肝特异性胰岛素样生长因子-Ⅰ基因缺失鼠结肠癌肝转移模型的建立

目的 在肝特异性胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )基因缺失鼠体内建立稳定的结肠癌肝转移模型 ,探讨血液循环中IGF Ⅰ水平在刺激小鼠结肠癌生长和转移中的作用。方法 将Colon 38腺癌组织块 (碎片 )植入肝脏特异性IGF Ⅰ基因缺失鼠 (LID)和对照组小鼠的盲肠表面。总共 15 6只 5周龄的雄鼠 (其中 74只对照 ,82只LID小鼠 )接受了肿瘤移植。小鼠被随机分成两组 :一组接受腹腔注射重组人IGF Ⅰ (rhIGF Ⅰ ) ,每天 2次 ,共 6周 ,另一组接受生理盐水注射。结果 接受rhIGF Ⅰ注射的LID鼠和对照小鼠 ,血清IGF Ⅰ和胰岛素样生长因子结合蛋白 3(IGFBP 3)水平均升高。在生理盐水注射组中 ,对照鼠的盲肠肿瘤的发生率和肝脏转移率显著高于LID小鼠。和生理盐水注射组比较 ,腹腔注射rhIGF Ⅰ组中 ,LID和对照组小鼠均有显著的盲肠癌发生率和肝脏转移率。对照小鼠的肝脏转移结节数明显高于LID鼠。结论 在LID小鼠及对照组小鼠体内建立了稳定的结肠癌肝转移模型 ,结果表明血液循环中IGF Ⅰ水平在结肠癌发展和转移中起了重要作用。

肿瘤的G-CSF基因治疗及肿瘤原位细胞生物学特性

目的：研究瘤体内注射脂质体包裹的Ｇ－ＣＳＦ基因的抗肿瘤作用及其可能机制。方法：将脂质体包裹的Ｇ－ＣＳＦ基因直接注射至小鼠结肠癌瘤体内，观察Ｇ－ＣＳＦ基因治疗的抗肿瘤效果及肿瘤细胞性状的变化。结果：瘤体内注射脂质体包裹的Ｇ－ＣＳＦ基因后，可明显抑制结肠癌小鼠肿瘤的生长，显著延长存活期；配合大剂量化疗后效果更显著，有３０％的小鼠存活９０ｄ以上。从瘤体内分离的肿瘤细胞，经Ｇ４１８（６００μｇ／ｍｌ）抗性筛选后，产生抗Ｇ４１８的抗性克隆，并分泌人Ｇ－ＣＳＦ（ｈＧ－ＣＳＦ）；经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ鉴定显示，该肿瘤细胞可表达Ｇ－ＣＳＦｍＲＮＡ；肿瘤细胞表面表达ＩＣＡＭ－１分子、ＭＨＣⅠ类抗原（Ｈ－２Ｋｄ）均明显高于对照组。结论：瘤体内注射脂质体包裹的Ｇ－ＣＳＦ基因后，可在肿瘤原位将Ｇ－ＣＳＦ基因转染肿瘤细胞并有效表达，提高肿瘤细胞的免疫原性。

肠安Ⅰ号方对肠易激综合征内脏高敏感大鼠5-HT信号系统及海马BDNF mRNA表达的影响

目的探讨肠安Ⅰ号方对肠易激综合征内脏高敏感大鼠5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)信号系统及海马脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA表达的影响。方法采用慢性束缚应激结合游泳致疲劳法建立肠易激综合征内脏高敏感大鼠模型,将造模成功的大鼠按体重区组随机分为模型组(9只)、得舒特组(9只,27 mg/kg)、氟西汀组(9只,3.6 mg/kg)、肠安Ⅰ号高剂量组(9只,22.6 mg/kg)、中剂量组(9只,11.3 mg/kg)、低剂量组(9只,5.7 mg/Kg),另设正常组(10只)。各给药组给予相应药物灌服,模型组按照给药体积灌服生理盐水,1次/日,共干预14日。通过腹部回缩反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)评分标准确定疼痛压力阈值,免疫组化方法检测结肠5-HT水平的变化,免疫荧光RT-PCR法检测大鼠海马组织5-羟色胺1A受体(5-hydroxytryptamine 1A receptor,5-HT1a)、BDNF mRNA表达。结果与正常组比较,用药前各组大鼠直肠扩张时的疼痛阈值明显降低(P<0.01)。与正常组比较,用药后模型组大鼠疼痛阈值明显下降,结肠5-HT水平及海马5-HT1a、BDNF mRNA表达明显升高(P<0.01)。与模型组比较,氟西汀组、肠安Ⅰ号各剂量组疼痛阈值明显上升,得舒特组、肠安Ⅰ号高、中剂量组结肠5-HT水平明显降低(P<0.05,P<0.01),肠安Ⅰ号各剂量组海马组织5-HT1a、BDNF mRNA表达明显降低(P<0.01),氟西汀组海马组织BDNF mRNA表达亦明显降低(P<0.01)。结论肠安Ⅰ号方的作用靶点部位涉及"脑-肠"两部分,可降低大鼠直肠扩张疼痛域值,下调结肠黏膜5-HT水平,下调海马组织中BDNF和5-HT1a mRNA的表达。

CFA／Ⅰ重组克隆定居因子菌毛抗原的纯化及形态学观察

用基因重组技术获得的高效表达肠毒素大肠杆菌定居日子抗原Ⅰ（ＣＦＡ／Ⅰ）的重组克隆，通过匀浆破碎、硫酸铵分级盐析部分纯化，再经超速离心及ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０柱层析，得到了ＣＰＡ／Ⅰ的纯化样品，得率约为０．９ｍｇ／ｇ湿菌。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）显示一条蛋白质带，其分子量为１５ｋＤａ，与天然ＣＦＡ／Ⅰ相同。免疫扩散和蛋白质印迹试验证明，纯化的重组克隆ＣＦＡ／Ⅰ与天然ＣＦＡ／Ⅰ具有相同的抗原性及免疫原性。并在电镜下观察了ＣＦＡ／Ⅰ的菌毛形态。

大肠癌明胶酶和TGF-β1及其受体的表达

目的研究明胶酶(MMP-2,9)与转化生长因子(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TGF-β1RⅠ)在大肠癌组织中的蛋白表达及其相互关系。方法应用免疫组织化学S-P法检测89例大肠癌组织中MMP-2、MMP-9与TGF-β1、TGF-β1RⅠ蛋白的表达。结果大肠癌MMP-2、MMP-9、TGF-β1和TGF-β1RⅠ阳性率分别为67.4%、65.2%、85.4%和71.9%;MMP-2表达与肿瘤大小和淋巴结转移均呈正相关(均P<0.01),MMP-9表达与淋巴结转移呈正相关(P<0.01),TGF-β1RⅠ的表达与淋巴结转移呈负相关(P<0.01);TGF-β1表达状况与MMP-2和MMP-9的表达均呈显著正相关(r=0.256和0.365,P<0.05和0.001),TGF-β1RⅠ和MMP-9的表达呈显著正相关(r=0.225,P<0.05)。结论MMP-2,9的表达情况与大肠癌侵袭转移有密切关系。MMP-2,9的表达与TGF-β1、TGF-β1RⅠ关系密切,可能在一定程度上受到TGF-β1及其受体的调控。