄星氯唑西林乳房注入剂无菌检查方法研究

本试验旨在建立苄星氯唑西林乳房注入剂无菌检查法并进行验证。采用离心—薄膜过滤—酶中和相结合的方法,按照《中国兽药典》2010年版一部附录进行试验。结果显示采用离心—薄膜过滤—酶中和相结合的方法,以0.5%聚山梨酯-80pH 7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液冲洗,冲洗量400mL/膜,在最后的培养基中加入不少于300万单位的青霉素酶可有效消除样品对各试验菌株的抗菌活性;验证试验结果显示各验证菌生长良好,各供试品管均未见菌生长。结果表明本试验成功建立了可靠、准确、可用于苄星氯唑西林乳房注入剂的无菌检查法。

HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量

用阳离子交换柱的HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠／氯唑西林钠中氨苄西林和氯唑西林的含量。色谱条件：采用Hypersil SCX柱，磷酸盐缓冲液（0.01mol／L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH值6．0）：乙腈（90：10）为流动相，检测波长225nm。氨苄西林和氯唑西林分别在45-134和44～131μg／ml范围内呈良好的线性关系，日内RSD分别为0．5％和0．6％，回收率分别为99．9％和100．0％，含量测定结果与国家药品标准方法所得结果相符。

国产注射用氯唑西林钠的质量分析与研究

目的研究国产注射用氯唑西林钠的质量和质量标准中需要完善的指标。方法按照2014年度国家药品评价性抽验计划总体要求,采用法定标准对23批抽验样品进行了法定检验;并建立了用于探索性研究的有关物质、聚合物和残留溶剂检测等多个方法。结果法定检验结果显示23批注射用氯唑西林钠合格率为100%。探索性研究提示现行标准未能分离并有效控制产品中致敏性高分子聚合物杂质的含量。通过探索性研究,对产品中含量高达0.5%的杂质进行了结构确认和来源分析,并对生产工艺提出了改进建议。结论目前国产注射用氯唑西林钠的产品质量基本能符合现行标准要求。但现行标准存在缺陷,需进一步完善。

HPLC法同时测定复方阿莫西林氯唑西林钠胶囊的含量及有关物质

目的:建立同时测定阿莫西林氯唑西林钠胶囊的含量和有关物质的HPLC方法。方法:用C_(18)(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈:0.02mol·L^(-1)磷酸盐缓冲液(pH5.0)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0ml·min^(-1),检测波长230nm。结果:阿莫西林和氯唑西林均在0.10～0.60mg·ml^(-1)浓度范围内呈良好的线性关系。阿莫西林的平均回收率为99.4%,RSD=0.1%(n=9)。氯唑西林的平均回收率为99.4%,RSD=0.1%(n=9)。结论:方法可靠、简便、准确。可作为复方阿莫西林氯唑西林钠胶囊的含量和有关物质的质量控制。

耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的：通过对耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检测及其耐药性分析,提示其主要耐药机制,指导临床合理用药.方法：采用氯唑西林增效试验测定AmpC酶,采用双纸片确诊试验测定ESBLs,并采用最小抑菌浓度法（MIC法）检测12种常用抗菌药物对这些菌株的体外抗菌活性.结果：64株受检菌中共检出高产AmpC酶菌29株,产ESBLs菌32株,阳性率分别为45.3%,50%.单产AmpC酶组对氨曲南、头孢曲松、哌拉西林、哌拉西林/三唑巴坦均存在不同程度的耐药（45.2%～68.5%）,其耐药率明显高于非产酶组,两者相比差异具有显著性（P＜0.05）.而单产AmpC酶组和非产酶组对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、环丙沙星、头孢唑林的耐药率均较高（57.7%～94.2%）;对阿米卡星、头孢吡肟、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率均较低（0%～34.6%）,两者相比差异无显著性（P＞0.05）.结论：耐头孢西丁肠杆菌科细菌中AmpC酶的检出率较高,高产AmpC酶细菌多呈多重耐药.临床可采用碳青霉烯类抗菌药物或4代头孢菌素治疗高产AmpC酶菌引起的感染,也可根据药敏试验结果选用头孢哌酮/舒巴坦或阿米卡星等抗菌药物治疗.

氯唑西林对阴沟杆菌β-内酰胺酶的抑制及其与头孢他啶的协同抗菌作用

采用紫外分光光度法比较了氯唑西林和舒巴坦对头孢他啶耐药阴沟杆菌β－内酰胺酶的抑制作用，并对氯唑西林与头孢他啶协同抗耐药菌的作用进行了探讨。结果表明：细菌对头孢他啶耐药后，对其它β－内酰胺类抗生素也呈现交叉耐药；以头孢噻啶或头孢孟多为底物时，氯唑西林（１～５μｇ／ｍｌ）对头孢他啶耐药菌株的β－内酰胺酶有明显抑制作用；氯唑西林与头孢他啶联合对耐药菌呈协同抗菌作用；未见两药间的拮抗效应。

氯唑西林片剂与胶囊剂的人体生物等效性

目的评价氯唑西林片剂与胶囊剂在人体内的生物等效性。方法20名健康男性受试者随机交叉给药,单剂量口服500 mg受试制剂氯唑西林片和参比制剂氯唑西林钠胶囊,采用反相高效液相色谱法测定氯唑西林的血药浓度,用3P97软件进行药动学参数计算和生物等效性评价。结果受试制剂和参比制剂的主要药动学参数:t_(1/2)分别为(1.3±s 0.3)和(1.21±0.26)h,c_(max)分别为(14±4)和(15±4) mg·L^(-1),t_(max)分别为(0.73±0.26)和(0.74±0.17)h,AUC_(0～t)分别为(23±5)和(24±6)mg·h·L^(-1),AUC_(0～∞)分别为(23±5)和(25±6)mg·h·L^(-1),经方差分析和双单侧t检验显示,主要药动学参数无显著差异;受试制剂的相对生物利用度为(98±27)%。结论2种氯唑西林制剂具有生物等效性。

反相高效液相色谱法同时测定氨苄氯唑西林中两组分的含量

目的:用RPHPLC法同时测定注射用氨苄氯唑西林的含量。方法:色谱柱μBondapak C18；以0.035 mol·L-1磷酸二氢钾(pH6.5)甲醇(46∶54)为流动相，咖啡因为内标，检测波长为225 nm。结果:氨苄西林、氯唑西林在5～40 μg·ml-1的浓度范围内，线性关系良好；平均回收率分别为99.5%(RSD=1.3%，n=9)，103.1%(RSD=2.0%，n=9)，与USP(ⅩⅩⅢ版)比较无显著性差异(P＞0.05)。结论:该方法简单、快速、准确。

三种AmpC酶表型检测方法比较

目的对革兰阴性菌产AmpC酶的检测方法进行评价，并寻找一种适合临床常规应用的AmpC酶检测方法。方法对39株耐头孢西丁的革兰阴性菌同时进行改良Hodge试验、三维试验、氯唑西林（CLO）双纸片协同试验和ampC基因聚合酶链反应（PCR）检测，比较4种方法的结果。结果39株革兰阴性杆菌中，改良Hodge试验、三维试验和CLO双纸片协同试验检出产AmpC酶的阳性率分别为38．5％、43．6％和28．2％，3种方法AmpC酶检出率的差异无统计学意义（P〉0．05）。与PCR结果比较，改良Hodge试验特异性为87％，敏感性为75％；三维试验的特异性为78％，敏感性为75％；CLO双纸片协同试验特异性为87％，敏感性为50％。PCR显示ampC基因阳性率为41％（16／39），对16株阳性菌进行ampC基因测序，测序结果与基因数据库内相应的ampC核酸序列比对发现，同源性均在98％～100％之间。结论改良Hodge试验可作为一种操作快速、简便的筛选试验检测革兰阴性菌产AmpC酶的情况，而CLO双纸片协同试验可作为一种操作简便的排除产AmpC酶试验应用于实验室，但在准确性上低于改良Hodge试验。

AmpC酶检测方法的探讨

目的建立简便检测肠杆菌科细菌中Amp C酶的方法。方法分别采用双纸片确证法和多剂量协同法检测35株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,并用三维试验和Amp C酶酶量直接测定法进行对比,同时检测这些菌产ESBL的情况。结果双纸片确证法检测出12株Amp C酶,不受ESBL的干扰,与直接酶量检测法完全一致,敏感性高于三维试验,多剂量协同法敏感性较差。结论双纸片确证法可作为临床检测AmpC酶的方法。

离子对色谱法测定注射用氨苄西林钠氯唑西林钠的含量

目的 建立离子对色谱法测定注射用氨苄西林钠氯唑西林钠含量的方法.方法 采用C18柱,缓冲盐溶液（内含0.01 mol·L^-1十六烷基三甲基溴化铵和0.01 mol·L^-1磷酸二氢钾）（用氢氧化钾试液调节pH值为6.5）-乙腈（50∶50）为流动相,流速1.0 mL·min^-1,检测波长230 nm.结果 氨苄西林和氯唑西林的线性范围分别为0.06～1.67 mg·mL^-1和0.06～1.54 mg·mL^-1,r均为0.999 9;平均回收率分别为99.9%和99.8%.结论 本法简便、快速、准确,可用于注射用氨苄西林钠氯唑西林钠的含量测定.

氯唑西林血药浓度HPLC测定方法的研究

目的:建立氯唑西林血药浓度的高效液相色谱分析方法。方法:以苯唑西林为内标,用乙腈为沉淀剂处理人血浆样品,分析柱为 SinoChrom ODS-BP(5μm,250mm×4.6mm),流动相为0.02mol·L^(-1)磷酸二氢钠缓冲液-乙腈(65:35,用磷酸调pH 为4.6),流速1.10mL·min^(-1),柱温30℃,在225nm 波长处检测。按内标法定量。结果:血药浓度线性范围为0.25～40.0μg·mL^(-1)(r=0.9994),最低检测限0.20μg·mL^(-1)(S/N>3),提取回收率为92.5%～100.5%(n=5),方法回收率为96.2%～100.8%(n=5),日内和日间 RSD(n=5)分别为1.78%～4.05%和1.96%～7.36%。结论:本方法简便、准确、精密度高、重现性好,适用于氯唑西林人体内药代动力学研究及人体生物等效性研究。

HPLC法用于氯唑西林钠胶囊溶出度的测定

目的:建立了氯唑西林钠胶囊溶出度的HPLC测定方法。方法:色谱条件:采用Lichrospher C_(18)柱(250mm×4.0mm,5μm),以0.02mool/L磷酸二氢钾(用氢氧化钠试液调节pH值为5.0)-乙腈(75∶25)为流动相,检测波长225nm。结果:氯唑西林钠在20.00～200.0μg/mL范围内呈良好线性,r=0.9999,平均加样回收率为100.4％(RSD=0.3％)。溶出度方法参照中国药典2000年版二部。本法排除了胶囊壳与辅料的干扰,数据准确合理。结论:该法精密准确、简单可行,适用于氯唑西林钠胶囊体外溶出试验的质量控制。

多剂量协同法检测AmpCβ-内酰胺酶

目的 建立一种简便有效的检测AmpCβ 内酰胺酶的方法。 方法 以邻氯西林作为AmpCβ 内酰胺酶的抑制剂 ,采用多剂量协同法检测 14株肠杆菌科细菌中的AmpC并作分型 ,用双纸片确证法和纸片协同法检测超广谱 β 内酰胺酶 (ESBL)。同时用亚胺培南作诱导试验 ,用琼脂稀释法测定诱导前后细菌对 4种抗生素的MIC。结果 14株菌中有 3株产持续高产型AmpCβ 内酰胺酶 ,7株产诱导高产型AmpCβ 内酰胺酶 ;6株产ESBL。产诱导高产型AmpCβ 内酰胺酶细菌诱导前后MIC变化较大 ,而产持续高产型AmpCβ 内酰胺酶细菌诱导前后MIC变化不大。结论 多剂量协同法方法简便 ,成本低廉 ,可作为临床微生物实验室对产AmpCβ

耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的 对耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）进行检测及其耐药性分析，提示其主要耐药机理，指导临床合理用药。方法：采用氯唑西林增效试验测定AmpC酶，采用双纸片确诊试验测定ES-BLs，并采用最小抑菌浓度法（MIC法）检测12种常用抗生素对这些菌株的体外抗菌活性。结果：320株受检菌中共检出高产AmpC酶菌145株，产ESBLs菌160株，阳性率分别为45．3％、50％。单产AmpC酶菌对氨曲南、头孢曲松、哌拉西林、哌拉西林／三唑巴坦均存在不同程度的耐药（45．2％-68．5％），其耐药率明显高于非产酶菌，两者相比有统计学意义（P〈0．05）。而单产AmpC酶菌和非产酶菌对氨苄西林、氨苄西林／舒巴坦、环丙沙星、头孢唑啉的耐药率均较高（57．7％-94．2％）；对阿米卡星、头孢吡肟、亚胺培南、头孢哌酮／舒巴坦的耐药率均较低（0％-34．6％），两者相比无统计学意义（P〉0．05）。结论：耐头孢西丁肠杆菌科细菌中高产AmpC酶的检出率较高，高产PunpC酶细菌多呈多重耐药。临床可采用碳青霉烯类抗生素或4代头孢菌素作为高产AmpC酶菌感染的经验治疗，也可根据药敏试验选用头孢哌酮／舒巴坦或阿米卡星等抗生素治疗。

苄星氯唑西林国家对照品的研制

为了研制首批苄星氯唑西林国家对照品。对质量标准中的关键项目进行考察。采用红外分光光度法、高效液相色谱法对原料进行鉴别,采用高效液相色谱法进行含量测定。结果显示,红外光吸收图谱与USP溯源对照品图谱一致,高效液相色谱法测定氯唑西林与二苄基乙二胺的含量和为92.1%。研究建立的苄星氯唑西林国家对照品可用于苄星氯唑西林及其制剂的鉴别。

氯唑西林可视化免疫亲和凝胶柱检测方法研究

为了建立氯唑西林(Cloxacillin,CLOX)可视化免疫亲和凝胶柱检测方法。实验采用活化酯法,将辣根过氧化物酶(HRP)与氯唑西林偶联,制得氯唑西林酶标抗原,并通过紫外光谱扫描鉴定表明CLOX酶标抗原合成成功。实验采用恒温振荡法,将溴化氰活化的琼脂糖凝胶分别与氯唑西林抗体、HRP抗体偶联制得氯唑西林抗体胶和HRP抗体胶,作为亲和凝胶柱的检测层与质控层。建立氯唑西林可视化免疫亲和凝胶柱分析方法,确定了该方法在酶标抗原的稀释倍数为4000、抗体胶稀释倍数为10、HRP胶稀释倍数为20、样品稀释液pH值为5.7、加样时间为60 s条件下,达到最佳工作状态。该方法检测限为25μg/L,特异性强,与哌拉西林、阿莫西林、氨苄青霉素、四环素、呋喃它酮、甲砜霉素、链霉素均无交叉反应,动物源食品实际样品中氯唑西林检出限为25μg/kg。该方法便捷、快速、可视化,适合作为高通量筛选氯唑西林的有效检测手段。