卵巢癌组织中clusterin蛋白表达和细胞凋亡检测

目的:探讨clusterin蛋白在卵巢癌中的表达及其与细胞凋亡的关系和临床意义。方法:制作86例卵巢癌的组织芯片,分别应用免疫组织化学和TUNEL方法,检测卵巢癌中clusterin蛋白表达及细胞凋亡情况,结合临床病理学资料,分析其临床意义。结果:在组织芯片中,73例卵巢癌成功进行了免疫组化和TUNEL染色,其中38例(52%)出现clusterin蛋白的过度表达,在不同临床分期的卵巢癌中,clusterin蛋白表达有显著性差异(P<0.05),clus-terin蛋白过度表达多见于临床晚期(Ⅱ期及以上)的卵巢癌。另外,clusterin过度表达的肿瘤多呈现低的细胞凋亡指数(apoptoticindex,AI),而clusterin正常表达的肿瘤,则大多数表现为高AI值(P<0.05)。结论:clusterin蛋白在卵巢癌中过度表达与肿瘤的临床分期密切正相关,与肿瘤细胞凋亡显著负相关。

上调核型Clusterin基因对A549细胞生物学行为的影响

目的:观察上调核型Clusterin(nuclear clusterin,nCLU)的表达对人肺腺癌A549细胞生物学行为的影响。方法:构建插入核型Clusterin基因的真核表达质粒,采用脂质体法转染A549细胞,潮霉素B筛选得到稳定转染的细胞株以及对照细胞株;Western印迹法检测转染前后A549细胞中Clusterin蛋白的表达;CCK-8法检测被转染细胞体外增殖的改变;FCM法检测细胞周期分布的改变;体外迁移和侵袭实验检测细胞体外运动迁移和侵袭能力的变化。结果:nCLU表达的上调,可使A549细胞体外增殖能力明显减慢;G0/G1期细胞比例明显增加,由原来的(33.54±2.10)%上升到(63.31±4.30)%;体外迁移及侵袭能力明显减弱(P<0.05)。结论:上调nCLU的表达可明显抑制肿瘤细胞的增殖,降低细胞的运动迁移和侵袭能力。

抗clusterin反义核酸治疗提高肺癌H460细胞放射敏感性的实验研究

目的:研究抑制clusterin的表达对肺癌H460细胞放射敏感性的影响。方法:用脂质体转染的方法将抗clusterin反义核酸转染肺癌H460细胞,以137Cs作为放射源对肺癌细胞进行放射干预。用流式细胞仪检测抗clusterin反义核酸治疗和放射干预对肺癌细胞凋亡的影响,用MTT法和克隆形成分析方法检测抗clusterin反义核酸治疗和放射干预对肺癌细胞增殖的影响。结果:抗clusterin反义核酸特异性抑制了分泌型clusterin的表达,而对核型clusterin的表达无明显作用。单纯放射干预或单纯反义核酸转染将凋亡细胞数提高了10%,反义核酸治疗联合放射干预使肺癌H460细胞的凋亡细胞数增加了25%,和单纯放疗或单纯反义核酸转染组比较有显著性差异(P<0.01)。MTT和体外克隆计数分析显示抗clusterin反义核酸治疗联合放疗干预显著抑制了肺癌H460细胞的增殖(P<0.01)。结论:体外实验提示抗clusterin反义核酸治疗可以提高肺癌细胞对放射的敏感性。

Clusterin和Survivin在大肠癌中的表达及意义

目的研究调亡抑制蛋白Clusterin和Survivin在大肠癌组织和相应癌旁组织中的表达情况及意义。方法应用免疫组织化学法检测100例大肠癌癌组织和相应的癌旁正常组织的Clusterin和Survivin的表达情况,并进行相关的分析。结果Clusterin在大肠癌组织中其阳性率为67.0%,癌旁正常组织为18.0%,两者差异十分显著(P<0.01);Survivin在大肠癌组织中其阳性率为58%,癌旁正常组织为3%,两者差异十分显著(P<0.01);Clusterin和Survivin在大肠癌中的表达具有一定的相关性(r=0.225,P<0.01)。结论Clusterin和Survivin在大肠癌组织中具有较高的表达率在大肠癌中的表达呈正相关性,表明可能是大肠癌的生存基因,这为大肠癌的基因治疗提供了新的途径。

Clusterin在Anip973/CDDP细胞株中的表达及其意义

背景与目的聚集素(Clusterin,CLU)在肿瘤发生发展过程中的作用及变化特点是国内外近年来关注的一个热点,但有关CLU在肺癌中表达变化与抗癌药物敏感性机制的研究目前仍无相关报道。本研究比较CLU在Anip973与Anip973/CDDP两种细胞系中的表达,探讨CLU与非小细胞肺癌耐药关系。方法采用Western blot从蛋白水平比较CLU在Anip973和Anip973/CDDP中的差异表达,并通过流式细胞仪检测CLU与p53、Bax之间的关系。结果在蛋白水平,CLU在Anip973/CDDP中的表达都明显高于Anip973(P<0.01);p53在Anip973/CDDP中的表达明显高于Anip973(P<0.01);bax在Anip973/CDDP中的表达与Anip973相比无统计学意义(P>0.05)。进入G0期-G1期的Anip973/CDDP耐药细胞明显多于非耐药细胞,而进入S期、G2期-M期的Anip973/CDDP耐药细胞明显少于非耐药细胞。结论CLU与NSCLC的CDDP耐药性相关;CLU、p53在Anip973/CDDP中呈异常表达,提示CLU基因和p53基因可能共同参与非小细胞肺癌耐药的发生。

慢病毒介导的Clusterin基因沉默抑制膀胱癌EJ细胞增殖及转移

目的探讨慢病毒介导的Clusterin(CLU)基因沉默的RNA干扰效果及其对膀胱癌EJ细胞增殖和转移的影响。方法构建靶向CLU基因的慢病毒干扰载体,用Westernblot检测其对膀胱尿路上皮癌细胞株EJ的干扰效果,用MTT、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验等方法分别检测CLU沉默后膀胱癌EJ细胞在增殖、侵袭和转移等方面的细胞生物学改变。结果靶向CLU基因的慢病毒干扰载体感染膀胱癌EJ细胞后,CLU基因在蛋白水平的表达明显下降。EJ细胞的增殖、侵袭和转移能力均受到抑制。结论 CLU慢病毒干扰载体可有效沉默膀胱癌EJ细胞内源性CLU基因,抑制膀胱癌EJ细胞的增殖、侵袭和转移。

Clusterin蛋白过度表达与上皮性卵巢癌患者预后的关系

目的:探讨clusterin蛋白表达与上皮性卵巢癌临床病理学参数和预后的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测clusterin蛋白在10例正常卵巢,10例卵巢良性腺瘤和68例上皮性卵巢癌组织中的表达;结合上皮性卵巢癌患者的临床病理学和预后资料,分析它们之间的相关性。结果:本组10例正常卵巢和10例卵巢良性腺瘤组织均呈clusterin蛋白的阴性或低水平的表达;在68例上皮性卵巢癌中,36例(53%)肿瘤出现clusterin蛋白过度表达,而且clusterin蛋白表达与肿瘤的临床分期有显著的相关性(P<0.05),Clusterin蛋白过度表达明显地多见于临床晚期(Ⅲ-Ⅳ期)的卵巢癌。另外,上皮性卵巢癌中clustern蛋白表达与肿瘤的预后显著相关,Clusterin蛋白过度表达的卵巢癌患者的生存时间明显短于正常表达者(log-rank=4.108,P=0.043)。结论:上皮性卵巢癌组织中clusterin蛋白的过度表达可以作为临床评估该肿瘤预后的新分子标记物之一。

卵巢浆液性交界性肿瘤中S100A4、bcl-2、clusterin、K-ras的表达及临床意义

目的:探寻卵巢浆液性交界性肿瘤(SBOT)中clusterin、bcl-2、K-ras及S100A4的表达特点及变化规律,并与相应的良、恶性肿瘤比较,为诊断及鉴别诊断SBOT提供更有效的辅助指标。方法:免疫组化法分析30例SBOT中S100A4、bcl-2、clusterin、K-ras的表达及它们的相关性,并以囊腺瘤和囊腺癌各30例为对照。结果:S100A4、clus-terin、K-ras在浆液性肿瘤的表达随着恶性程度增高呈增加趋势,bcl-2则相反。有腹水患者clusterin阳性率明显高于无腹水者(P=0.0235);有腹膜种植的患者S100A4阳性率明显高于无腹膜种植者(P=0.0242)。且两者表达呈正相关。结论:S100A4高表达往往提示肿瘤的恶性程度高。clusterin与S100A4结合有可能成为能预测卵巢浆液性肿瘤病情发展及指导临床治疗的有价值标记物。

Clusterin在Anip973/NVB细胞株中的表达及其意义

背景与目的通过检测聚集素(Clusterin,CLU)在耐药非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系Anip973/Navelbine(Anip973/NVB)中的表达,并以Anip973作为对照。证实CLU与NSCLC细胞系对NVB的耐药相关。同时,检测CLU、p53(突变型)、Bax在正常肺组织、肺癌组织中的表达,探讨其与肺癌发生发展的关系。方法采用WesternBlot法从蛋白水平比较CLU在Anip973、Anip973/NVB中的差异表达,并通过流式细胞仪检测CLU阳性表达率、CLU与细胞周期、CLU与p53、Bax之间的关系。结果CLU与p53在NSCLC耐药细胞系Anip973/NVB中的表达均显著高于Anip973(P<0.01),Bax在NSCLC耐药细胞系Anip973/NVB中的表达于Anip973相比无统计学差异(P>0.05)。进入G0-G1期的Anip973/NVBNSCLC耐药细胞明显多于非耐药细胞,而进入S期G2-M期的Anip973/NVBNSCLC耐药细胞明显少于非耐药细胞。结论CLU与p53在NSCLC耐药细胞系中呈高表达,表明CLU与NVB的耐药相关。

脂质体介导Clusterin反义寡核苷酸抑制胰腺癌细胞侵袭力及增强5-FU化疗敏感性的实验研究

目的研究Clusterin反义寡聚脱氧核苷酸(Clusterin ASO)对胰腺癌细胞侵袭力及5-FU化疗敏感性的影响。方法采用脂质体法将Clusterin ASO转染PANC-1细胞24 h,然后将该细胞暴露于不同浓度的5-FU中,TUNEL法检测72 h后的细胞凋亡指数,MTT检测细胞增殖并计算IC50。观察Clusterin ASO转染对PANC-1细胞体外侵袭力的抑制作用。采用免疫组化,Western blot和RT-PCR技术检测不同处理组细胞中Clusterin和其mRNA和蛋白表达。结果 Clusterin ASO转染可有效沉默PANC-1细胞内Clusterin mRNA及蛋白表达;PANC-1细胞的5-FU IC50为9±0.7,PANC-1/Clusterin ASO的5-FU IC50为1.06±0.3,敏感性增加了9倍。5-FU以剂量依赖方式诱导PANC-1细胞凋亡,但对PANC-1/Clusterin ASO细胞所诱导的凋亡比PANC-1细胞更明显。重组细胞基膜侵袭实验显示,PANC-1细胞与PANC-1/Clusterin ASO细胞的穿透基膜细胞数分别为213±18个和43±8个/高倍镜(×200),差异有统计学意义(P<0.05)。结论靶向Clusterin抑制胰腺癌细胞侵袭力和增殖,并增强胰腺癌细胞对5-FU的化疗敏感性。

日本蟾蜍聚集素cDNA的克隆与序列分析

为研究蟾酥、蟾衣、蟾皮中多肽类有效成分,通过菌落PCR对日本蟾蜍(Bufo japonicus formosus)皮肤cDNA质粒文库进行了筛选,获得了聚集素(clusterin,CLU)全长cDNA序列(GenBank登录号为JX035891)并对其进行了生物信息学分析。日本蟾蜍clucDNA全长为1 616 bp,包括1 332 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)、5'端30 bp及3'端254 bp的非翻译区(untranslated region,UTR)。根据cDNA序列推导的日本蟾蜍CLU前体蛋白由443个氨基酸残基组成,其中含20个氨基酸残基组成的信号肽,6个糖基化位点,10个可形成二硫键的半胱氨酸残基和2个卷曲螺旋区域。氨基酸序列同源性分析显示,日本蟾蜍CLU与非洲爪蟾(Xenopus laevis)的同源性为65%,与其他7种动物的同源性则介于41%-48%之间。

排除视网膜特异性表达簇样蛋白1基因变异与中国高度近视人群的相关性

目的 筛查视网膜特异性表达簇样蛋白 1( clusterin- like protein 1,CL UL 1)基因编码区域变异与中国高度近视人群的相关性。方法 采用 PCR- SSCP检测 2 0 4例中国人高度近视先证者 CL U L1基因所有编码外显子及两侧序列有无突变 ;对有突变的外显子区域进行克隆测序。结果 仅发现 1例患者在 CL U L1基因外显子 2的密码子 10第 3个核苷酸 GT G→ GT T杂合同义突变 ,没有氨基酸的改变 ( Val10 Val)。CL UL1基因其余外显子无突变和多态现象。结论 初步排除位于 18p11.3D18S6 3～ D18S5 2 0 .8c M范围内视网膜特异表达的 CL U L 1基因与中国高度近视人群的相关性 ;CL UL

2型糖尿病与簇蛋白基因关联的初步研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)与簇蛋白(Glu)基因多态性的关联。方法聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)和DNA测序技术分析62例T2DM患者及60例正常对照者的Glu基因外显子2和外显子5基因多态性。结果Glu基因外显子2发现1个多态位点:1963(+A);外显子5发现3个多态位点:(1)7476(-A),(2)7534(-C),(3)7521C→T。结论Glu基因外显子2和外显子5多态性在2型糖尿病组和正常对照组多态性位点基因频率分布差异有统计学意义。因此,Clu基因外显子2和外显子5多态性可能与T2DM易感性有关联。

CLU基因干扰肾癌786-O细胞差异基因表达的研究

目的:观察CLU基因干扰前后肾癌细胞株786-O的基因表达谱差异,探讨肾细胞癌与CLU基因相关基因及传导通路。方法:CLU基因干扰慢病毒载体及空病毒载体转染肾癌786-O细胞样本与RocheNimbleGen表达谱芯片杂交,比较干扰前后基因表达谱差异,并行GO分析及Pathway分析。结果:六份样本中,共筛选出差异表达基因1731个,其中共同上调基因1154个,共同下调基因577个。差异表达基因中生物进程、细胞成分、分子功能方面均以下调为主。通路分析显示29条通路上调,如细胞黏附、异体排斥、吞噬体。31条通路下调,如mTOR、MAPK、非小细胞肺癌。结论:采用全基因组芯片检测CLU基因干扰后肾癌786-O基因表达谱获得差异表达基因,为以CLU基因为靶点的肾癌基因研究提供了实验依据。

聚集素的结构特点与功能及其在肝细胞癌诊疗中的作用

肝细胞癌(HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一,其发生、发展机制十分复杂。聚集素(CLU)被证实对HCC的发生、发展起重要作用。综述了CLU的分子结构特点和生物学功能及其对HCC的诊断价值,分析了化疗多药耐药联系和未来靶向治疗前景。认为CLU有望作为HCC新的分子标志物及靶向治疗位点。

丛生蛋白在人类睾丸精原细胞瘤中表达的研究

目的:探讨丛生蛋白在睾丸精原细胞瘤中的存在和表达。方法:收集13例睾丸精原细胞瘤患者和16例前列腺癌去势术后患者的肿瘤组织及其正常的睾丸组织。免疫组织化学法分析比较2组丛生蛋白存在情况。实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹分析(Western blot analysis)分别检测丛生蛋白在转录和翻译水平上的表达差异。结果:RT-PCR结果表明,精原细胞瘤丛生蛋白m RNA的表达低于正常组(仅占正常组织中表达量的13%)。Western blot结果显示在精原细胞瘤中丛生蛋白表达明显低于正常组织。免疫组化结果显示,在正常睾丸组织中丛生蛋白主要表达于间质细胞、支持细胞和成熟的生精细胞,而在精原细胞瘤组织中表达降低。结论:睾丸精原细胞瘤和睾丸正常组织中存在丛生蛋白同种异质二聚体的分泌型。精原细胞瘤睾丸组织中丛生蛋白的表达降低。

CLU基因多态性与缺血性脑卒中后癫痫风险的关系分析

目的:探讨聚集素蛋白(CLU)基因单核苷酸多态性(SNPs)与缺血性脑卒中后癫痫的遗传学关系。方法:2017年1月至2021年8月,共纳入249例缺血性脑卒中后癫痫患者(癫痫组)和250例没有继发性癫痫的缺血性脑卒中患者(对照组)。选取3个CLU单核苷酸多态性(rs11136000、rs9314349和rs9331949),通过SNaPshot检测进行基因分型,并评估它们与缺血性脑卒中后癫痫的关系。采用酶联免疫吸附测定法检测脑卒中发病入院时的血清CLU水平。结果:癫痫组与对照组rs11136000位点基因型和等位基因分布频率差异有统计学意义(P<0.05),但是rs9314349位点和rs9331949位点基因型分布及等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。与TT基因型相比,CC基因型和TC基因型与脑卒中后癫痫风险降低相关(P<0.05)。女性和男性CLU rs11136000位点TC/CC基因型频率降低与脑卒中后癫痫的关系显著(P<0.01)。经多因素Logistic回归分析,CLU基因rs11136000位点TC和CC基因型都是脑卒中后癫痫发病风险的独立保护因素(P<0.05)。癫痫组患者血清CLU水平显著低于对照组[73.10(57.70,100.50)μg·ml^(-1) vs.66.86(54.60,82.60)μg·ml^(-1),Z=-3.619,P<0.001]。在癫痫组中,CLU基因rs11136000位点TC/CC基因型患者(C等位基因携带者)血清CLU水平显著高于TT基因型患者(P<0.05)。结论:CLU基因rs11136000位点TC/CC基因型分布频率降低与缺血性脑卒中后癫痫易感性升高有关。

Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁中簇集素的表达水平及其临床意义

目的探讨Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁中簇集素(Clusterin)的表达水平及其临床意义。方法选择13例Stanford A型主动脉夹层患者为病例组,9例扩张型心肌病或冠心病患者为对照组。收集两组患者的主动脉壁标本,测量病例组患者各段主动脉直径。通过苏木精-伊红染色及EVG染色观察两组组织形态和弹力纤维断裂情况;检测两组标本中Clusterin mRNA和蛋白的表达水平;分析病例组患者Clusterin mRNA表达水平与各段主动脉直径的相关性。结果与对照组比较,病例组主动脉壁中平滑肌细胞明显减少、弹力纤维断裂增多,Clusterin mRNA和蛋白的相对表达水平均升高(均P<0.05)。免疫组化染色显示,Clusterin主要定位于细胞质及细胞外基质中,病例组主动脉壁中Clusterin的相对表达水平亦高于对照组(均P<0.05)。病例组患者Clusterin基因的相对表达水平与降主动脉、腹腔干处主动脉直径均呈正相关(均P<0.05)。结论Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁中Clusterin的基因和蛋白水平均升高;Clusterin表达水平上调可能与主动脉夹层的发生和发展均相关。

软骨母细胞瘤样骨肉瘤穿刺标本免疫组化H3F3B、IMP3、Clusterin联合H3F3B基因突变检测的意义

目的 探讨免疫组化H3F3B、IMP3、Clusterin联合H3F3B基因突变检测在软骨母细胞瘤样骨肉瘤诊断及鉴别诊断中的应用价值。方法 收集佛山市中医院病理科2008年1月-2020年12月确诊的22例软骨母细胞瘤样骨肉瘤及25例软骨母细胞瘤的穿刺标本及对应的手术切除标本,应用免疫组化方法行H3F3B、IMP3及Clusterin检测,观察它们在肿瘤细胞的表达情况,对H3F3B阳性的软骨母细胞瘤样骨肉瘤行H3F3B基因突变检测,分析其突变情况。结果 IMP3在22例软骨母细胞瘤样骨肉瘤呈弥漫阳性,在25例软骨母细胞瘤均呈阴性;H3F3B在21例软骨母细胞瘤样骨肉瘤中呈阴性或散在弱阳性,1例为弥漫阳性;H3F3B在25例软骨母细胞瘤呈弥漫阳性;H3F3B阳性的软骨母细胞瘤样骨肉瘤均无H3F3B基因突变;Clusterin在22例软骨母细胞瘤样骨肉瘤及25例软骨母细胞瘤中呈灶状阳性或阴性。结论 H3F3B阴性、IMP3弥漫阳性支持软骨母细胞瘤样骨肉瘤的诊断;H3F3B弥漫阳性、IMP3阴性支持软骨母细胞瘤的诊断;H3F3B及IMP3均阳性更倾向软骨母细胞瘤样骨肉瘤的诊断。基因突变检测及免疫组化检测在H3F3B阳性的软骨母细胞瘤样骨肉瘤中缺乏一致性。

血清sST2、H-FABP、Clusterin对冠心病患者PCI术后主要不良心血管事件的预测价值分析

目的分析血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、凝集素(Clusterin)对冠心病患者经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary intervention,PCI)术后主要不良心血管事件(MACE)(死亡、再次心梗、靶血管再狭窄、靶血管血运重建、心衰再入院)的预测价值。方法纳入2020年6月至2022年6月期间在河南科技大学第三附属医院行急诊PCI的冠心病患者126例作为研究对象,根据术后6个月内是否发生MACE分为MACE组(n=27)、非MACE组(n=99)。比较两组一般临床资料、Gensini积分、炎症和氧化应激指标及术前血清sST2、H-FABP、Clusterin水平,采用Pearson相关性分析血清sST2、H-FABP、Clusterin水平与临床指标、炎症和氧化应激指标的相关性,采用logistics回归分析PCI术后6个月MACE的预测因素,构建预测模型,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析预测模型的可靠性,获取最佳截断值、ROC曲线下面积(AUC)、敏感度、特异度等信息。结果MACE组Gensini积分高于非MACE组(P<0.05),两组性别、年龄、体质量指数(BMI)、病史、饮酒史、病变血管支数差异均无统计学意义(P>0.05);MACE组血清CRP、WBC、SOD水平均高于非MACE组(P<0.05),血清GSH-PX水平低于非MACE组(P<0.05);MACE组血清sST2、H-FABP、Clusterin水平均高于非MACE组(P<0.05);Pearson相关性显示,血清sST2、H-FABP、Clusterin水平与Gensini积分及CRP、WBC、SOD水平均呈正相关(P<0.05),与GSH-PX水平呈负相关(P<0.05);logistics多因素分析显示,sST2、H-FABP、Clusterin均为PCI术后MACE的独立影响因素(P<0.05);ROC曲线显示,血清sST2、H-FABP、Clusterin及各指标联合预测PCI术后6个月发生MACE的敏感度/特异度分别为70.40%/73.70%、81.50%/79.80%、85.20%/70.70%、88.90%/83.80%,对应的AUC分别为0.765、0.854、0.794、0.929。结论血清sST2、H-FABP、Clusterin水平可能与PCI术后MACE的发生有关,联合检测对于术后6个月内发生MACE具有一定的预测价值。