抗球虫药的人工抗原合成及免疫分析方法研究进展

抗球虫药在畜禽业应用广泛,但不合理使用会导致其在动物性食品中残留超标,对人类健康造成威胁。近年来,食品安全监督抽检中抗球虫药残留超标时有发生,因此,实现动物性食品中抗球虫药残留的高效快速检测,有利于兽药残留的有效监管。在众多残留检测方法中,免疫分析方法具有灵敏度高、特异性强,操作简单等优点,适用于大批量样品的现场快速检测。该文综述了抗球虫药人工抗原的合成方法,并对其免疫分析方法进行归纳总结,以期为开发更高效的抗球虫药残留分析方法提供参考。

山东省潍坊地区肉鸡球虫的抗药性调查

应用石歧杂肉仔鸡，检测了采自我国山东潍坊的５种艾美耳球虫对６种常用抗球虫药的敏感性。根据最适抗球虫活性百分率、相对卵囊产量和病变记分减少率３项指标综合判定，山东潍坊地区的柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、布氏艾美耳球虫和和缓艾美耳球虫的５个混合种对盐霉素Ｓａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ（赛可喜Ｓａｃｏｘ）、拉沙里菌素Ｌａｓａｌｏｃｉｄ（球安Ａｖａｔｅｃ）、莫能霉素Ｍｏｎｅｎｓｉｎ（欲可胖Ｅｌａｎｃｏｂａｎ）、马杜拉霉素Ｍａｄｕｒａｍｉｃｉｎ（抗球王ＫＱＷ）和常山酮Ｈａｌｏｆｕｇｉｎｏｎｅ（速丹Ｓｔｅｎｏｒａｌ）均存在不同程度的抗药性，其中对抗球王和欲可胖有重度抗药性，对球安具有中度抗药性，对速丹和赛可喜具有轻度抗药性。５种混合艾美耳球虫对氯嗪苯乙氰Ｄｉｃｌａｚｕｒｉｌ（伏球Ｃｌｉｎａｃｏｘ）无抗药性。尽管球安和赛可喜分别具有中等程度和轻度抗药性，然而在增重方面优于伏球。

河北秦皇岛柔嫩艾美耳分离株对常用抗球虫药的抗药性研究

检测了河北秦皇岛柔嫩艾美耳球虫株对球敌、力克球和氨丙啉3种常用抗球虫药的抗药性。根据抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)综合判定,结果表明,该虫株对氨丙啉无抗药性;对球敌轻度抗药;对力克球中度抗药。尽管对球敌存在轻度抗药,在增重及ACI方面优于氨丙啉。

液相色谱串联质谱法测定鸡肉中20种抗球虫药物多残留

建立了鸡肉中盐霉素、甲基盐霉素、莫能菌素、拉沙里菌素、马杜拉霉素、氯羟吡啶、氨丙啉、乙氧酰胺苯甲酯、4,4-二硝基均二苯脲、常山酮、克拉珠利、甲苄喹啉、癸氧喹酯、二硝托胺、地克珠利、硝米特、甲苯三嗪酮、甲苯三嗪酮砜、甲苯三嗪酮亚砜及阿克洛胺等20种抗球虫药物的定量测定方法。用乙腈萃取鸡肉中的抗球虫类药物残留,乙腈饱和正己烷脱脂,硅胶柱净化,浓缩,以Acquity BEH C18色谱柱为分离柱,液相色谱串联质谱仪测定,正/负离子分段扫描。测定限为0.005～0.05 mg/kg,在3个添加水平上进行回收实验,平均回收率为84.8%～105.0%;相对标准偏差为1.5%～10.6%。本方法简便、快速、准确,各项技术指标满足国内外法规的要求,可用于鸡肉样品中抗球虫类药物多残留的定量测定。

上海地区鸡球虫对6种抗球虫药的抗药程度研究

为了解上海地区的鸡球虫抗药性状况 ,作者采集了上海市 9个区县 10个鸡场的球虫 ,进行了对地克珠利 (Diclazuril)、氯苯胍 (Robenidine)、氯羟吡啶 (Clopidol)、氨丙啉 (Amprolium)、马杜拉霉素 (Maduramicin)、莫能霉素 (Monensin)的抗药性研究。试验设 6个药物组和感染不用药、不感染不用药 2个对照组 ,以抗球虫指数 (ACI)、病变记分减少率 (RL S)、相对卵囊产量 (ROP)、最适抗球虫活性百分率 (POAA)为试验指标 ,进行综合评定 ,其抗药程度分为无抗药性、轻度抗药性、中度抗药性、完全抗药性 4个等级。结果显示来自 10个鸡场的球虫中 ,对地克珠利有 90 %未产生抗药性 ,对氯苯胍有 90 %为无抗药性和轻度抗药 ,对马杜拉霉素有 5 0 %为无抗药性和轻度抗药 ,对氯羟吡啶有 80 %达到完全抗药 ,对氨丙啉有 90 %达到中度和完全抗药 ,对莫能霉素则全部达到中度以上的抗药程度。作者认为目前在上海地区可以放心地合理使用地克珠利和氯苯胍 ,对马杜拉霉素要慎重使用 ,对氯羟吡啶、氨丙啉、莫能霉素须减少或暂停使用。

柔嫩艾美耳球虫杨凌株对几种抗球虫药的抗药性研究

用柔嫩艾美耳球虫杨凌株(YLt)对14日龄雏鸡进行感染,检测了该虫株对几种常用抗球虫药(三九球痢灵、地克珠利、氯苯胍和地克珠利氯苯胍合剂)的敏感性。以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标,进行综合评定,其抗药程度分为无抗药性、轻度抗药性、中度抗药性和完全抗药性4个等级。结果表明,该虫株对地克珠利氯苯胍合剂有轻度抗药性,对三九球痢灵和地克珠利有完全抗药性,对氯苯胍无抗药性。

3种药物对河北秦皇岛鸡球虫分离株的疗效试验

85只海兰褐蛋公雏随机均分为5组,每组17只,于14日龄,除白对照组外,每只鸡接种1.2×105个河北秦皇岛柔嫩艾美耳球虫卵囊,同时选择球敌(0.2 mL/L)、力克球(0.5 g/L)和氨丙啉(0.6 g/L)3种常用抗球虫药,通过饮水给药的方式,观察了其对球虫的疗效,试验期为9 d。结果表明,球敌和氨丙啉的抗球虫指数(AC I)分别为186.63和181.62,属高效抗球虫药,其中球敌促生长作用显著,整个试验期内的增重分别比红对照组、白对照组、力克球组和氨丙啉组提高65.16%(P<0.01)、6.63%(P>0.05)、28.59%(P<0.01)和13.31%(P>0.05)。而氨丙啉抑制卵囊繁殖和减轻肠道病变的效果明显,但连续应用,对后期鸡的增重有抑制作用。力克球的AC I为157.77,判为低效抗球虫药。3种药物对Hb含量和脾脏、胸腺及法氏囊相对质量无显著影响。

分散固相萃取/高效液相色谱-串联质谱法快速测定饲料中87种药物残留

建立了分散固相萃取/高效液相色谱-串联质谱法（d SPE/LC-MS/MS）同时测定饲料中17种β-受体激动剂、18种β-内酰胺类、6种抗球虫类、5种大环内酯类、2种林可胺类、15种喹诺酮类、21种磺胺类及3种磺胺类增效剂等8类共计87种兽药的新方法。均质样品经0.1 mol/L Na2EDTA溶液分散后,以甲醇-乙腈（50∶50）超声提取,提取液用Bondesil-PSA吸附剂以分散固相萃取方式快速净化。待测物采用Poroshell EC-C18（100 mm×2.1 mm,2.4μm）色谱柱分离,在电喷雾离子源的正离子模式下以动态多反应监测（dynamic MRM）方式采集数据并作定性筛查和定量分析。87种药物在相应的浓度范围内线性良好,相关系数均大于0.99,在3个不同浓度加标水平下,平均回收率为63.7%~108.8%,相对标准偏差（RSD）为3.5%~15.2%,检出限（LOD,S/N≥3）和定量下限（LOQ,S/N≥10）分别为3~15μg/kg及10~50μg/kg。该方法灵敏、可靠,样品预处理简便、快速、价廉,适用于饲料中上述87种兽药的同时快速定性筛查和定量测定。

柔嫩艾美耳球虫甘肃株抗药性的试验研究

用柔嫩艾美耳球虫甘肃株(E.tenella G S,E t G S)对15日龄雏鸡进行感染,以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标,进行综合评定,研究了该虫株对三九球痢灵、地克珠利、氯苯胍和地克珠利氯苯胍合剂等几种常用抗球虫药的敏感性。结果表明,该虫株对三九球痢灵有中度抗药性,对地克珠利和地克珠利氯苯胍合剂有轻度抗药性,对氯苯胍无抗药性。

柔嫩艾美耳球虫长春分离株对7种抗球虫药的抗药性研究

以AA肉仔鸡为试验材料,以最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量减少率(ROP)和抗球虫指数(ACI)为判定指标,检测了长春市柔嫩艾美耳球虫分离株对7种抗球虫药物的抗药性。结果表明:长春市柔嫩艾美耳球虫分离株对莫能菌素、妥曲珠利无抗药性,对尼卡巴嗪有轻度抗药性,对马杜霉素和地克珠利有中度抗药性,对氯羟吡啶和盐霉素有完全抗药性。

秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对7种常用抗球虫药的耐药性

【目的】研究秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对克球粉、氨丙啉、马杜霉素、瑞冠球、金三特、球敌和尼卡巴嗪7种抗球虫药的耐药性。【方法】试验设7个感染药物组、1个感染球虫卵囊不给药组(阳性组)和1个未感染球虫卵囊不给药组(阴性组),采用最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)综合评定秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对以上7种抗球虫药物的抗药性。【结果】秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对7种抗球虫药物均产生不同程度的抗药性,其中对马杜霉素、尼卡巴嗪和氨丙啉呈现轻度抗药,对克球粉、瑞冠球和金三特呈现中度抗药,对球敌呈现完全抗药性。【结论】目前在秦皇岛地区可合理使用马杜霉素、尼卡巴嗪和氨丙啉,对克球粉、瑞冠球和金三特应慎用,对球敌应减少或暂停使用。

秦皇岛地区鸡球虫抗药性研究

应用艾维茵肉仔鸡 ,以最适抗球虫活性百分率 (POAA)、病变记分减少率 (RLS)和相对卵囊产量 (ROP)为判定指标 ,检测了采自河北省秦皇岛地区的 6种艾美耳球虫对 8种常用抗球虫药物的敏感性。结果表明 :6种混合艾美耳球虫对马杜霉素和盐霉素具有轻度抗药性 ;对拉沙洛菌素和氨丙啉具有中度抗药性 ;对球痢灵、克球多和常山酮具有重度抗药性 ;对地克珠利无抗药性。

超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中的4种聚醚类抗球虫药物残留

采用乙腈直接提取、石墨化碳黑固相萃取小柱净化、UPLC快速分离，串联质谱检测、成功建立了鸡肉中莫能菌素、马杜菌素、盐霉素、拉沙洛西等4种抗球虫药物的多残留检测方法。对样品提取、净化过程和仪器条件进行了优化改进，经Waters C18 column分离、正离子电喷雾电离模式测定，4种药物的检测限为0．2gg／kg，最低定量限为0．5μg／kg。选取0．5、1．0、2．0μg／kg3个质量分数进行空白添加回收率实验，回收率为71．9％～100．9％，批内RSD2．7％～15％，批间RSD为1．7％～10％。各项技术指标满足国内外法规的要求，适合大量样品中聚醚类抗球虫药物残留的确认检测。

五种抗球虫药对肉鸽球虫病的防治研究

为筛选有效的抗鸽球虫药物,选用地克珠利(1 mg/kg)、磺胺喹恶啉钠(300 mg/kg)、磺胺氯吡嗪钠(300 mg/kg)、托曲珠利(25 mg/kg)、白头翁散(500 mg/kg)等5种抗鸡球虫药物进行了本试验,试验重复3次,每次分为用药感染组和不用药感染组,人工感染主要含有拉氏艾美耳球虫和鸽艾美耳球虫的混合孢子化卵囊,剂量为15×104个,以相对卵囊减少率作为抗球虫效果的指标。结果显示磺胺喹恶啉钠、磺胺氯吡嗪钠效果最好,相对卵囊减少率分别为99.9%和99.5%;其次是托曲珠利、白头翁散,相对卵囊减少率分别为96.7%和92.0%;地克珠利效果最差,相对卵囊减少率仅为75.6%。

五种抗球虫药物对鸡柔嫩艾美耳球虫病的疗效观察

210只14日龄817肉杂鸡公雏随机均分为7组,每组30只,除白对照组外,每只鸡接种2×105个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,同时选择百球杀二代、球痢速治、海南霉素、球虫宝,海南地克珠利5种常用抗球虫药,通过饮水给药的方式,观察其疗效,试验期为10 d。结果表明,百球杀二代的抗球虫指数(ACI)为197.7,属高效抗球虫药。抑制卵囊繁殖和减轻肠道病变效果以海南霉素组为显著,整个试验期内的增重分别比红对照组、白对照组、其他药物组均高。球痢速治、海南霉素、球虫宝的抗球虫指数(ACI)分别为184.6、174.9、165.2,均为中效抗球虫药。地克珠利的抗球虫指数(ACI)为142.9,判为低效抗球虫药。红对照组的法氏囊指数与其他各组之间差异不显著(P>0.05),脾脏指数与白对照组差异不显著(P>0.05),与百球杀二代组,汇鑫球痢速治组和海南霉素组差异极显著(P<0.01),与球虫宝组和海南地克珠利组差异显著(P<0.05)。

高效液相色谱法测定鸡肉中5种磺胺类药物及乙氧酰胺苯甲酯增效剂残留量

目的建立高效液相色谱法同时检测鸡肉中磺胺二甲嘧啶(sulfamethylamine,SM2)、磺胺间甲氧嘧啶(sulfamonomethoxine,SMM)、磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole,SMZ)、磺胺二甲氧嘧啶(sulfadimethoxine,SDM)、磺胺喹噁啉(sulfaquinoxaline,SQ)、乙氧酰胺苯甲酯(ethopabate)的分析方法。方法样品加入10 mL乙腈提取,10000 r/min离心10 min,氮气吹干后,加入5 mL pH值为7.0的磷酸盐缓冲液溶解,过HLB固相萃取柱净化。色谱柱为Phenomenex Luna C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为2.2%乙酸水溶液-甲醇乙腈,等度洗脱,流速为1.0 mL/min,进样量为20μL,检测波长267 nm。结果5种磺胺类药物在0.10~1.5μg/mL呈良好的线性关系,r2均大于0.999,乙氧酰胺苯甲酯在0.5~10.0μg/mL呈良好的线性关系,r2均大于0.999。方法中5种磺胺类药物的最低定量限为50μg/kg,乙氧酰胺苯甲酯的最低定量限为250μg/kg。5种磺胺类药物在50~200μg/kg的浓度添加水平上,其回收率在60%~100%,批内、批间的相对标准偏差小于20%,乙氧酰胺苯甲酯在250~1000μg/kg的浓度添加水平上,其回收率在60%~100%,批内、批间的相对标准偏差小于20%。结论该方法具有简便快捷、灵敏度高等特点,适用于鸡肉中5种磺胺类药物和乙氧酰胺苯甲酯的残留检测。

毒害艾美耳球虫致病性与抗药性研究

用毒害艾美耳球虫杨凌株(YLn)感染14日龄雏鸡,检测毒害艾美耳球虫的致病性及其对4种常用抗球虫药的敏感性。以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标,进行综合评定,其抗药程度分为无抗药性、轻度抗药性、中度抗药性和完全抗药性4个等级。结果表明,该虫株对雏鸡有很强的致病性,每羽鸡经口接种1×105个孢子化卵囊时,致死率达63.3%;该虫株对地克株利有完全抗药性,对马杜拉霉素有轻度抗药性,对氯羟吡啶和氯苯胍无抗药性。

鸡球虫病及抗球虫药物的临床应用

从鸡球虫病发生的流行病学、临床症状、病理变化、诊断、治疗方面进行了比较详细的综述,特别提出了应注重预防,不应依赖药物预防,而要以使用疫苗预防为主;对鸡球虫病治疗时用药要合理,选择合适的药物轮换、穿梭使用,并注意抗球虫药物在鸡可食用组织中的残留问题。

山东省诸城肉鸡球虫的抗药性调查

应用石歧杂肉仔鸡，检测了采自我国山东诸城的２种艾美耳球虫对６种常用抗球虫药的敏感性。根据最适抗球虫活性百分率、相对卵囊产量和病变记分减少率３项指标综合判定，山东诸城地区的柔嫩艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫的２个混合种对盐霉素Ｓａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ（赛可喜Ｓａｃｏｘ）、拉沙里菌素Ｌａｓａｌｏｃｉｄ（球安Ａ－ｖａｔｅｃ）、莫能霉素Ｍｏｎｅｎｓｉｎ（欲可胖Ｅｌａｎｃｏｂａｎ）、马杜拉霉素Ｍａｄｕｒａｍｉｃｉｎ（抗球王ＫＱＷ）和常山酮Ｈａｌｏｆｕｇｉ－ｎｏｎｅ（速丹Ｓｔｅｎｏｒａｌ）均存在不同程度的抗药性，其中对抗球王、速丹和欲可胖有重度抗药性，对球安和赛可喜具有中度抗药性；对氯嗪苯乙氰Ｄｉｃｌａｚｕｒｉｌ（伏球Ｃｌｉｎａｃｏｘ）无抗药性。尽管球安和赛可喜存在中度抗药性，在增重方面却优于伏球。

柔嫩艾美耳球虫莆田株抗药性研究

为掌握鸡场球虫抗药程度,以便制定合理用药方案,采集福建省莆田市某鸡场盲肠球虫,进行柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离和纯化;采用鸡体试验法,设立5个用药组、1个感染不用药对照组和1个不感染不用药对照组,以病变记分减少率(Reduction of lesion sores,RLS)、抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI)、相对盲肠卵囊产量(Relative at oocyst production,ROP)和最适抗球虫活性百分率(Percent of optimum anticoccidial activity,POAA)4项为指标,检测该球虫对癸氧喹酯、尼卡巴嗪、地克珠利、二硝托胺和氯苯胍等5种常用抗球虫药的抗药性。结果表明:该虫株对癸氧喹酯敏感,对地克珠利、二硝托胺和氯苯胍具有完全抗药性,对尼卡巴嗪为中度抗药性,说明目前莆田市球虫抗药性非常严重,癸氧喹酯可用于抗球虫病,其他药物应慎用或暂停使用。