三棱、莪术提取物联合热疗对结肠癌SW620细胞凋亡及迁移、侵袭能力的影响

目的:研究三棱、莪术提取物联合热疗对结肠癌SW620细胞凋亡及迁移、侵袭能力的影响。方法:采用MTT法检测不同质量浓度的三棱提取物(1.25、2.5、5、7.5、10μg/mL)、莪术提取物(5、10、15、20、25μg/mL)对SW620细胞的毒性,计算其30%细胞生长抑制浓度(IC_(30))和50%细胞生长抑制浓度(IC_(50))。采用CFSE/PI双荧光染色法、Annexin V/PI双染色法+流式细胞术考察IC50三棱提取物、IC_(50)莪术提取物分别单用或联合热疗(42℃条件下处理90 min)对SW620细胞死亡情况和凋亡率的影响;采用划痕实验和Transwell侵袭实验考察IC_(30)三棱提取物、IC_(30)莪术提取物分别单用或联合热疗对SW620细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:三棱提取物IC_(30)为3.24μg/mL,IC_(50)为4.69μg/m L;莪术提取物IC_(30)为11.27μg/mL,IC_(50)为16.81μg/m L。与IC_(50)三棱提取物组或IC_(50)莪术提取物组比较,IC_(50)三棱提取物+热疗组或IC_(50)莪术提取物+热疗组的死亡细胞显著增多,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与0 h时比较,IC_(30)三棱提取物组、IC_(30)莪术提取物组、IC_(30)三棱提取物+热疗组、IC_(30)莪术提取物+热疗组细胞划痕实验的愈合间距均未见明显变窄。与IC30三棱提取物组或IC_(30)莪术提取物组比较,IC_(30)三棱提取物+热疗组或IC_(30)莪术提取物+热疗组侵袭实验的跨膜细胞数均显著减少(P<0.05)。结论:联用热疗能显著增强三棱或莪术提取物对SW620细胞的杀伤作用,并能显著提高两种提取物对SW620细胞迁移和侵袭能力的抑制作用。

麦冬皂苷B对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨麦冬皂苷B(OPB)对人结肠癌SW620细胞增殖、凋亡及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路的影响。方法采用含100 kU·L^-1青霉素、100 mg·L^-1链霉素、体积分数10%胎牛血清的RMPI-1640培养液体外培养结肠癌SW620细胞,取对数生长期细胞接种于96孔板中,细胞培养24 h后分为空白对照组、OPB低剂量组(5μmol·L^-1)、OPB中剂量组(10μmol·L^-1)和OPB高剂量组(20μmol·L^-1),然后将各组细胞培养板移入培养箱中继续培养。取各组培养24、48、72 h的SW620细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SW620的细胞抑制率。取各组培养48 h的SW620细胞,采用流式细胞术检测SW620细胞周期及凋亡情况,酶联免疫吸附试验法检测SW620细胞中TGF-β1蛋白的表达,Western blot法检测SW620细胞中磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad4及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达。结果OPB低、中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于空白对照组(P<0.05),OPB中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB低剂量组(P<0.05),OPB高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB中剂量组(P<0.05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组G 2/M期SW620细胞比例下降,G 0/G 1和S期SW620细胞比例升高(P<0.05)。与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组G 2/M期SW620细胞比例降低,G 0/G 1和S期SW620细胞比例升高(P<0.05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组G 2/M期SW620细胞比例降低,G 0/G 1和S期SW620细胞比例升高(P<0.05)。OPB低、中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05),OPB中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB低剂量组(P<0.05),OPB高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB中剂量组(P<0.05)。OPB低、中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于空白对照组(P<0.05),OPB中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB低剂量组(P<0.05);OPB高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB中剂量组(P<0.05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。结论OPB可明显抑制人结肠癌SW620细胞增殖,其机制可能与OPB阻滞TGF-β1/Smad信号通路有关。

TF/Ⅶa活化PAR2后经钙信号促进SW620细胞的增殖和迁移

目的探讨钙信号参与凝血因子Ⅶa依赖组织因子(TF)激活蛋白酶活化受体2(PAR2),从而促进结肠癌SW620细胞增殖、迁移的可能机制。方法Ⅶa(10 nmol/L)及PAR2激动剂(PAR2-AP,100μmol/L)作用负载fluo-4/AM的SW620细胞,激光共聚焦显微镜测定细胞内钙离子荧光强度的变化;钙抑制剂EGTA(1 mmol/L)和毒胡萝卜内酯(thapsigargin,TG,1μmol/L)预处理细胞后,Ⅶa(10 nmol/L)、PAR2-AP(100μmol/L)再分别处理细胞,western blot检测p-ERK1/2、t-ERK1/2蛋白的表达;MTT法及流式细胞术检测SW620细胞的增殖情况、transwell法检测细胞迁移的变化。结果Ⅶa(10 nmol/L)和PAR2-AP(100μmol/L)处理SW620细胞后,胞内钙离子荧光强度瞬时升高后降低,分别在60、30 s达到峰值;EGTA和TG预处理细胞,能明显降低Ⅶa、PAR2-AP对p-ERK1/2蛋白的活化作用(P<0.05),抑制其对细胞增殖和迁移的促进作用。结论 TF/Ⅶa激活PAR2后,经钙信号通路活化下游ERK1/2信号,促进SW620细胞的增殖和迁移。

miR-138靶向调控PDK1基因抑制人结肠癌SW620细胞侵袭

目的探讨人结肠癌SW620细胞中miR-138和PDK1基因的表达,阐明miR-138对PDK1基因的靶向调控作用以及对SW620细胞侵袭性的影响。方法培养SW620细胞并应用免疫荧光检测PDK1基因在细胞中的表达。采用生物信息学方法对miR-138和PDK1基因的靶向匹配关系进行预测并应用双荧光素酶报告基因系统鉴定。脂质体2000转染miR-138模拟物后,qRT-PCR检测miR-138和PDK1基因的表达,Western blot检测PDK1蛋白的表达,Transwell小室检测SW620细胞体外的侵袭性。结果倒置相差显微镜下可见人结肠癌SW620细胞均匀分布,形态规则均一;细胞免疫荧光显示细胞内有PDK1蛋白的表达,显示红色荧光。靶基因预测软件miRanda和Target Scan显示miR-138和PDK1基因匹配良好,双荧光素酶报告基因系统鉴定发现miR-138能够结合PDK1 m RNA 3’UTR并有效抑制其表达。qRTPCR和Western blot检测结果表明过表达miR-138能够导致PDK1基因表达的下降。Transwell实验表明miR-138的过表达能够抑制SW620细胞的侵袭。结论 miR-138通过靶向作用于PDK1 m RNA 3’UTR能够负性调控PDK1基因的表达,并能够抑制人结肠癌SW620细胞的侵袭。

桑椹汁对结肠癌细胞株SW620增殖和凋亡的影响

为证实桑椹的抗肿瘤功能,以不同浓度桑椹汁处理结肠癌细胞株SW620,应用MTT法对比绘制生长曲线,调查SW620细胞的增殖情况,通过荧光定量PCR、SDS-PAGE检测SW620细胞凋亡相关基因p53的转录及蛋白质表达变化,分析桑椹汁对SW620细胞增殖、凋亡的影响机制。结果显示,桑椹汁对SW620细胞增殖的抑制作用随着桑椹汁浓度的升高而明显增强,以花青素质量浓度为6.267 3×10-3mg/mL的桑椹汁处理24 h后SW620细胞发生了以下变化:细胞的生长明显受到抑制,细胞脱落、变形与贴壁性下降,出现凋亡现象;细胞基因组DNA发生较明显的降解;荧光定量PCR检测细胞中p53基因的转录水平较对照组增加约6.5倍,SDS-PAGE检测p53蛋白的表达量也明显高于对照组。研究结果表明,桑椹汁对结肠癌细胞株SW620的增殖有抑制作用,其抑制机制可能是通过其活性物质诱导SW620细胞中p53基因上调表达导致细胞凋亡。

RNA干扰敲减PIWIL1表达对人结肠癌细胞SW620增殖,粘附及侵袭能力影响

PIWIL1为AGO蛋白(Argonaute proteins)PIWI亚家族的成员之一,在睾丸中特异表达.其在干细胞自我更新、RNA干扰和翻译调节中起着重要的作用.本文采用实时PCR方法检测PIWI基因家族中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4在人结肠癌SW620细胞中mRNA表达水平,首次证实了在SW620细胞中,PIWIL1相对PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4,其表达水平最高(P(0.05).构建表达针对PIWIL1的小发卡结构干扰RNA的重组质粒,并用Western印迹验证其达到较高的干扰效率.用脂质体将重组质粒转染入SW620细胞中,通过MTT实验、集落形成实验、细胞聚集实验及细胞侵袭转移实验,分别观察到其可抑制SW620细胞的生长、增殖、侵袭转移能力,增强了SW620细胞的粘附能力.提示PIWIL1可能在结肠癌发生、发展过程中发挥作用.

Id1和Id3协同诱导结肠癌SW620细胞EMT并影响其侵袭与迁移

目的:探讨分化抑制因子1基因(inhibitor of differentiation-1, Id1)和Id3是否协同促进结肠癌SW620细胞EMT和细胞的侵袭迁移能力及其可能的机制。方法:利用慢病毒载体构建Idl和Id3单或双基因敲减的结肠癌SW620细胞,实验分为4组:SW620-Sh-Id1组(转染shRNA-Id1)、SW620-Sh-Id3组(转染shRNA-Id3)、SW620-Sh-Id1-Id3组(共转染shRNA-Id1和shRNAId3)、SW620-NC组(转染阴性空载慢病毒)。用qPCR法和Western blotting法分别检测敲减效果,显微镜下观察稳定下调Idl和Id3后SW620细胞形态的变化,划痕愈合实验和Transwell小室法检测SW620细胞迁移和侵袭的变化,Western blotting检测EMT标志分子及迁移、侵袭相关蛋白的表达。结果:成功构建了Idl和Id3单基因敲减与双基因敲减的结肠癌SW620细胞株。(1)Idl和Id3的敲除诱导SW620细胞形态由上皮样向间质样转变;(2)与对照组相比,SW620-Sh-Id1组和SW620-Sh-Id3组SW620细胞侵袭和迁移的能力显著下降(均P<0.05);SW620-Sh-Id1-Id3组细胞侵袭和迁移的能力较SW620-Sh-Id1组和SW620-Sh-Id3组也明显下降(均P<0.05);(3)与对照组相比,SW620-Sh-Id1组和SW620-Sh-Id3组β-catenin、snail1及MMP2蛋白表达降低,上皮黏蛋白及TIMP2蛋白表达增高(均P<0.05);SW620-Sh-Id1-Id3组与SW620-Sh-Id1组和SW620-Sh-Id3组相比,β-catenin、snail1及MMP2蛋白表达也下降,同时上皮钙黏蛋白及TIMP2蛋白表达也增高(均P<0.05)。结论:Id1和Id3可能通过诱导EMT协同影响结肠癌SW620细胞侵袭与迁移的能力。

RNAi下调FAK基因对大肠癌细胞SW620侵袭及转移能力的影响

目的观察应用RNAi技术下调局部粘着斑激酶(FAK)基因表达对SW620细胞侵袭及转移能力的影响。方法利用前期构建的针对FAK基因有效的短发夹RNA(sh RNA)序列的慢病毒表达载体,包装慢病毒并感染人结肠癌细胞SW620。运用免疫印记(Western-blot)从蛋白水平检测FAK基因的表达,Transwell小室模型分别检测敲减FAK基因表达对SW620细胞的侵袭及转移能力的影响。结果用慢病毒敲减FAK后的大肠癌细胞,蛋白水平FAK表达明显下调,SW60细胞的侵袭及转移能力均受到明显抑制。结论下调FAK的表达水平,能明显抑制大肠癌SW620细胞的侵袭及转移能力。

青藤碱通过TNF-α、IL-23及β-catenin抑制人结肠癌细胞增殖

目的探讨青藤碱对人结肠癌SW620细胞增殖的影响,及其对TNF-α、IL-23及β-catenin表达水平的影响。方法体外培养的人结肠癌SW620细胞,经过不同浓度的青藤碱处理后,采用MTT法观察细胞增殖改变,应用ELISA法测定细胞培养液中TNF-α、IL-23的含量,Western blotting方法检测人结肠癌细胞中β-catenin的表达水平。结果与空白对照组相比,青藤碱显著抑制人结肠癌SW620细胞增殖,且呈现浓度与时间依赖性,不同浓度组别间差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,青藤碱作用人结肠癌SW620细胞后,细胞上清中TNF-α、IL-23表达水平显著下调(P<0.01),且SW620细胞β-catenin表达水平也明显下降(P<0.05)。结论青藤碱抑制人结肠癌SW620细胞增殖,其机制可能与TNF-α、IL-23及β-catenin表达下调有关。

TRAP1在结肠癌组织中的表达与病理特征和患者预后的关系及其可能的机制

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)在结肠癌组织和细胞中的表达及其与临床病理特征和患者预后的关系和相关分子机制。方法:通过TCGA和GEO数据全面分析TRAP1在结肠癌中的表达及其与临床病理特征和患者预后的关系,选取2020年10月至2021年03月间在山西医科大学第一医院手术切除的10例结肠癌组织及相应癌旁组织标本,用IHC染色法检测中国人结肠癌组织中TRAP1的表达进行验证,运行R包(survival和survminer)进行Kaplan-Meier生存分析;在线分析TRAP1蛋白的信号肽及穿膜结构域,通过基因富集分析软件进行GO分析和KEGG分析。培养结肠癌SW480和SW620细胞,将si-NC和si-TRAP1转染结肠癌细胞,实验分为空白对照组、si-NC组和si-TRAP1组,采用qPCR法检测转染后各组结肠癌细胞中TRAP1的表达,FCM检测转染后各组细胞的细胞周期和凋亡情况。结果:与癌旁组织比较,TRAP1在结肠癌组织中呈高表达(P<0.01),TRAP1表达水平与淋巴结转移有关联(P<0.05),TRAP1高表达组结肠癌患者5年OS率较低(P<0.05)。TRAP1蛋白属于细胞质蛋白,功能富集结果显示TRAP1及其相关分子与细胞周期、核糖体生物发生等信号通路有关(均P<0.01),TRAP1高表达组的结肠癌代谢重编程基因簇和线粒体蛋白输入基因簇水平升高(均P<0.01)。敲减TRAP1后,结肠癌细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡水平显著升高(均P<0.01)。结论:TRAP1在结肠癌组织中呈高表达,且与患者淋巴结转移和低OS率相关联,敲减TRAP1可阻滞结肠癌细胞周期并促进其凋亡。

川芎内酯抑制结肠癌细胞的生长和肿瘤干细胞样特性

【目的】探讨川芎内酯对结肠癌细胞的抑制作用及其机制。【方法】(1)体外研究:选择SW620和SW480 2种结肠癌细胞株。应用不同浓度的川芎内酯处理细胞24 h后,用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力。选择浓度为0、25、50、100μmol/L的川芎内酯处理SW620和SW480细胞株,采用克隆形成实验检测增殖能力,采用流式细胞术检测癌细胞凋亡,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (Caspase-3)及裂解的Caspase-3(cleaved Caspase-3)的表达,采用流式细胞术检测线粒体膜电位的变化,按照试剂盒说明方法检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,应用显微镜观察SW620和SW480干细胞成球情况,采用Aldefluor分析法检测乙醛脱氢酶(ALDH)活性,采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测干细胞标记物Nanog、八聚体结合转录因子4(OCT4)和性别决定域Y蛋白2(SOX2)的表达。(2)体内研究:裸鼠皮下接种SW480细胞构建荷瘤模型,加药组给予川芎内酯5 mg/kg处理,每5 d检测瘤体积。30 d后,处死祼鼠取出肿瘤称质量,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色检测肿瘤组织细胞凋亡,免疫组织化学法检测肿瘤组织中p21和SOX2的表达,按照试剂盒说明方法检测肿瘤组织MDA和SOD含量。【结果】与川芎内酯0μmol/L组比较,川芎内酯50μmol/L对SW620细胞活力有明显抑制作用(P<0.05),川芎内酯25μmol/L对SW480细胞活力有明显抑制作用(P<0.05)。川芎内酯明显降低结肠癌细胞存活率(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05),上调p21和cleaved Caspase-3的表达水平(P<0.05),降低线粒体膜电位,增加SOD的含量(P<0.05),减少MDA的含量(P<0.05),减小结肠癌细胞成球直径的大小(P<0.05),降低ALDH活性及Nanog、OCT4和SOX2的表达(P<0.05)。体内移植实验结果显示,川芎内酯减小肿瘤体积(P<0.05),增加肿瘤组织中TUNEL阳性细胞数目(P<0.05),减少p21和SOX2阳性细胞数(P<0.05),增加SOD的含量(P<0.05),减少MDA的含量(P<0.05)。【结论】川芎内酯在体内、体外均可抑制结肠癌细胞的生长,主要通过诱导氧化应激、破坏线粒体功能诱导细胞凋亡,抑制结肠癌干细胞特性阻止结肠癌发生转移。

高压氧辅助健脾解毒方处理对体外培养人结肠癌SW620细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨高压氧(HBO)辅助健脾解毒方处理对体外培养人结肠癌SW620细胞恶性生物学行为的影响及其作用机制。方法体外培养人结肠癌SW620细胞完成后,按照实验设计分成4组:对照组、HBO组、健脾解毒方组和联合组。对照组SW620细胞不作如何处理,HBO组予以0.25 MPa HBO处理,健脾解毒方组予以1.50 mg/ml健脾解毒方制剂处理,联合组予以1.50 mg/ml健脾解毒方剂处理后再予以0.25 MPa HBO处理。首先在200倍倒置显微镜下观察SW620细胞形态的变化,采用MTT法检测SW620细胞的增殖能力,利用Hoechst 33258染色法检测SW620细胞凋亡情况,划痕实验检测SW620细胞迁移能力,Western blotting实验检测SW620细胞内凋亡蛋白的表达水平。结果处理48 h后,倒置显微镜下发现健脾解毒方组SW620细胞密度轻度减少,悬浮细胞稍微增多;联合组SW620细胞密度明显减少,部分细胞皱缩变圆,悬浮细胞明显增多(P<0.05)。Hoechst 33258荧光染色发现对照组和HBO组SW620细胞核形态和数量变化不明显;健脾解毒方组SW620细胞核呈致密浓染,形态异常,颜色发白,出现部分细胞凋亡;联合组SW620细胞核更加致密浓染,凋亡细胞明显增多(P<0.01);健脾解毒方组和联合组SW620细胞迁移能力受到明显抑制,联合组划痕愈合率明显高于健脾解毒方组(35.4%vs.48.9%,P<0.05);对照组、HBO组、健脾解毒方组SW620细胞G1期、S期和G2期变化不明显(P>0.05);而联合组SW620细胞G1期明显降低,S期明显增高(P<0.05),而G2期变化不明显(P>0.05);与对照组、健脾解毒方组、HBO组比较,联合组SW620细胞内凋亡蛋白Bax、caspase-3、Cytochrome C表达水平明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论HBO辅助健脾解毒方处理对SW620细胞具有抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡及抑制细胞迁移的作用,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,提高Bax、caspase-3、Cytochrome C蛋白表达水平有关。

桔梗皂苷D抑制人结肠癌SW620细胞增殖及其机制的研究

目的研究桔梗皂苷D对人结肠癌SW620细胞增殖的影响及作用机制。方法采用人结肠癌细胞株SW620细胞,分别以四甲基偶氮唑蓝法观察桔梗皂苷D对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞术检测桔梗皂苷D对细胞周期分布和凋亡的影响,蛋白质免疫印迹法检测桔梗皂苷D对细胞周期蛋白和凋亡蛋白表达的影响。结果与空白对照组比较,桔梗皂苷D呈剂量依赖地抑制人结肠癌SW620细胞的生长;15、20μmol·L-1桔梗皂苷D作用细胞24h后,显著增加G0/G1期细胞比例,分别为(72.83±5.26)%和(76.82±5.83)%(P<0.05,空白对照组(56.78±4.92)%,周期蛋白cyclinD1、c-myc、CDK6表达明显下调;10、15、20μmol·L-1桔梗皂苷D作用细胞48h后,明显增加细胞凋亡率,分别为(19.5±5.1)%、(35.8±5.3)%和(43.8±4.0)%(P<0.05,空白对照组(8.93±5.72)%,相关蛋白pro-caspase3、PARP表达下降。结论桔梗皂苷D通过调控周期蛋白cyclinD1、c-myc、CDK6的表达,将细胞阻滞于G1期,进而诱导细胞凋亡,抑制人结肠癌细胞SW620的增殖。

五味子乙素通过VEGF/PI3K/Akt信号通路抑制人结肠癌细胞SW620的增殖和迁移

目的研究分析结肠癌患者血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路的改变,以及五味子乙素对SW620细胞的影响,并分析其可能的作用机制。方法蛋白印迹实验检测结肠癌患者正常肠道组织和癌变肠道组织中VEGFA、VEGF-R2、磷脂酰肌醇-3羟基激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、Akt、p-Akt蛋白的表达,CCK-8法检测五味子乙素对SW620细胞增殖的影响,Transwell检测五味子乙素对SW620细胞迁移的影响;实时荧光定量PCR法检测SW620细胞内VEGFA、VEGF-R2、PI3K、Akt基因表达水平;免疫印迹法检测SW620细胞内VEGFA、VEGF-R2、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果与正常肠道组织相比,结肠癌患者癌变肠道组织内VEGF-R2、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与对照组比较,五味子乙素可以显著抑制SW620细胞的增殖和迁移(P<0.01),同时可以显著降低SW620细胞内VEGFA、VEGF-R2、PI3K、Akt基因表达水平和蛋白表达水平(P<0.01)。结论结肠癌患者肠道内VEGF/PI3K/Akt信号通路被激活,五味子乙素可以抑制SW620细胞的活性和迁移,同时抑制VEGF/PI3K/Akt信号通路。

δ-生育三烯酚诱导人结肠癌细胞SW620副凋亡作用研究

目的探讨δ-生育三烯酚诱导人结肠癌细胞SW620副凋亡作用及其机制。方法以MTr试验观察0～30μmol／L δ-生育三烯酚对人结肠癌细胞SW620及人胃黏膜上皮细胞GES-1细胞增殖作用的影响，观察1．0μmol／L放线菌酮（CHX）对15μmol/L δ-生育三烯酚诱导人结肠癌细胞SW620副凋亡的抑制作用。以Westernblot检测0～20μmol/L δ-生育三烯酚对人结肠癌细胞SW620中增殖与凋亡关键信号通路Notch 1及Jagged1蛋白表达的影响。以透射电镜检测15μmol／L δ-生育三烯酚对人结肠癌细胞SW620副凋亡的形态学特征的影响。结果与溶剂对照组相比，用不同剂量的δ-生育三烯酚（终浓度为5、10、15、20、25、30μmol／L）分别作用于SW620及GES-1细胞24h，SW620细胞存活率下降（P〈0．05），而GES-1细胞存活率未见明显下降（P〉0．05）。提前给予1．0μmol／LCHX处理的细胞，经15μmol／L生育三烯酚诱导SW620凋亡作用24h后，SW620存活率较单独加入生育三烯酚作用的细胞存活率增高（P〈0．05）。1．0μmol／L CHX和15μmol／L δ-生育三烯酚共同作用于SW620细胞24h后，Notchl、Jaggedl蛋白表达量与对照组相比分别上升41．8％、41．9％。透射电镜下15μmol／L δ-生育三烯酚作用24h后，SW620细胞在形态学上呈现副凋亡特征，1．0μmol／L CHX能抑制生育三烯酚诱导SW620的副凋亡作用。结论6一生育三烯酚能诱导SW620细胞paraptosis样副凋亡，并且这一过程可以被CHX抑制。

δ-生育三烯酚对结肠癌细胞SW620中Wnt信号途径的影响

目的依据生育三烯酚的抗肿瘤作用,研究其对结肠癌细胞SW620细胞增殖抑制作用与Wnt信号途径之间的关系。方法采用MTT方法,观察不同剂量δ-生育三烯酚对细胞增殖抑制作用,通过Real-time RT-PCR检测Wnt途径相关因子mRNA的表达量变化情况,观察δ-生育三烯酚对细胞中wnt-1、β-catenin、c-jun、c-myc、cyclin D1及MMP-7mRNA表达水平的影响。结果δ-生育三烯酚对结肠癌SW620细胞增殖有明显抑制作用,20μmol/Lδ-生育三烯酚作用24 h对SW620细胞抑制率为70.43%,IC50值为15.18μmol/L。20μmol/Lδ-生育三烯酚对Wnt信号途径中的wnt-1、β-catenin、c-jun及c-myc mRNA表达降低(P<0.05);对cyclin D1及MMP-7 mRNA的表达无影响(P>0.05)。结论δ-生育三烯酚对结肠癌SW620细胞增殖抑制作用可能与其致Wnt途径中wnt-1、β-catenin、c-jun及c-myc表达降低有关。

TGF-β1对SW620结肠癌细胞PD-L1表达的影响

目的研究TGF-β1对SW620结肠癌细胞体外增殖、迁移和PD-L1表达的影响,探讨ERK、AKT在TGF-β1调节PD-L1表达中的作用。方法 MTT法检测TGF-β1对SW620细胞增殖能力的影响;细胞划痕方法检测TGF-β1对SW620细胞迁移能力的影响;Real-time PCR、Western blot和免疫细胞化学方法分别检测TGF-β1对SW620细胞PD-L1 mRNA和蛋白表达的影响;Western blot检测TGF-β1处理后SW620的ERK、AKT表达变化及抑制ERK、AKT后PD-L1的表达情况。结果 SW620细胞培养24h、TGF-β1浓度为0~20ng/ml时,细胞活性随浓度升高而增加;培养48h时TGF-β1为10ng/ml时细胞活性最强。TGF-β1处理后SW620迁移无明显变化,TGF-β1上调SW620细胞PD-L1 mRNA和蛋白表达水平,增强SW620细胞ERK、AKT蛋白磷酸化水平,抑制ERK和AKT后,TGF-β1促进PD-L1表达的作用受到抑制。结论 TGF-β1促进SW620细胞体外增殖,但不影响其迁移,促进SW620细胞表达PD-L1,且这种促进作用可能与ERK、AKT有关。

miR-200c对结肠癌SW620细胞5-FU化学敏感性的影响

目的探讨结肠癌SW620细胞株中微小核糖核酸-200c(miR-200c)的表达对5-氟尿嘧啶(5-FU)化学敏感性的影响。方法实验分为miR-200c类似物转染SW620细胞株组(A组)、miR-200c类似物阴性对照转染组(B组)、miR-200c抑制物转染SW620细胞株组(C组)、miR-200c抑制物阴性对照转染组(D组)和空白对照组(E组)。采用RT-PCR、MTS及流式细胞术分别检测转染后细胞中miR-200c的表达、5-FU半数抑制浓度(IC50)及细胞凋亡;Western blot检测转染后细胞中磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-Akt)的表达。结果与B组相比,A组转染24h后miR-200c的表达水平提高了(35.94±0.39)倍(P<0.05),5-FU的IC50提高[(1512.67±0.48)μg/ml vs.(926±0.70)μg/ml](P<0.05),5-FU促细胞凋亡的作用降低[(5.01±0.25)%vs.(8.07±0.16)%](P<0.05)。与D组相比,C组miR-200c的表达水平降低了(19.61±0.86)倍(P<0.05),5-FU的IC50降低[(740±0.60)μg/ml vs.(941±0.59)μg/ml](P<0.05),5-FU促细胞凋亡作用提高[(12.23±0.60)%vs.(8.22±0.18)%](P<0.05)。转染48h后,A组p-Akt的表达较B组升高(P<0.05),C组p-Akt表达较D组降低(P<0.05)。结论在结肠癌SW620细胞中,降低miR-200c的表达可提高结肠癌细胞对5-FU的化学敏感性,可能与miR-200c调控Akt的磷酸化有关。

抑癌候选基因NDRG2对结肠癌细胞SW620的迁移和侵袭力的影响

目的:观察NDRG2对结肠癌SW620细胞侵袭、转移等生物学行为的影响,探讨其可能的调节机制。方法:用阳离子脂质体转染方法分别转染pcDNA3.1-Ndrg2和SiRNA-Ndrg2于SW620细胞内48h,上调/下调NDRG2的表达;检测NDRG2基因mRNA及蛋白表达水平的变化;通过划痕试验及transwell细胞侵袭试验进一步对上调/下调NDRG2表达水平后的结肠癌细胞迁移和侵袭能力进行分析。结果:pcDNA3.1-Ndrg2转染SW620后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显升高,细胞的迁移和侵袭能力下降;SiRNA-Ndrg2转染SW620后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞的迁移和侵袭能力上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:NDRG2作为抑癌候选基因能够降低结肠癌细胞转移和侵袭能力。

microRNA-433对人结肠癌细胞系Sw620生物学行为的影响

目的探讨microRNA-433对人结肠癌细胞Sw620生物学行为的影响。方法应用细胞转染技术,使Sw620细胞中高表达miR-433并通过实时PCR检测转染效率。将细胞分为con组和高表达miR-433的433组。采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell小室实验检测细胞迁移。结果Sw620细胞转染48h后,与con组相比,433组中miR-433表达升高(P<0.001),细胞增殖受到抑制(P<0.05),细胞迁移受到抑制(P<0.01),细胞凋亡及细胞周期无明显变化(P>0.05)。结论miR-433抑制Sw620细胞的增殖和迁移,但对细胞凋亡及细胞周期无明显作用。