人胚AGM区造血干／祖细胞的分离及其在含AGM区基质细胞体系中的培养

本研究分离人胚主动脉-性腺-中肾(AGM)区造血干/祖细胞(HSPC)并在含人AGM区基质细胞的培养体系中进行培养,以了解人AGM区基质细胞对HSPC的作用。以免疫组织化学方法检测人胎龄28-45天胚胎AGM区细胞CD34、Flk-1、VEGF的表达;分离AGM来源的HSPC,通过直接接种和经Transwell非直接接触两种方法接种于含人AGM区基质细胞系(hAGMS3和hAGMS4)饲养层的培养体系,观察HSPC生长情况和卵石区形成细胞(cobblestone area-forming cells,CAFC)并计数卵石区(cobblastone area,CA);用间接免疫荧光方法检测培养体系中悬浮细胞和CAFC的CD34、Flk-1表达;收获细胞进行半固体造血集落培养以检测两种培养方法对AGM-HSPC的集落形成能力影响。结果表明:人AGM区造血细胞表达CD34和Flk-1。两种接种方法均显示有CFC形成,直接接触培养能形成CD34和Flk-1双阳性的CAFC,集落总数明显高于非接触培养(hAGMS3体系:1647±194vs389±31,p<0.05;hAGMS4体系:1586±75vs432±35,p<0.05)。结论:①人胚AGM区含有CD34+Flk-1+的HSC。②首次建立含人胚AGM基质细胞的AGM-HSPC培养体系,直接接触培养和非直接接触培养均能促进AGM-HSC的生长,AGM基质细胞与HSC直接接触发挥重要作用。

混合脐血清在骨髓长期培养中的效应

目的 :揭示脐血清在骨髓长期培养中的效应 ,为脐血清的应用提供基础。方法 :以Dexter培养法 ,观察混合脐血清 (MCBS)、组合细胞因子 (CK)在长期骨髓培养中对骨髓单个核细胞 (BMMNC)形成鹅卵石造血区 (CAFC)、长期培养起始细胞 (LTC IC)、有核细胞 (NCC)的生长。结果 :10例人骨髓 ,10 6 BMMNC培养 5周后 ,CAFC、LTC IC分别为37.1± 12 .4/ (ml.well) ,40 .9± 10 .6 (ml.well) ,NCC由接种时的 10 6 (ml.well)增至 (1.63± 0 .17) 10 6 (ml.well) ,加入10 %MCBS则可使三者得到明显扩增 ,但不及组合CK ;10 %MCBS还能明显提高组合CK对三者的扩增 ;2 0 %MCBS不能取代骨髓长期培养中的血清和组合CK对三者的扩增。结论 :MCBS中含有类似GM CSF、SCF、IL 3、IL 6、EPO等一类能使CAFC、LTC IC、NCC得到明显扩增的“活性物质”