EFFECTS OF DIABETES ON HEARING AND COCHLEAR STRUCTURES

Diabetes mellitus (DM) is a chronic systemic disease characterized by hyperglycemia, with various patho-genic mechanisms. From absolute or relative insulin deficiency, patients with DM often demonstrate vari-ous levels of metabolic disorders. Major clinical manifestations of DM include metabolic disorders, vascu-lar lesions, circulatory disturbances and neurologic complications. Along with advances in DM research, re-ports of DM related tinnitus and hearing impairment have increased continuously. Research on DM related auditory system dysfunction has focused on cochlear microcirculation, cellular homeostasis, genetics and ag-ing. Cochlear microcirculation plays an important role in cochlear physiology and its disorders are associat-ed with many inner ear diseases. Ischemia and subsequent reperfusion seen in cochlear microcirculation dis-orders are important factors in hearing damage. Understanding cochlear microcirculation and structural as well as functional changes in DM patients with hearing loss and their causal factors will help reveal patho-genic mechanisms in diabetic hearing loss and provide new ideas in developing interventions and preventing damages caused by diabetes.

电针对急性后循环缺血豚鼠蜗神经核能量代谢功能重塑的影响及机制研究

目的探讨急性后循环缺血对豚鼠蜗神经核能量代谢、SIRT1-PINK1介导的线粒体自噬的影响,以及电针的作用及机制。方法40只健康杂色豚鼠随机分为手术组、对照组、电针组和假手术组,每组10只,手术组和电针组豚鼠离断右侧颈总动脉、结扎右侧锁骨下动脉建立急性后循环缺血模型,电针组同时予以电针百会穴和内关穴,每次30分钟,每天1次,连续7天;假手术组暴露血管但不做离断和结扎;对照组自然喂养。采用Micro PET/CT检测双侧蜗神经核感兴趣区域摄取18F-FDG最大标准摄取值(maxmum standardized uptake values,SUVmax),以SUVmax左侧/右侧平均值分析各组葡萄糖代谢情况,ELISA方法检测ATP生成水平,实时荧光定量PCR法检测PINK1、SIRT1、LC3 mRNA的表达变化。结果与对照组比较,手术组SUVmax左/右平均比值升高、ATP水平降低;与手术组比较,电针组SUVmax左/右平均比值降低、ATP水平升高;电针组SIRT1 mRNA表达比手术组降低。各组PINK1 mRNA、LC3 mRNA的相对表达差异无统计学意义。结论电针百会穴和内关穴可能通过调节SIRT1的表达促进急性后循环缺血豚鼠蜗神经核能量代谢功能的重塑。

豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后iNOS活性与细胞凋亡关系

目的:探讨椎基底动脉缺血再灌注耳蜗组织损伤方式及可能的损伤机制。方法:健康豚鼠72只,随机分成正常组、假手术组、模型组,每组各8只。用组织化学方法观察缺血再灌注不同时间耳蜗各部位的组织改变;用免疫组织化学法(ABC)检测各组动物耳蜗中诱导型一氧化氮合酶的表达和变化;用原位凋亡法(TUNEL法)观察耳蜗的细胞凋亡情况。结果:缺血再灌注的内外毛细胞变形缺损、血管纹变薄等;诱导型一氧化氮合酶在缺血及再灌注的表达增强;正常组及假手术组没有或仅有个别部位出现细胞凋亡,缺血及再灌注各组内外毛细胞及螺旋神经节部位凋亡细胞明显增多。结论:再灌注期间细胞凋亡数较缺血期间明显增多,其原因为包括一氧化氮在内的多种氧自由基表达增高所致。

卡波金对豚鼠缺血耳蜗的作用

目的 :探讨卡波金对豚鼠缺血耳蜗的作用。方法 :动物分为 4组 :正常对照组 (Ⅰ组 ) ;假手术组 (Ⅱ组 ) :暴露双侧椎动脉和一侧颈总动脉 ;缺血组 (Ⅲ组 ) :结扎双侧椎动脉和一侧颈总动脉建立内耳缺血模型 ;卡波金组(Ⅳ组 ) :建立内耳缺血模型的同时吸入卡波金。每组 2 0只 ,10只采用微球法测血流量 ,10只作ABR测试及扫描电镜观察耳蜗毛细胞形态。结果 :耳蜗血流量缺血组较正常对照组降低 5 4 .83% ,卡波金组较缺血组增加 31.4 6 % ;ABR各波潜伏期及Ⅰ～Ⅲ波间期缺血组较正常对照组延长 ,卡波金组较缺血组缩短 ;听觉阈值缺血组较正常组升高 13.7dBSPL ,卡波金组较缺血组降低 5 .5dBSPL(P均 <0 0 1)。缺血组耳蜗底周毛细胞纤毛出现明显的倒伏、排列紊乱 ,从内排到外排逐渐加重 ,并可见少数细胞缺失 ,卡波金组毛细胞纤毛倒伏减轻。结论 :结扎豚鼠两侧椎动脉和一侧颈总动脉使耳蜗血流量减少 ,吸入卡波金使缺血耳蜗的血流量增加。豚鼠耳蜗缺血后 ,耳蜗毛细胞及功能形态受损 。

7-硝基吲唑对椎基底动脉脑缺血豚鼠ABR及耳蜗核nNOS活性的影响

目的 :探讨脑干耳蜗核缺血后听力损失情况 ,以及神经元型一氧化氮合酶 (neuronalnitricoxidesynthase)及其选择性抑制剂 7 硝基吲唑 (7 nitroindazole,7 NI)在缺血中的作用。方法 :随机将 50只耳廓反射灵敏的健康花色豚鼠分为 4组 :①正常对照组 ,②假手术组 ,③缺血组 ,④用药组。通过结扎一侧颈总动脉 ,阻断基底动脉 ,建立豚鼠椎基底动脉脑缺血的动物模型。用药组动物在缺血前 5min腹腔注射 7 NI,观察每组动物ABR及单位面积耳蜗核内nNOS阳性神经元的变化。结果 :与对照组比较 ,缺血 1 5min ,30min,60min和 1 2 0minABR各波潜伏期、Ⅰ～Ⅲ波间期均显著延长 ,阈值提高 (P <0 .0 5)。用药组ABR各测试参量在相应缺血时间段内较单纯缺血组明显缩短或降低 (P <0 .0 5)。与对照组比较 ,nNOS阳性神经元数量在缺血后 1 5min即明显升高 ,缺血 30min达到高峰 ,60～ 1 2 0min基本恢复正常 ,而用药组各时间段nNOS阳性神经元数量与对照组比较 ,差异无统计学意义。结论 :nNOS主要参与耳蜗核缺血早期的病理性损伤 ,是造成循环障碍性听力下降的重要因素之一。 7 NI可选择性地抑制nNOS的活性 。

地塞米松对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的:研究地塞米松对缺血再灌注损伤及细胞凋亡的防治作用。方法:健康豚鼠,随机分成正常组、假手术组、地塞米松干预后假手术组、模型组和干预组(地塞米松术前腹腔注射)。后2组各在缺血30 min、再灌注6 h及24 h取材。用TUNEL法观察耳蜗缺血及不同时间段内再灌注的细胞凋亡情况,并与地塞米松干预后进行比较。结果:干预组的螺旋神经节及螺旋器(Corti器)较模型组在每个时间点上凋亡小体减少。结论:地塞米松可通过抑制诱导型一氧化氮合酶使凋亡细胞明显减少。

耳蜗缺血的动物实验模型

应用静脉注射三磷酸腺苷及双侧颈总动脉、单侧椎动脉阻断造成不同程度的豚鼠耳蜗供血下降的实验模型，并应用活体动物耳蜗微循环的研究方法，观察了豚鼠耳蜗微循环的改变。发现此方法可以造成不同程度的耳蜗血流下降，是研究耳蜗微循环与听功能关系的一种有效方法。

内皮依赖性舒张因子对豚鼠内耳微循环障碍所致听力损伤的保护作用

目的 :探讨内皮依赖性舒张因子 (EDRF/NO)对听功能的保护作用及作用机制。方法 :36只豚鼠随机分为 4组 ,利用活体显微镜、电视摄像、计算机图像分析技术及螺旋韧带血管纹铺片、透射电镜技术 ,观察EDRF/NO对听功能的保护作用。同时 ,以听神经复合动作电位阈值 ,判断听力损伤程度 ,测定循环血液中超氧化物歧化酶(SOD)的浓度 ,以反映微循环血液中氧自由基的含量。结果 :①生理盐水组 ,耳蜗微循环的血流量在整个测试的 30min内保持稳定 ,听功能正常 ;②速尿组 (F组 ) ,经静脉注射药物后 ,耳蜗血流迅速下降 ,在用药 10min时 ,耳蜗血流下降达 5 6 % ,缺血的同时伴听力下降、耳蜗血管纹超微结构的损伤及循环SOD的下降 ,与用药前比较差异有显著性 ;③速尿 /L 精氨酸组 (F/L Arg组 ) ,EDRF/NO能使速尿引起的血流下降明显改善 ,听功能及耳蜗血管纹超微结构的损伤程度较单纯F组减轻 ,恢复正常功能的时间提前 ;④速尿 /L 硝基 精氨酸组 (F/L NNA组 ) ,耳蜗的缺血及听力损伤的程度均较F组加重 ,且恢复正常的时间延长。结论 :EDRF/NO能通过加快豚鼠内耳微循环的血流 ,增加局部血流的灌注 。

神经生长因子减轻大鼠脑缺血再灌注耳蜗损伤

目的 :研究神经生长因子 (NGF)对脑缺血再灌注引起的听力及耳蜗损伤的作用。方法 :本研究给实验组大鼠脑缺血再灌注前后肌注NGF ,对照组动物肌注等量生理盐水 ,于处理前后对两组的听力损失及耳蜗结构变化加以比较。结果 :缺血 30min再灌注 60min和 2 4h ,实验组的听力损失明显小于对照组 (P <0 0 1 )。耳蜗的扫描和透射电镜观察发现 ,对照组毛细胞静纤毛粘连、部分脱落 ,外毛细胞肿胀、散在性坏死缺失 ,螺旋神经节神经元变性 ,线粒体水肿、嵴断裂。实验组耳蜗Corti’s器毛细胞及螺旋神经节神经元的损伤明显轻于对照组。结论 :NGF能减轻脑缺血再灌注引起的听力及耳蜗损伤。

缺血-再灌注耳蜗核神经元凋亡相关基因的表达

目的:探讨基底动脉缺血-再灌注耳蜗核组织损伤方式及其可能的损伤机理。方法:豚鼠随机分成正常对照组,假手术组,缺血30 min组,再灌注1 h、6 h、24 h组。耳蜗核组织Nissl染色及电镜观察、bcl-2、bax基因蛋白、DNA-AP(凋亡峰)含量检测。结果:耳蜗核神经元病理改变,bcl-2、bax在正常耳蜗核细胞中表达,缺血-再灌注耳蜗核细胞中bcl-2、bax表达改变,DNA-AP值明显升高。结论:基底动脉缺血-再灌注损伤可引起豚鼠耳蜗核细胞损伤,其损伤方式为神经元凋亡,bcl-2和bax参与了耳蜗核缺血-再灌注损伤。

豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后Fas蛋白的表达及其与细胞凋亡的关系

目的：研究豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后凋亡相关蛋白Fas蛋白表达，以及与细胞凋亡的关系。方法：健康豚鼠随机分成正常组、假手术组、模型组。组织学方法观察缺血再灌注不同时间点耳蜗各部位的组织学改变；免疫组织化学法检测内耳Fas的表达；原位凋亡法（TUNEL法）观察耳蜗缺血及不同时间段内再灌注的细胞凋亡情况。结果：正常组及假手术组没有或仅有个别部位出现细胞凋亡，Fas为弱阳性表达；模型组Corti器、血管纹、螺旋神经节在每个时间点上均有细胞凋亡，Fas为阳性表达。结论：Fas的过度表达可能是耳蜗缺血再灌注后细胞凋亡的重要原因。

卡波金和氧气对豚鼠耳蜗作用的比较

目的 探讨卡波金和氧气对豚鼠缺血耳蜗作用的异同。方法 动物分为5组,即正常对照组、假手术组、缺血组、缺血后卡波金干预组、缺血后氧气干预组。每组20只,10只做耳蜗血流量测试,10只做ABR测试、耳蜗基底膜铺片。结果 耳蜗血流卡波金组较缺血组增加31.46％,氧气组较缺血组降低26.13％;听觉阈值卡波金组较缺血组降低5.5dBSPL,氧气组与缺血组之间无差异性,耳蜗底转毛细胞纤毛倒伏卡波金组较缺血组减轻,氧气组没有改变。结论 吸入卡波金使缺血耳蜗的血流量增加,吸入氧气使缺血耳蜗的血流量降低。卡波金可减轻缺血耳蜗形态和功能损伤,氧气对之没有改善作用。

尼莫地平和丹参对缺血-再灌注耳蜗核损伤保护作用的实验研究

目的探讨尼莫地平和丹参合用对豚鼠缺血-再灌注耳蜗核损伤的保护作用。方法选用健康花色豚鼠48只,随机分为正常组、缺血再灌注6h组、再灌注6h用药组及生理盐水组。各组动物于手术前及处死前分别测试ABR、耳蜗核组织Nissl染色及电镜观察、bcl-2、bax基因蛋白、DNA-AP含量检测。结果与缺血再灌注生理盐水组相比,用药组ABR各波潜伏期缩短、阈值降低(P<0.05),耳蜗核神经元组织结构明显恢复、bcl-2、bax、DNA-AP含量差异有统计学意义(P<0.05)。结论尼莫地平和丹参合用可以有效改善豚鼠缺血-再灌注听力损伤,对耳蜗核组织有保护作用,可能是通过bcl-2表达上调和bax表达下调,抑制了耳蜗核细胞凋亡的发生。

糖尿病对听力及耳蜗形态学结构影响的相关因素

背景:糖尿病是多种病因引起以高血糖为特征的代谢紊乱内分泌性疾病,由于患者长期高血糖状态可引起微血管病变,导致患者听力下降、耳鸣。糖尿病与听力损伤的关系密切,糖尿病听力损伤的发病机制可能与糖尿病引起的微血管病变和代谢紊乱有关。目的:从耳蜗微循环、细胞稳态、遗传及衰老等方面了解糖尿病听力损伤的原因,来揭示目前尚未完全明确的糖尿病听力损伤机制,为临床治疗方案的选择和预后的判断提供根据。方法:糖尿病与听力损伤的关系密切,糖尿病听力损伤的发病机制可能与糖尿病引起的微血管病变和代谢紊乱有关。从耳蜗微循环、细胞稳态、遗传及衰老等方面了解糖尿病听力损伤的原因,来揭示目前尚未完全明确的糖尿病听力损伤机制。结果与结论:糖尿病患者听力损伤属于糖尿病微血管病变,耳蜗微循环在听觉生理中起着十分重要的作用,内耳许多疾病与微循环障碍有关,耳蜗微循环障碍引起耳蜗缺血和缺血后再灌注损伤是导致听力损伤的重要原因。

观察动物内耳缺血再灌注对耳蜗的影响

目的探讨内耳缺血再灌注对耳蜗的影响。方法随机将豚鼠分为5组:正常组、缺血30min组、缺血30min再灌注组、缺血60min组、缺血60min再灌注组。手术经颅底暴露小脑前下动脉(AICA),缺血组使用40%FeCl3溶液诱导AICA形成血栓;缺血再灌注组经颈外静脉给予尿激酶(UK)溶解血栓。实验中采用激光多普勒血流量仪监测耳蜗血流量(CoBF),实验前后测量豚鼠听性脑干反应(ABR)值、畸变产物耳声发射(DPOAE)值,实验后耳蜗基底膜铺片硝酸银染色,光镜观察。结果血栓组在FeCl3诱导后CoBF值下降至诱导前约30%,溶栓组在用UK后CoBF恢复到诱导前大约70%。缺血时间越长ABR阈值越高,各频率DPOAE幅值下降越明显,毛细胞破坏越严重;缺血时间相等时再灌注组ABR阈值高,DPOAE幅值下降明显,毛细胞破坏严重。外毛细胞较内毛细胞更易受影响。结论缺血/再灌注可引起耳蜗的损伤。

丹参注射液对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的研究丹参对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响。方法将72只健康豚鼠随机分成正常组、假手术组、丹参干预假手术组、模型组和干预组,采用组织化学法观察缺血再灌注不同时间点耳蜗各部位的组织学改变;用原位凋亡法观察耳蜗缺血及不同时间段内再灌注的细胞凋亡情况。结果正常组、假手术组、丹参干预假手术组豚鼠内耳罕见凋亡细胞,模型组Corti器、血管纹、螺旋神经节在缺血及再灌注各个时间点上均有细胞凋亡;干预组Corti器、血管纹、螺旋神经节在缺血及再灌注各个时间点上均有细胞凋亡,凋亡指数较模型组降低(P<0.05)。结论丹参使凋亡细胞减少,对缺血再灌注损伤后的耳蜗起保护作用。

豚鼠脑缺血再灌注损伤后内耳凋亡诱导因子的表达及与细胞凋亡的关系

目的:探讨豚鼠脑缺血再灌注损伤后螺旋神经节细胞凋亡诱导因子(AIF)表达的改变、细胞凋亡的情况以及两者之间的关系.方法:健康豚鼠40只随机分成正常组、假手术组和模型组,模型组分为缺血再灌注6、24、48h3组.用H-E染色观察脑缺血再灌注不同时间段耳蜗各部位的形态学改变,用免疫组织化学和免疫印迹检测螺旋神经节细胞AIF的表达部位和表达量,用原位末端凋亡检测法(TUNEL法)检测螺旋神经节细胞凋亡的情况.结果:正常组、假手术组螺旋神经节罕见凋亡细胞,AIF为阳性表达,表达部位在细胞质;模型组螺旋神经节在缺血再灌注每个时间段均有细胞凋亡,AIF为强阳性表达,表达部位在细胞核和细胞质,与正常组比较差异有统计学意义.结论:AIF参与了豚鼠脑缺血再灌注损伤后螺旋神经节细胞凋亡的发生.

丹参对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后细胞凋亡及FasL蛋白表达的影响

目的:探讨丹参对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤(IRI)后细胞凋亡及FasL蛋白表达的影响。方法:健康豚鼠72只,随机分成正常组、假手术组、丹参干预假手术组、模型组和干预组(术前腹腔注射丹参注射液,每天1次共7 d),模型组和干预组再各分成3个亚组:缺血30 min组、再灌注6 h组及再灌注24 h组。用HE染色法观察缺血及再灌注不同时间段耳蜗各部位的形态学改变,用免疫组织化学法检测内耳FasL的表达,用原位凋亡法(TUNEL法)检测内耳细胞凋亡情况。结果:正常组、假手术组、丹参干预假手术组内耳罕见凋亡细胞,FasL为弱阳性表达;模型组Corti器、血管纹、螺旋神经节每个时间点均有细胞凋亡,FasL为阳性表达,与正常组比较有显著性差异(P<0.05);干预组Corti器、血管纹、螺旋神经节每个时间点均有细胞凋亡,FasL为阳性表达,程度较模型组减弱,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:FasL参与了耳蜗IRI后的细胞凋亡,丹参可能通过抑制FasL蛋白的表达使凋亡细胞减少而对IRI后的耳蜗起保护作用。

阿司匹林预处理对豚鼠内耳缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的研究阿司匹林(aspirin,ASA)预处理对豚鼠内耳缺血再灌注损伤(IRI)后的保护作用和保护机制。方法健康豚鼠64只,随机分为正常组、假手术组、模型组和干预组(术前腹腔注射阿司匹林50mg/kg,每天一次共7d),模型组和干预组各分成3个亚组:IRI 6h组、24h组和48h组。用HE染色法观察各组耳蜗的形态学改变;用原位凋亡法(TUNEL法)检测耳蜗各部位细胞凋亡情况。结果正常组、假手术组耳蜗罕见凋亡细胞;模型组Corti器、螺旋神经节在再灌注各个时间点均有细胞凋亡,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05);干预组Corti器、螺旋神经节在再灌注各个时间点均有细胞凋亡,程度较模型组减弱,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ASA预处理可能通过抑制细胞凋亡而对缺血再灌注损伤的内耳起保护作用。