青藤碱对SSNI模型大鼠镇痛效应及脑内兴奋性氨基酸递质的影响

目的观察青藤碱对部分坐骨神经损伤(SSNI)模型大鼠疼痛敏感行为及纹状体细胞外液兴奋性氨基酸-谷氨酸(Glu)的影响。方法 SD大鼠,随机分为假手术组和SSNI手术组,后者再分为模型组、加巴喷丁组(100 mg.kg-1)、青藤碱低剂量组(20 mg.kg-1)和青藤碱高剂量组(40 mg.kg-1)。采用机械痛敏和冷痛敏测试,评价大鼠的疼痛行为,以最大镇痛效应百分比(%MPE)反映药效。纹状体微透析采样,高效液相-荧光方法检测其细胞外液Glu浓度。结果 SSNI模型大鼠的机械、冷刺激痛感行为明显改变,脑内Glu水平明显升高。%MPE效应-时间曲线在120min内青藤碱高剂量组最高(达81.28%),加巴喷丁组第2(达50.56%),青藤碱低剂量组第3(达7.22%)。与模型组纹状体细胞外液Glu水平相比,加巴喷丁组有3个时间点、青藤碱低剂量组有4个时间点、青藤碱高剂量组有5个时间点明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论青藤碱减轻SSNI模型大鼠疼痛敏感行为,其镇痛效应可能与抑制纹状体细胞外液Glu水平有关。

神经病理性疼痛相关蛋白质在双侧慢性缩窄性损伤大鼠脊髓后角的表达

目的评估双侧慢性缩窄性损伤(CCI)大鼠的疼痛行为学改变,分析鉴定双侧CCI大鼠神经病理性疼痛相关蛋白的表达情况。方法以雌性SD大鼠为研究对象,采用双侧坐骨神经松结扎法制造双侧CCI模型,电子von Frey和丙酮刺激检测机械痛阈与冷痛阈,液相色谱-质谱/质谱联用(LC-MS/MS)技术分析鉴定CCI大鼠脊髓后角神经病理性疼痛相关蛋白质的表达情况。结果双侧CCI大鼠术后第7和14天的机械痛阈和冷痛阈较假手术组与正常组大鼠显著降低(P均<0.05)。双侧CCI大鼠与假手术大鼠比较,共发现25种差异表达蛋白质,其中表达上调18种,表达下调7种。结论双侧CCI大鼠的机械痛阈与冷痛阈显著降低,发现其脊髓后角存在25种与疼痛行为学相关的蛋白质。

基于thermoTRP介导冷痛敏机制对膝骨关节炎虚寒冷痛的研究

目的基于膝骨关节炎大鼠冷缩足潜伏期和冷刺激敏感通道蛋白TRPA1和TRPM8在患膝滑膜组织的表达变化,阐述膝骨关节炎虚寒冷痛的形成原理。方法健康4月龄SD雄性大鼠45只,体质量440~470g,随机分成KOA模型组（仅造模,无药物干预）、拮抗剂干预组（造模2周后应用TRPA1、TRPM8拮抗剂干预的大鼠）;正常组（正常健康大鼠,无药物干预）。分别于造模前3d、造模后2、4、6、8周,在3组中随机选择5只大鼠,测定冷缩足潜伏期;并于造模后第8周测定痛阈值结束后处死大鼠（CO_2窒息法）,取患膝滑膜、软骨组织样本,观察软骨组织病理切片形态,并检测滑膜组织TRPA1、TRPM8基因量及蛋白表达水平。结果造模后2周KOA大鼠出现明显的冷刺激痛敏,至造模后4周其冷刺激痛阈仍处于非正常低水平,应用TRPA1、TRPM8抑制剂能够提高KOA大鼠的冷刺激痛阈。结论 TRPA1、TRPM8表达上调参与构建膝骨关节炎冷刺激痛敏,是膝骨关节炎虚寒冷痛形成的重要基础。

基于thermoTRP对骨癌痛大鼠模型虚寒型冷痛的机理研究

目的:基于观察肿瘤骨转移大鼠转移灶周围骨组织TRPA1和TRPM8表达变化以及冷刺激缩足阈值改变,阐释骨癌痛虚寒型冷痛病机。方法:健康4月龄SD雄性大鼠45只,体质量440~470 g,随机分成模型组(仅造模,无药物干预)、模型-通道阻滞剂干预组(造模2周后应用TRPA1、TRPM8拮抗剂干预的大鼠);空白组(正常健康大鼠,无药物干预)。分别于造模前1周、造模后2、4、6、8周,在3组中随机选择5只大鼠,测定冷缩足潜伏期;并在造模后8周处死大鼠,取转移灶周围骨组织样本,观察组织病理切片形态,并检测TRPA1、TRPM8基因量及蛋白表达水平。结果:造模后2周,模型组大鼠出现明显的冷刺激痛敏,至造模后8周其冷刺激痛阈仍维持较低水平,应用TRPA1、TRPM8通道阻断剂后,骨癌痛大鼠的冷刺激痛阈能显著恢复至接近正常水平。结论:TRPA1、TRPM8通道蛋白表达的上调参与构建了骨癌痛大鼠虚寒型冷痛的病机基础。

TRPM8与神经病理性疼痛

背景传统疗法治疗神经病理性疼痛的效果不甚理想。适度的冷刺激具有镇痛作用，但是过低的温度又会引起疼痛，研究温度和疼痛的关系有助于开发神经病理性疼痛治疗的新方法。新的研究发现瞬时感受器电位（transient receptor potential，TRP）蛋白家族中可以感受冷刺激的离子通道瞬时感受器电位melastatin 8 （transient receptor potential melastatin 8，TRPM8）参与冷刺激的镇痛和致痛机制。目的提示从冷觉感受器的角度研究神经病理性疼痛的发生机制可以成为发展慢性疼痛治疗方法的新思路。内容现对TRPM8及其参与神经病理性疼痛发生机制的研究进展作一综述。趋向目前的研究已经证实，神经病理性疼痛状况下TRPM8的表达水平和功能发生变化，激活TRPM8可以产生镇痛或致痛两种截然相反的效果。如果能够阐明TRPM8介导的两种不同效应的不同信号转导通路，合理地利用TRPM8介导的镇痛效应而避开其介导的冷痛敏反应，对于神经病理性疼痛治疗方法的发展将会有重要意义。

GFRα3在神经病理性痛大鼠冷痛觉过敏时背根神经节TRPM8表达及膜转运中的作用

目的 评价神经胶质细胞源性神经营养因子家族受体α3（GFRα3）在神经病理性痛大鼠冷痛觉过敏时背根神经节瞬时感受器电位M8（TRPM8）表达及膜转运中的作用.方法 鞘内置管成功的健康成年雄性SD大鼠32只,10～12周龄,体重250～280 g,采用随机数字表法分为4组（n=8）：假手术＋GFRα3 dsRNA组（Sham＋dsRNA组）、假手术＋GFRα3 siRNA组（Sham＋siRNA组）、神经病理性痛＋GFRα3 dsRNA组（NP＋dsRNA组）和神经病理性痛＋GFRα3 siRNA组（NP＋siRNA组）.采用坐骨神经慢性束缚性损伤法建立神经病理性痛模型.于术后10～13 d时,Sham＋dsRNA组和NP＋dsRNA组鞘内注射对照的GFRα3 dsRNA,Sham＋siRNA组和NP＋siRNA组鞘内注射正义链进行2′甲基化修饰和5′胆固醇修饰的GFRα3 siRNA,10 μg∕20 μl,每天1次,连续4 d.于术前1 d、术后10、11、12、13 d（鞘内注射前）及术后14 d时测定冷板抬足次数、机械缩足反应阈（MWT）和热缩足潜伏期（TWL）.最后一次痛行为学测试后处死大鼠,取术侧L4-6背根神经节,采用Western blot法测定GFRα3、总蛋白和膜蛋白TRPM8的表达水平,并计算膜蛋白与总蛋白TRPM8表达水平的比值（m∕t比值）.结果 与Sham＋dsRNA组比较,NP＋dsRNA组和NP＋siRNA组术后冷板抬足次数增多,MWT降低,TWL缩短,NP＋dsRNA组背根神经节GFRα3、总蛋白和膜蛋白TRPM8表达上调,m∕t比值升高,NP＋siRNA 组背根神经节GFRα3表达下调（P〈0.01）,总蛋白和膜蛋白TRPM8表达水平及m∕t比值差异无统计学意义（P〉0.05）;与NP＋dsRNA组比较,NP＋siRNA组术后冷板抬足次数减少,背根神经节GFRα3、总蛋白和膜蛋白TRPM8表达下调,m∕t比值降低（P〈0.01）,MWT和TWL差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 背根神经节GFRα3可上调TRPM8表达及增强其膜转运,该作用可能参与了神经病理性痛大鼠冷痛觉过敏的维持机制.

APA微囊牛肾上腺嗜铬细胞治疗疼痛的量效时效关系研究

研究海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊牛肾上腺嗜铬细胞(BCC)治疗大鼠疼痛动物模型的量效时效关系。用结扎坐骨神经制作大鼠疼痛动物模型,将APA微囊BCC移植到动物模型的蛛网膜下腔,分别用冷致痛实验和热过敏实验观察镇痛效果。结果显示与对照组相比,细胞数量5万组、10万组和20万组收缩差异均减小(P<0.05),且随细胞量增加差异减小,表明有明显镇痛作用;40万组与20万组相比没有明显差异。这种镇痛作用可持续12周以上。以上结果表明APA微囊BCC治疗大鼠疼痛动物模型的移植细胞数量和镇痛效果呈正相关关系,有效镇痛时间在12周以上。