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人睾丸圆形精子细胞在体外向长形精子细胞分化 被引量:7
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作者 蔡志明 石敏 +4 位作者 龙云 宋博 崔永言 朱辉 桂耀庭 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2006年第7期587-589,593,共4页
目的:探讨人睾丸生精细胞在体外培养条件下发生的分化。方法:取梗阻性无精子症患者睾丸活检标本,机械法离散睾丸细胞。①睾丸细胞混合培养,每24 h观察,计数分析长形精子细胞比率的变化;②显微操作挑取圆形精子细胞,观察单个细胞在微滴... 目的:探讨人睾丸生精细胞在体外培养条件下发生的分化。方法:取梗阻性无精子症患者睾丸活检标本,机械法离散睾丸细胞。①睾丸细胞混合培养,每24 h观察,计数分析长形精子细胞比率的变化;②显微操作挑取圆形精子细胞,观察单个细胞在微滴培养过程中变形分化的情况。结果:在添加卵泡刺激素、睾酮的HTF培养液中进行睾丸细胞混合培养,24 h后长形精子细胞比率较培养前显著增加(P<0.05);单个圆形精子细胞培养,可见到圆形精子细胞长出鞭毛转化为长形精子细胞,48 h的转化率为3.54%。Vero细胞条件培养液中人睾丸生精细胞的分化与HTF培养液中相同,两者无显著差异。结论:人睾丸组织的圆形精子细胞在体外可分化为长形精子细胞,Vero细胞条件培养液对此分化无促进作用。 展开更多
关键词 生精细胞 体外培养 分化 睾丸 人类
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生精细胞的体外培养 被引量:3
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作者 张晓丽 高英茂 +1 位作者 赵舒武 邴鲁军 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第10期881-884,共4页
目的:在体外培养中,观察精原细胞的增殖、分化和形态变化规律。方法:用胶原酶、透明质酸酶和胰蛋白酶分次消化法制取睾丸组织的细胞悬液,密度梯度离心法富集生精细胞,贴壁培养后观察生精细胞的存活、分裂和形态变化,并行AnnexinⅤ-FITC... 目的:在体外培养中,观察精原细胞的增殖、分化和形态变化规律。方法:用胶原酶、透明质酸酶和胰蛋白酶分次消化法制取睾丸组织的细胞悬液,密度梯度离心法富集生精细胞,贴壁培养后观察生精细胞的存活、分裂和形态变化,并行AnnexinⅤ-FITC/PI染色,采用激光共聚焦扫描显微镜检测细胞的凋亡情况。结果:睾丸组织细胞悬液中的体细胞在培养中较早贴壁,胞质形成多个突起;精原细胞贴壁较迟,贴壁后呈规则的圆形或卵圆形,以链状或团块状位于体细胞层之上,细胞分裂不完全,相互间以细胞间桥相连。AnnexinⅤ-FITC/PI染色显示,培养第2天时精原细胞已出现凋亡,但数量极少,后逐渐增多。结论:在本实验所提供的体外培养条件下,精原细胞能够存活并发生贴壁、分裂、分化等行为,但同时也有细胞凋亡。 展开更多
关键词 精原细胞 体外培养 细胞凋亡:小鼠
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人类睾丸生精细胞体外培养的初步研究 被引量:3
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作者 檀大羡 王植柔 +4 位作者 刘锋 罗开玲 卢晟盛 李莲军 卢克焕 《广西医学》 CAS 2005年第8期1136-1139,共4页
目的对人类生精细胞体外培养分化、成熟进行初步研究.方法将4例患者的睾丸组织制备成生精细胞,观察生精细胞体外培养后生精细胞的分化、成熟情况.结果 4例患者睾丸生精细胞经体外培养后均有不同程度的分化、成熟.初级精母细胞能分化为... 目的对人类生精细胞体外培养分化、成熟进行初步研究.方法将4例患者的睾丸组织制备成生精细胞,观察生精细胞体外培养后生精细胞的分化、成熟情况.结果 4例患者睾丸生精细胞经体外培养后均有不同程度的分化、成熟.初级精母细胞能分化为精子细胞,分化率平均为0.47%~1.50%;Sa期精子细胞能变形、成熟为Sc期精子细胞,成熟率为0.93%~5.72%.结论在该研究条件下,人类睾丸生精细胞体外培养能进一步分化、成熟. 展开更多
关键词 人类 睾丸 生精细胞 体外培养
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哺乳动物睾丸生精细胞的体外培养 被引量:3
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作者 朱培元 黄宇烽 沙家豪 《医学研究生学报》 CAS 2001年第5期449-451,共3页
哺乳动物精子发生是一个十分复杂的过程,影响因素众多.体外培养生精细胞一般有组织培养和细胞培养两类方法.目前,已有生精细胞成功地在体外从细线期精母细胞经2次减数分裂分化为精子细胞的报道,但精原细胞的分化和精子细胞的成熟仍是两... 哺乳动物精子发生是一个十分复杂的过程,影响因素众多.体外培养生精细胞一般有组织培养和细胞培养两类方法.目前,已有生精细胞成功地在体外从细线期精母细胞经2次减数分裂分化为精子细胞的报道,但精原细胞的分化和精子细胞的成熟仍是两个难点.建立生精细胞体外培养模型有助于研究精子发生的调控机制,可用于辅助生育技术,治疗精子发生阻滞的患者;对精子发生机制的进一步阐明,也会促进生精细胞体外培养研究的发展. 展开更多
关键词 哺乳动物 睾丸 生精细胞 体外培养 男性不育症 治疗
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小鼠生精细胞体外长期培养及超微结构分析 被引量:2
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作者 于洁 叶静 +4 位作者 张芳婷 万汇涓 尹美珺 房家智 蔡志明 《中国全科医学》 CAS CSCD 2006年第20期1689-1691,共3页
目的初步探讨新生小鼠睾丸组织中生精细胞在体外培养条件下的增殖分化条件,建立有效的生精细胞体外成熟模型。方法用酶法和Percoll不连续密度梯度法分离纯化新生小鼠睾丸生精细胞,获取富精原细胞层,采用自制小鼠睾丸组织培养液对分离纯... 目的初步探讨新生小鼠睾丸组织中生精细胞在体外培养条件下的增殖分化条件,建立有效的生精细胞体外成熟模型。方法用酶法和Percoll不连续密度梯度法分离纯化新生小鼠睾丸生精细胞,获取富精原细胞层,采用自制小鼠睾丸组织培养液对分离纯化后的细胞进行体外培养。用电子显微镜观察培养的细胞超微结构。结果新生小鼠生精细胞在用成年小鼠睾丸组织提取液配制的培养基中存活达194d。电子显微镜观察可见,培养后的细胞中含有精子细胞顶体样结构。结论采用小鼠睾丸组织制备的培养液培养的小鼠生精细胞可体外长期培养并显示出一定的分化趋势。 展开更多
关键词 生精细胞 体外培养 精子细胞 顶体 超微结构
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BrdU标记在大鼠生精细胞体外培养中的应用 被引量:2
6
作者 檀大羡 王植柔 +4 位作者 刘锋 卢晟盛 李莲军 卢克焕 李佳荃 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1508-1510,1513,共4页
目的探讨应用5-溴-2-脱氧尿苷(5-bromo-2-deoxy-uridine,BrdU)标记检测大鼠生精细胞体外的分化、发育情况。方法采用BrdU体内标记生精细胞的DNA,免疫细胞化学法跟踪观察大鼠生精细胞在体外培养中的分化、发育情况。结果培养前在体内标记... 目的探讨应用5-溴-2-脱氧尿苷(5-bromo-2-deoxy-uridine,BrdU)标记检测大鼠生精细胞体外的分化、发育情况。方法采用BrdU体内标记生精细胞的DNA,免疫细胞化学法跟踪观察大鼠生精细胞在体外培养中的分化、发育情况。结果培养前在体内标记BrdU的细胞为初级精母细胞,经培养后在BrdU标记的细胞中出现早期精子细胞。结论大鼠生精细胞体外培养过程中,应用BrdU标记能检测生精细胞的分化、发育情况。 展开更多
关键词 生精细胞 体外培养BrdU
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PHGPx在体外共培养山羊睾丸生精细胞中的定位研究 被引量:1
7
作者 施力光 荀文娟 +4 位作者 岳文斌 张春香 周汉林 侯冠 杨茹洁 《中国草食动物科学》 CAS 2012年第4期19-21,共3页
为探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)在雄性动物生殖机能中的作用及其在体外培养山羊睾丸生精细胞的定位,在已成功构建的山羊睾丸支持细胞-生精细胞共培养的基础上,制作细胞爬片,采用免疫细胞化学技术定位PHGPx的表达。结果显示,PHGP... 为探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)在雄性动物生殖机能中的作用及其在体外培养山羊睾丸生精细胞的定位,在已成功构建的山羊睾丸支持细胞-生精细胞共培养的基础上,制作细胞爬片,采用免疫细胞化学技术定位PHGPx的表达。结果显示,PHGPx在支持细胞、精原细胞中不表达,在圆形精子细胞细胞质检测到阳性表达产物。表明PHGPx在精子发生后期圆形精子的变态发育中起特定的调节作用,但作用机制有待深入研究。 展开更多
关键词 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶 生精细胞体外共培养 山羊睾丸 细胞免疫化学
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表皮生长因子和干细胞因子对小鼠生精细胞增殖与分化的作用 被引量:1
8
作者 汪存利 姜宏 孙静波 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2014年第8期679-683,共5页
目的:观察表皮生长因子(EGF)和干细胞因子(SCF)体外促小鼠生精细胞增殖、分化的效应。方法:对7~8日龄雄性昆明小鼠生精细胞进行混合细胞体外培养,在培养液中分别添加不同浓度(5、10、20、40、100 ng/ml)的EGF和SCF,并进行EGF和... 目的:观察表皮生长因子(EGF)和干细胞因子(SCF)体外促小鼠生精细胞增殖、分化的效应。方法:对7~8日龄雄性昆明小鼠生精细胞进行混合细胞体外培养,在培养液中分别添加不同浓度(5、10、20、40、100 ng/ml)的EGF和SCF,并进行EGF和SCF的交互实验,观察生精细胞的存活率和形态学变化,并对粗线期精母细胞特异性磷蛋白基因(P19)、单倍体精子细胞特异性转化蛋白基因(TP1)及染色体倍性进行检测。结果:加入EGF或SCF 2-4 d,各组均可见不同程度的细胞增殖,细胞呈团或族状,以20 ng/ml EGF组和40 ng/ml SCF组最为明显;培养第7天,单一添加20 ng/ml EGF或40 ng/ml SCF组生精细胞数和存活率显著高于与其它各组(P〈0.05),且40 ng/ml SCF组P19/TP1基因表达显著低于其它各组,单倍体细胞率显著高于其它各组(P〈0.05)。EGF与SCF配伍时,可显著增加体外培养后生精细胞数(P〈0.05)。结论:在混合生精细胞体外培养体系中,添加一定浓度的EGF和SCF可显著提高生精细胞数和存活率,而且SCF可提高单倍体精子的形成率;两者交互实验时,对细胞增殖有一定的叠加效应。 展开更多
关键词 生精细胞 表皮生长因子 干细胞因子 体外培养 RT-PCR 流式细胞术 小鼠
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体外培养小鼠生精细胞的形态学
9
作者 江中良 李青旺 +3 位作者 张明涛 李文烨 帅春晓 程磊 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2007年第5期451-455,共5页
利用姬姆萨原液和瑞一姬染色法对30~35日龄小鼠精液和睾丸组织培养后的生精细胞和精子进行形态学鉴定。结果表明,用姬姆萨原液染色鉴定,精子形态清晰,细胞膜边缘清楚,呈紫红色,未成熟精子的染色程度浅于成熟精子;经过培养的睾丸... 利用姬姆萨原液和瑞一姬染色法对30~35日龄小鼠精液和睾丸组织培养后的生精细胞和精子进行形态学鉴定。结果表明,用姬姆萨原液染色鉴定,精子形态清晰,细胞膜边缘清楚,呈紫红色,未成熟精子的染色程度浅于成熟精子;经过培养的睾丸组织用姬姆萨原液染色,生精细胞形态清晰,细胞核呈颗粒状,开始呈现深紫红色,胞质粉红色且带有蓝色背景,颜色较深,一定时间后颜色变浅;瑞一姬染色生精细胞形态完整清晰,细胞核、核仁、胞质分别呈现不同颜色。 展开更多
关键词 生精细胞 体外培养 形态学 小鼠
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改良培养基对体外培养生精细胞增殖分化的影响
10
作者 宋小敏 姜宏 +1 位作者 汪存利 黄静 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期14-19,共6页
探讨改良培养基对体外培养小鼠生精细胞的增殖分化效应。根据培养基的不同分为:A组(基础培养液组);B组[基础培养液+胶质细胞神经营养因子(GDNF)+表皮生长因子(EGF)组];C1、C2和C3组[A组+20%、40%、80%睾丸液(TA)1;D1... 探讨改良培养基对体外培养小鼠生精细胞的增殖分化效应。根据培养基的不同分为:A组(基础培养液组);B组[基础培养液+胶质细胞神经营养因子(GDNF)+表皮生长因子(EGF)组];C1、C2和C3组[A组+20%、40%、80%睾丸液(TA)1;D1、D2和D3组(B组+20%、40%、80%TA)。采用上述8种培养基对7~8日龄小鼠生精细胞进行体外培养,通过细胞形态学观察、细胞存活率和粗线期精母细胞特异性基因P19、单倍体精子细胞特异性基因TP,检测及染色体倍性分析,探讨TA、GDNF和EGF对小鼠体外培养生精细胞的增殖分化效应,结果如下:(1)形态学观察表明,B组生精细胞生长速度快,形态好,细胞集落多,A组最差;C组和D组细胞传代后培养时间最长,可达4个月。(2)生精细胞存活率结果显示,培养20d的B组细胞存活率显著高于其他各组(P〈0.05),C、D组在各培养阶段与A组间无显著性差异。(3)TP1/P19培养15d后B组的TP1/P19显著高于其他各组(P〈0.05),其他各组间均无显著性差异。(4)单倍体精子细胞比例结果表明,培养15d后的B组单倍体细胞比例显著高于其他各组(P〈0.05),其他各组间单倍体细胞比例均无显著性差异。GDNF和EGF可显著提高生精细胞体外培养的增殖分化效应,而睾丸液可显著延长生精细胞体外培养时间。 展开更多
关键词 生精细胞 体外培养 GDNF EGF
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CREM在体外共培养山羊睾丸生精细胞中的定位研究
11
作者 荀文娟 施力光 +3 位作者 张春香 岳文斌 周汉林 侯冠彧 《中国草食动物科学》 CAS 2013年第2期23-25,共3页
为进一步深入研究CREM基因在雄性动物中的表达调控机制,试验成功建立体外生精细胞和支持细胞共培养体系,并应用免疫细胞化学研究CREM在体外培养山羊睾丸生精细胞的表达特点。结果显示:CREM仅表达于圆形精子细胞,其他生精细胞和支持细胞... 为进一步深入研究CREM基因在雄性动物中的表达调控机制,试验成功建立体外生精细胞和支持细胞共培养体系,并应用免疫细胞化学研究CREM在体外培养山羊睾丸生精细胞的表达特点。结果显示:CREM仅表达于圆形精子细胞,其他生精细胞和支持细胞检测不到CREM的表达。表明CREM基因在圆形精子细胞发育过程中起重要调节作用,但其作用机制有待深入研究。 展开更多
关键词 山羊 CREM 体外共培养生精细胞 免疫细胞化学
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Reproductive toxicity of organic extracts from petrochemical plant effluents discharged to the Yangtze River,China 被引量:7
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作者 Xiaoyi Wang Wei Shi +5 位作者 Jiang Wu Yingqun Hao Guanjiu Hu Hongling Liu Xiaodong Han Hongxia Yu 《Journal of Environmental Sciences》 SCIE EI CAS CSCD 2010年第2期297-303,共7页
Water pollution of the Yangtze River in China became one of challenges that the government is facing today. Increasing numbers of petrochemical plants were built along the river in past decades, and numbers of organic... Water pollution of the Yangtze River in China became one of challenges that the government is facing today. Increasing numbers of petrochemical plants were built along the river in past decades, and numbers of organic chemicals were discharged into the river. Our goal was to establish in vitro system on rat sertoli cells, spermatogenic cells and leydig cells to investigate the reproductive toxicity potential induced by organic extracts from petrochemical effluents. Our results showed that the organic extract depressed the viability (p 〈 0.01) and destroyed the plasma membrane integrity of sertoli cells and spermatogenic cells to a certain degree. Accordingly, proportion of early apoptotic sertoli cells and late apoptotic spermatogenic cells increased significantly. Although significant morphological changes were not detected for leydig cells, the extract was observed to inhibit their testosterone production (p 〈 0.01). Sertoli cells and sperrnatogenic cells appeared to be more sensitive and maybe the main targets of the key toxins. These results suggested that the in vitro system on rat testicular cells may be useful to predicate reproductive toxicity potential of organic extracts from petrochemical effluents. More attention should be paid to the petrochemical effluents, because long-term accumulation of these organic compounds in organisms may cause spermatogenesis malfunction and testosterone reduction. 展开更多
关键词 WASTEWATER in vitro system sertoli cells spermatogenic ceils leydig cells
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非梗阻性无精子症患者睾丸生精细胞体外培养后受精能力的研究 被引量:1
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作者 檀大羡 莫毅 +4 位作者 陈自洪 张海英 刘琼东 牛向丽 孙燕萍 《中国性科学》 2014年第2期3-4,共2页
目的:探讨非梗阻性无精子症患者睾丸生精细胞体外培养后的受精能力。方法:选取8例非梗阻性无精子症患者的睾丸组织制备成生精细胞,经体外培养后得到长形精子细胞显微注射到卵细胞内,观察其受精情况。结果:8例患者睾丸生精细胞经体外培... 目的:探讨非梗阻性无精子症患者睾丸生精细胞体外培养后的受精能力。方法:选取8例非梗阻性无精子症患者的睾丸组织制备成生精细胞,经体外培养后得到长形精子细胞显微注射到卵细胞内,观察其受精情况。结果:8例患者睾丸生精细胞经体外培养后均有不同程度的分化、成熟。将培养后接近成熟的精子细胞通过显微注射到卵细胞内,卵细胞受精率为4.52%,荧光原位杂交试验结果显示卵细胞有受精。结论:非梗阻性无精子症患者睾丸生精细胞经体外培养后有潜在的受精能力。 展开更多
关键词 无精子症 生精细胞 体外培养 显微受精 荧光原位杂交
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小鼠生精细胞体外培养过程中印迹基因H19和IGF2r甲基化状态 被引量:4
14
作者 袁韦娜 姜宏 +1 位作者 张文香 汪存利 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期678-682,共5页
目的通过对体外培养获取的昆明白小鼠单倍体精子细胞印迹基因H19印迹控制区(imprintingcontrolregion,ICR)和IGF2r差异甲基化区(differentiallymethylatedregion,DMR2)甲基化状态的检测,初步评估体外培养对生精细胞印迹基因甲基... 目的通过对体外培养获取的昆明白小鼠单倍体精子细胞印迹基因H19印迹控制区(imprintingcontrolregion,ICR)和IGF2r差异甲基化区(differentiallymethylatedregion,DMR2)甲基化状态的检测,初步评估体外培养对生精细胞印迹基因甲基化状态的影响。方法应用亚硫酸氢盐测序技术,以印迹基因H19ICR和IGF2rDMR2区为扩增目的区域,对经体外培养获得的单倍体精子细胞进行甲基化修饰后巢式和半巢式PCR扩增,应用DNAman软件对特异性扩增产物测序分析,与GenBank相对应的序列比对,判断其甲基化状态,并与小鼠附睾内成熟精子进行比较。结果小鼠成熟精子中H19ICR区15个CpG位点呈高度甲基化状态(96.67%),IGF2rDMR2区呈非甲基化状态(94.29%);而经体外培养获得的单倍体精子细胞H19ICR区甲基化程度显著降低(69.33%,P〈0.01),/GF2rDMR2区甲基化程度显著增加(44.29%,P〈O.01)。结论昆明白小鼠成熟精子中H19ICR区呈高度甲基化状态;IGF2rDMR2区呈非甲基化状态;体外培养产生的单倍体精子细胞H19ICR区出现了广泛的甲基化丢失,IGF2rDMR2区出现了异常甲基化。 展开更多
关键词 生精细胞 体外培养 印迹基因 DNA甲基化
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小鼠生精细胞的分离和体外培养 被引量:1
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作者 王香祖 席继锋 贾斌 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第2期15-17,共3页
为了建立一种操作性强、稳定、高效的小鼠生精细胞体外培养体系,从10只8周龄成年雄性健康清洁级昆明小鼠睾丸组织分离出细胞得到混悬液,采用支持细胞和生精细胞共培养方式,通过添加多种细胞培养液,以维持细胞的生长和增殖。结果表明:采... 为了建立一种操作性强、稳定、高效的小鼠生精细胞体外培养体系,从10只8周龄成年雄性健康清洁级昆明小鼠睾丸组织分离出细胞得到混悬液,采用支持细胞和生精细胞共培养方式,通过添加多种细胞培养液,以维持细胞的生长和增殖。结果表明:采用睾丸生精细胞、支持细胞共同培养的方式可得到密度较大的生精细胞,且精原细胞、精母细胞的数量占绝大多数。 展开更多
关键词 小鼠 生精细胞 分离 体外培养
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