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Antiviral Activity of Silkworm Expressed Recombinant Human Macrophage Colony-Stimulating Factor in Vitro and Its Mechanism
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作者 季晓辉 +4 位作者 秦浚川 吴筱玲 李焕娣 周瑶玺 朱德熙 《The Journal of Biomedical Research》 CAS 1998年第2期64-69,共6页
Cells, pretreated with the recombinant human macrophage colony-stimulating factor (rhM-CSF) expressed in silkworm larvae, were inoculated with several viruses to observe the effect of rhM-CSF on viral replication. The... Cells, pretreated with the recombinant human macrophage colony-stimulating factor (rhM-CSF) expressed in silkworm larvae, were inoculated with several viruses to observe the effect of rhM-CSF on viral replication. The results showed that in cultures of fibroblast derived from human fetal skin-muslce tissues infected with the viruses (including VSV, rhinovirus, influenza virus type A3, HSV-1, HSV-2, adenovirus type 6 and type 11), rhM-CSF inhibited the virus-induced cytopathy, which defered or relieved the cytophathy and that in the cells derived from breast feeding rabbit kidney infected with HSV-1, rhM-CSF reduced titer of the virus in a rhM-CSF dose-dependent pattern,in which rhM-CSF with the dose of 1×106 U/L made the viral titer drop dwon over 200 times. This antiviral activity of rhM-CSF could be partially neutralized by anti-IFN-βMcAb, but not by antiTNF-α, anti-IFN-α, or anti-IFA-γ McAb, indicating the mechanism of the antiviral activity of MCSF is related to the induction of IFN-β. 展开更多
关键词 macrophage colony-stimulating factor antiviral activity
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Influence of granulocyte-macrophage colonystimulating factor and tumor necrosis factor on anti-hepatoma activities of human dendritic cells 被引量:8
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作者 Jin Kun Zhang Jin Lun Sun +2 位作者 Hai Bin Chen Yang Zeng Yao Jun Qu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2000年第5期718-720,共3页
INTRODUCTIONDendritic cells (DCs) play a key regulatory role inantitumor immunity,especially in its immuneaccessory role via MHC-Ⅰ molecules.We haverecently reported that DCs were able to enhance thekilling activity ... INTRODUCTIONDendritic cells (DCs) play a key regulatory role inantitumor immunity,especially in its immuneaccessory role via MHC-Ⅰ molecules.We haverecently reported that DCs were able to enhance thekilling activity of Lymphokine and PHA activatedkiller (LPAK) cells in vitro.In the presentstudy,we evaluated the effects of GM-CSF andTNF upon antitumor activities of freshly 展开更多
关键词 dendritic cells granulocytemacrophage colony-stimulating FACTOR tumor necrosis FACTOR anti-hepatoma cell ACTIVITIES in VITRO peripheral blood
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血管瘤患儿血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子及转录激活因子3水平与瘤体增生的相关性
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作者 钱国庆 蔡昶 +2 位作者 李丹 黄凯 张兴涔 《中国小儿血液与肿瘤杂志》 CAS 2024年第1期27-31,共5页
目的探索血管瘤患儿血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及转录激活因子3(STAT3)的表达水平并分析其与瘤体增生的相关性。方法选取2020年1月—2023年1月收治的152例血管瘤增生患儿作为研究对象,分为增生期组(87例)与退化期组(65例)... 目的探索血管瘤患儿血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及转录激活因子3(STAT3)的表达水平并分析其与瘤体增生的相关性。方法选取2020年1月—2023年1月收治的152例血管瘤增生患儿作为研究对象,分为增生期组(87例)与退化期组(65例),另选择同期确诊为血管畸形的53例患儿作为血管畸形组。对血清GM-CSF、STAT3及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管生成素-1(Ang-1)的表达水平进行检测;Pearson法相关性分析血清GM-CSF、STAT3与bFGF、VEGF、HIF-1α、Ang-1的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清GM-CSF、STAT3对血管瘤瘤体增生的预测价值;多因素Logistic回归分析血管瘤瘤体增生的影响因素。结果增生期组患儿血清bFGF、VEGF、HIF-1α、GM-CSF、STAT3表达水平高于血管畸形组及退化期组患儿(P<0.05),但血清Ang-1表达水平低于血管畸形组及退化期组患儿(P<0.05);Pearson法相关性分析显示,增生期组患儿血清GM-CSF及STAT3水平均与bFGF、VEGF、HIF-1α水平正相关,与Ang-1水平负相关;ROC曲线下面积显示,GM-CSF和STAT3单独预测血管瘤瘤体增生风险的AUC分别为0.847,0.822,联合预测的AUC为0.918,联合预测的效能显著大于GM-CSF单独诊断的AUC(Z=2.459,P=0.014),STAT3单独诊断的AUC(Z=3.371,P=0.001)。多因素Logistic回归分析显示GM-CSF、STAT3是血管瘤瘤体增生的影响因素(P<0.05)。结论血管瘤瘤体增生患儿血清GM-CSF及STAT3表达水平升高,是瘤体增生的影响因素,联合检测能较好的预测血管瘤瘤体增生风险。 展开更多
关键词 血管瘤 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 转录激活因子3 瘤体增生 相关性
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链霉亲和素-人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白的制备与活性鉴定 被引量:1
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作者 孙晶莹 李研 +4 位作者 黄晓燕 靳占奎 徐翠香 常乐 王建华 《陕西医学杂志》 CAS 2023年第1期3-6,22,共5页
目的:制备链霉亲和素(SA)连接的人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)融合蛋白(SA-hGM-CSF),并对其生物学活性进行鉴定。方法:在NCBI数据库中查找SA和hGM-CSF序列,将序列合成后连接入Pet28表达载体中,构建SA-hGM-CSF-Pet28重组表达载... 目的:制备链霉亲和素(SA)连接的人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)融合蛋白(SA-hGM-CSF),并对其生物学活性进行鉴定。方法:在NCBI数据库中查找SA和hGM-CSF序列,将序列合成后连接入Pet28表达载体中,构建SA-hGM-CSF-Pet28重组表达载体,在BL21(DE3)表达感受态中利用IPTG诱导剂诱导表达,经His镍柱纯化,尿素梯度复性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法和蛋白质印迹法(WB)鉴定融合蛋白,通过TF-1细胞检测融合蛋白的生物学活性。结果:SA-hGM-CSF融合蛋白可在BL21(DE3)中高效诱导表达,经His镍柱纯化后该融合蛋白纯度较高。经尿素梯度复性后,细胞学实验验证该融合蛋白具有生物学活性。结论:成功表达具有生物活性的融合蛋白SA-hGM-CSF,该结果为SA-hGM-CSF表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗的研究提供了实验基础。 展开更多
关键词 人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 链霉亲和素 融合蛋白 蛋白纯化 表达载体构建 蛋白活性鉴定
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藻蓝蛋白对小鼠粒单系祖细胞生成的影响 被引量:18
5
作者 张成武 曾昭琪 +3 位作者 张媛贞 罗成基 郭朝华 施炎 《中国海洋药物》 CAS CSCD 1996年第4期25-28,共4页
藻蓝蛋白(C—phycocyanin,C—PC)是从钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)中分离、纯化所得。采用造血祖细胞体外培养技术,研究了C—PC对小鼠粒单系祖细胞生成的影响。实验结果表明,C—PC能够提高粒单系祖细胞(CFU—GM)的生成,亦能明显提... 藻蓝蛋白(C—phycocyanin,C—PC)是从钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)中分离、纯化所得。采用造血祖细胞体外培养技术,研究了C—PC对小鼠粒单系祖细胞生成的影响。实验结果表明,C—PC能够提高粒单系祖细胞(CFU—GM)的生成,亦能明显提高正常小鼠血清的集落刺激活性。C—PC体内或体外刺激制备的小鼠脾细胞条件培养液能明显增加CFU—GM的集落数。在有集落刺激因子(GM—CSF)存在时,体外加入C—PC培养粒单系祖细胞,C—PC能明显提高CFU—GM的集落生成率。 展开更多
关键词 钝顶螺旋藻 藻蓝蛋白 粒单系祖细胞 海洋药
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地黄低聚糖对快速老化模型小鼠造血功能的影响 被引量:22
6
作者 刘福君 赵修南 +3 位作者 汤建芳 茹祥斌 张永祥 顾国明 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期509-512,共4页
目的:研究地黄低聚糖(RGOS)对快速老化模型小鼠(SAMP8)造血功能的影响。方法:采用造血祖细胞体外克隆培养等实验血液学方法。结果:RGOS10,20mg·kg-1可使SAMP8小鼠的CFU-S、CFU-GM... 目的:研究地黄低聚糖(RGOS)对快速老化模型小鼠(SAMP8)造血功能的影响。方法:采用造血祖细胞体外克隆培养等实验血液学方法。结果:RGOS10,20mg·kg-1可使SAMP8小鼠的CFU-S、CFU-GM、CFU-E和BFU-E明显增多,并可使外周血中降低的WBC数明显增加。提示RGOS可刺激SAMP8小鼠造血干细胞、祖细胞的增殖分化。集落刺激活性实验显示RGOS可使小鼠体内的集落刺激因子产生明显增多。小鼠骨髓组织学研究结果也进一步证实了RGOS增强SAMP8小鼠造血功能的作用。结论:RGOS可以增强SAMP8小鼠的造血功能。 展开更多
关键词 地黄低聚糖 老化 造血干细胞 造血祖细胞 药理
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黄芪注射液对贫血小鼠巨核系造血的作用及其机理的研究 被引量:11
7
作者 祝晓玲 祝彼得 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期590-592,共3页
目的 研究黄芪注射液 (AMI)对贫血小鼠巨核系造血的影响及其作用机制。方法 制备贫血小鼠模型 ,随机分为给药组和对照组 ,分别腹腔注射 AMI〔2 0 m g/ (ml· 2 0 g)〕或等量生理盐水 q.d× 6 ,于给药后第8、11、14天常规方法... 目的 研究黄芪注射液 (AMI)对贫血小鼠巨核系造血的影响及其作用机制。方法 制备贫血小鼠模型 ,随机分为给药组和对照组 ,分别腹腔注射 AMI〔2 0 m g/ (ml· 2 0 g)〕或等量生理盐水 q.d× 6 ,于给药后第8、11、14天常规方法检测外周血血小板数、骨髓有核细胞数 ,同时用体外巨核系祖细胞 (CFU- Meg)培养方法检测CFU- Meg,采集血清作巨核细胞系集落刺激活性 (Meg- CSA)测定。结果 贫血小鼠给药组和对照组比较 ,血清Meg- CSA明显升高 ,给药后第 11天所测各项指标均恢复正常 ,恢复时间明显缩短。结论  AMI能够升高血清Meg- CSA。 展开更多
关键词 黄芪注射液 巨核细胞 造血 血清 贫血
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烟曲霉菌提取物对人支气管上皮细胞粒-巨噬细胞集落刺激因子表达的影响 被引量:6
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作者 龙飞 高福生 +2 位作者 丁星 祁卉卉 金先桥 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期917-920,共4页
目的:探讨烟曲霉菌对呼吸道上皮细胞的粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达的影响及其可能机制。方法:分别应用不同浓度(0、8、16、20 mg/L)的烟曲霉菌提取物(Aspergillus fumigatus extract,AFE)作用体外培养人支气管上皮细胞16HBE-14... 目的:探讨烟曲霉菌对呼吸道上皮细胞的粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达的影响及其可能机制。方法:分别应用不同浓度(0、8、16、20 mg/L)的烟曲霉菌提取物(Aspergillus fumigatus extract,AFE)作用体外培养人支气管上皮细胞16HBE-14o不同的时间(12、24、48、72 h)。同时还应用热处理的AFE(heat-treated AFE,HT-AFE)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(抑肽酶)、蛋白激酶激活受体-2(PAR-2)激动剂(SLIGLV-NH2)和PAR-2阻断剂(FSLLRY-NH2)作用16HBE-14o细胞。应用ELISA法检测细胞上清液GM-CSF含量,同时应用RT-PCR法检测GM-CSF mRNA的表达。结果:正常培养条件下的对照组细胞仅表达分泌少量GM-CSF,而给予不同浓度的AFE作用后,细胞合成和分泌GM-CSF的量较对照组明显增加(P<0.05),并呈明显的时间和浓度依赖性。PAR-2激动剂同样可以促进细胞合成分泌GM-CSF。丝氨酸蛋白酶抑制剂和PAR-2阻断剂几乎完全抑制AFE的上述作用。HT-AFE的蛋白酶活性完全灭活,不能促进细胞GM-CSF表达增加。结论:AFE依赖其蛋白酶活性激活PAR-2受体,促进呼吸道上皮细胞GM-CSF合成和分泌,从而促进哮喘的发生和发展。 展开更多
关键词 烟曲霉菌 支气管上皮细胞 粒-巨噬细胞集落刺激因子 蛋白酶激活受体-2
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抗风湿颗粒对胶原诱导关节炎大鼠骨保护素、核因子-κB受体激活因子配体和巨噬细胞集落刺激因子表达的影响 被引量:6
9
作者 刘亦恒 张海英 +2 位作者 臧洪敏 陈君长 李彦民 《中西医结合学报》 CAS 2006年第3期307-310,共4页
目的:观察抗风湿颗粒(Kangfengshi Granules,KFSG)对胶原诱导关节炎大鼠骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子-κB受体激活因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macropha... 目的:观察抗风湿颗粒(Kangfengshi Granules,KFSG)对胶原诱导关节炎大鼠骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子-κB受体激活因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)mRNA表达的影响,探讨KFSG治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、环孢菌素A(cyclosporine A,CsA)治疗组和KFSG治疗组。除正常对照组外,其余各组大鼠予以皮下注射Ⅱ型胶原诱导关节炎模型。治疗4周后,采用实时定量PCR技术检测各组大鼠骨组织中OPG、RANKL和M-CSF mRNA的表达水平。结果:造模大鼠90%出现关节炎症状。治疗4周后,模型组、CsA治疗组和KFSG治疗组与正常对照组比较,RANKL mRNA和M-CSF mRNA的表达增高,OPGmRNA的表达降低,RANKL mRNA/OPG mRNA比值亦增高,差异均有统计学意义。KFSG治疗组与模型组比较,OPG mRNA的表达水平上调,M-CSF mRNA的表达水平下调,RANKL mRNA/OPG mRNA比值下降,差异均有统计学意义。结论:KFSG治疗RA骨质破坏的分子机制可能与其上调OPG mRNA的表达、下调M-CSF mRNA的表达及降低RANKL mRNA/OPG mRNA比值有关。 展开更多
关键词 抗风湿颗粒 关节炎 骨保护素 核因子-κB受体激活因子配体 巨噬细胞集落刺激因子
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融合基因GM-CSF/IL-2转基因瘤苗在肝癌特异性免疫治疗中的应用 被引量:5
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作者 郭成 刘青光 +1 位作者 杨威 姚英民 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期188-192,共5页
目的制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒-单核细胞集落刺激因子(mGM-CSF)融合基因修饰的H22肝癌全细胞瘤苗,探索融合基因GM-CSF/IL-2转基因瘤苗,在肝癌主动免疫治疗中特异性抗肿瘤作用。方法用含hIL-2与mGM-CSF融合基因的真核表达载体在体... 目的制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒-单核细胞集落刺激因子(mGM-CSF)融合基因修饰的H22肝癌全细胞瘤苗,探索融合基因GM-CSF/IL-2转基因瘤苗,在肝癌主动免疫治疗中特异性抗肿瘤作用。方法用含hIL-2与mGM-CSF融合基因的真核表达载体在体外转染H22肝癌细胞,制成疫苗,皮下接种Balb/c小鼠,同时建立Balb/c小鼠荷瘤模型,ELISA法检测H22/pcDNA3.1(+)-GM-CSF/IL-2瘤苗免疫组小鼠与各对照组小鼠(分别接种H22/pcDNA3.1(+)瘤苗、H22瘤苗、PBS)血清中IL-10、IFN-γ水平,观察小鼠存活期;同时用51Cr释放法测定H22/pcDNA3.1(+)-GM-CSF/IL-2瘤苗免疫组小鼠与各对照组小鼠(单纯荷瘤组、正常组)脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤活性。结果成功制备了含有hIL-2与mGM-CSF融合基因的H22肝癌瘤苗,转基因瘤苗免疫组小鼠的脾细胞在体外对亲本H22肝癌细胞的杀伤率为38.3%,显著高于对照组小鼠的脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤率(分别为13.6%和7.5%),也高于其对S180细胞的杀伤率(9.1%)(P<0.05)。转基因瘤苗免疫组小鼠血清IFN-γ较对照组明显升高(P<0.01),血清IL-10较对照组明显降低(P<0.01)。同时,转基因瘤苗免疫组小鼠生存期亦有明显延长。结论转染hIL-2与mGM-CSF融合基因的同系肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应,延长荷瘤小鼠生存期。 展开更多
关键词 主动特异性免疫治疗 白细胞介素2 单核细胞集落刺激因子 瘤苗 肝肿瘤
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粒细胞集落刺激因子改善阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆功能及抗炎作用机制 被引量:7
11
作者 苏翔 张臻 +4 位作者 杨霖璟 裘益辉 宋成龙 陈娟燕 宋水江 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期29-34,共6页
目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知障碍的改善作用及其对脑内炎症反应的影响。方法 45只雄性SD大鼠,随机分为3组,包括假手术组、模型组、G-CSF组,每组15只。采用β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)复制AD大鼠模型,... 目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知障碍的改善作用及其对脑内炎症反应的影响。方法 45只雄性SD大鼠,随机分为3组,包括假手术组、模型组、G-CSF组,每组15只。采用β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)复制AD大鼠模型,并给予G-CSF治疗。观察并比较大鼠的学习记忆功能及脑组织病理学变化。采用Western blotting检测核因子κB p65(NF-κB p65)、磷酸化p-38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧化酶-2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白的表达,采用Real-time PCR检测i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1βmRNA水平。结果模型组大鼠神经细胞数量明显减少,细胞核固缩明显,核仁不清。G-CSF组大鼠脑组织神经细胞核固缩现象均有显著改善。假手术组、模型组、G-CSF组逃避潜伏期分别为(35.68±6.73) s、(57.92±7.35) s及(40.27±8.91) s;目标象限游泳时间分别为54.72%±4.22%、36.73%±3.21%及44.68%±4.01%;穿过平台次数分别为(8.7±2.1)次、(3.9±1.6)次及(6.5±1.7)次;与模型组相比,假手术组、G-CSF组的逃避潜伏期均显著缩短,目标象限游泳时间显著增加,穿过平台次数显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。假手术组、模型组、G-CSF组NF-κB p65蛋白表达水平为0.144±0.033、0.502±0.035及0.473±0.061; pp38 MAPK蛋白水平为0.194±0.021、0.511±0.039及0.266±0.048,与模型组相比,假手术组、G-CSF组NF-κB p65、pp38MAPK蛋白水平均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,假手术组、G-CSF组i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β的蛋白和mRNA水平显著降低(P<0.05)。结论 G-CSF具有良好的抑制AD模型大鼠脑神经细胞凋亡,改善大鼠学习记忆功能障碍的作用,其作用可能通过抑制p38MAPK和NF-κB p65的信号通路的过度激活,下调i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β等炎性因子的表达,抑制脑内神经炎症状态而实现。 展开更多
关键词 粒细胞集落刺激因子 阿尔茨海默病 核因子κB P65 p-38丝裂原活化蛋白激酶 免疫印迹法 大鼠
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阿伦膦酸盐在不同分化阶段对破骨细胞生成及骨吸收功能的影响 被引量:3
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作者 董伟 戚孟春 +2 位作者 刘强 于静 邓久鹏 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期195-198,共4页
目的:研究阿伦膦酸盐作用在不同分化阶段对破骨细胞生成及骨吸收功能的影响。方法:体外分离骨髓单核细胞,用30μg/L M-CSF对其预诱导3d,然后将细胞分为A、B、C、D四组。A组(对照组),用50μg/L M-CSF+100μg/L RANKL进行破骨细胞诱导;B、... 目的:研究阿伦膦酸盐作用在不同分化阶段对破骨细胞生成及骨吸收功能的影响。方法:体外分离骨髓单核细胞,用30μg/L M-CSF对其预诱导3d,然后将细胞分为A、B、C、D四组。A组(对照组),用50μg/L M-CSF+100μg/L RANKL进行破骨细胞诱导;B、C、D组除加入上述诱导因子外,在不同时间点加入0.1μmol/L阿伦膦酸盐(ALN),加入时间分别为:B组第0~2天加入,C组第3~4天加入,D组第5~6天加入。检测每组细胞正式诱导第6天TRAP染色情况及牙本质磨片吸收陷窝情况。结果:各组细胞均有TRAP阳性多核破骨细胞生成,并在牙本质磨片上形成吸收陷窝;但A组TRAP阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及陷窝面积最高,D组次之,B组最差。结论:阿伦膦酸盐在破骨细胞分化阶段作用越早,对破骨细胞生成的抑制效应越大,所形成破骨细胞骨吸收能力越差。 展开更多
关键词 破骨细胞 巨噬细胞集落刺激因子 阿伦膦酸盐 核因子κB受体激活因子配体 抗酒石酸酸性磷酸酶
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Raw264.7细胞向破骨细胞分化诱导培养体系的改良 被引量:2
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作者 李新 张舒岩 +5 位作者 杨立彬 李冉 蒋然然 陈治光 李树蕾 李树红 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1114-1118,I0006,共6页
目的:通过改良细胞培养方案建立体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟破骨细胞(OC)的高效培养体系。方法:向Raw264.7细胞培养液α-MEM中添加50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3,于5%CO... 目的:通过改良细胞培养方案建立体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟破骨细胞(OC)的高效培养体系。方法:向Raw264.7细胞培养液α-MEM中添加50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3,于5%CO2、37℃孵箱中培养12d,每3d换液1次,每次换液前对细胞进行短暂消化。倒置显微镜下观察细胞形态变化,并利用HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、FITCphalloidin染色和免疫荧光染色鉴定OC是否成熟并具有吞噬功能。结果:通过改良培养方法,在诱导过程中培养孔内的大部分区域始终保持单层细胞的生长状态。镜下观察和HE染色,诱导第12天时OC胞体覆盖培养面积的70%;FITC-phalloidin染色,伴随着OC成熟,伪足内出现的束状伪足小体逐渐变为环形,最终融合带状肌动蛋白环环绕在胞质周围;免疫荧光染色,诱导12d后OC表达的降钙素受体(CTR)较前体细胞显著增加,TRAP染色显示OC胞浆内呈现大量红色颗粒。提示获得的OC成熟并具有吞噬功能。结论:本实验通过改良培养方法,联合应用细胞因子50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3建立了体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟OC的高效培养体系。 展开更多
关键词 Raw 264.7细胞 破骨细胞 巨噬细胞集落刺激因子 核因子ΚB受体活化因子配体 1.25二羟基 维生素D3
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鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的克隆与真核表达 被引量:2
14
作者 谭兵 王红宁 +1 位作者 张毅 樊汶樵 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期516-522,共7页
为了研究鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的生物学功能,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从刀豆蛋白(ConA)刺激的四川山地乌骨鸡外周血淋巴细胞中扩增出GM-CSF基因,进一步通过PCR等方法将该基因亚克隆入真核表达载体pCI-n... 为了研究鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的生物学功能,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从刀豆蛋白(ConA)刺激的四川山地乌骨鸡外周血淋巴细胞中扩增出GM-CSF基因,进一步通过PCR等方法将该基因亚克隆入真核表达载体pCI-neo,构建出重组表达质粒pCI-GM-CSF,将pCI-GM-CSF转染COS-7细胞,提取表达产物进行活性检测.序列测定表明,四川山地乌骨鸡GM-CSF全基因长为435 bp,编码144个氨基酸,与GenBank上公布的瓦赫宁鸡GM-CSF基因(AJ621740)氨基酸序列同源性达95.1%,与其他哺乳动物GM-CSF基因的氨基酸序列同源性低于30%.骨髓细胞增殖实验证实四川山地乌骨鸡GM-CSF能明显促进鸡骨髓细胞的增殖.以上结果表明,本实验成功克隆了四川山地乌骨鸡GM-CSF基因,证实四川山地乌骨鸡GM-CSF重组蛋白具有明显的生物学活性. 展开更多
关键词 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 四川山地乌骨鸡 真核表达 生物学活性
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不同浓度破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子体外诱导大鼠破骨样细胞形成的研究 被引量:6
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作者 王晓庚 刘文佳 +1 位作者 周洪 李昂 《口腔医学》 CAS 2008年第4期169-172,共4页
目的探讨破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子在大鼠破骨样细胞形成、分化中的作用,为进一步研究正畸牙齿移动的生物力学机制奠定基础。方法应用不同浓度的破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子对提取的SD大鼠骨髓单个核细胞进... 目的探讨破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子在大鼠破骨样细胞形成、分化中的作用,为进一步研究正畸牙齿移动的生物力学机制奠定基础。方法应用不同浓度的破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子对提取的SD大鼠骨髓单个核细胞进行诱导培养,分别于培养1、3、5、7 d利用TRAP染色、骨吸收陷窝检测等对单核及多核破骨样细胞的生成进行鉴定,对TRAP(+)的细胞进行计数和统计学分析。结果巨噬细胞集落刺激因子和破骨细胞分化因子对TRAP(+)的单核及多核破骨样细胞的诱导分化作用与时间有关:第3 d时逐渐增多,以第5 d和第7 d为最多;缺乏巨噬细胞集落刺激因子时,骨髓单个核细胞不能有效地分化为TRAP(+)的细胞;在破骨细胞分化因子浓度一定的条件下(50 ng/ml),TRAP(+)的细胞数与巨噬细胞集落刺激因子的浓度有关,当其浓度超过30 ng/ml时,TRAP(+)细胞数不再显著增加,曲线趋于平缓;当巨噬细胞集落刺激因子浓度一定的条件(50 ng/ml)下,TRAP(+)的细胞数与破骨细胞分化因子的浓度无关。结论以巨噬细胞集落刺激因子和破骨细胞分化因子作为诱导因子,对大鼠骨髓单个核细胞进行诱导培养,可获得TRAP(+)吸收陷窝(+)的破骨样细胞,且巨噬细胞集落刺激因子30 ng/ml、破骨细胞分化因子50 ng/ml时具有最强的生物学效应。 展开更多
关键词 破骨样细胞 体外培养 破骨细胞分化因子 巨噬细胞集落刺激因子
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核因子κB受体活化因子配体联合巨噬细胞集落刺激因子诱导破骨细胞分化过程中的蛋白—蛋白相互作用网络的研究 被引量:4
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作者 周平秀 胡济安 孟祥勇 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期518-521,共4页
目的系统地认识核因子κB受体活化因子配体(RANKL)联合巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导破骨细胞分化成熟过程中的分子机制。方法利用小鼠蛋白—蛋白相互作用数据库NIA和公共基因芯片数据GES16749,构建并分析了RANKL联合M-CSF诱导小鼠... 目的系统地认识核因子κB受体活化因子配体(RANKL)联合巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导破骨细胞分化成熟过程中的分子机制。方法利用小鼠蛋白—蛋白相互作用数据库NIA和公共基因芯片数据GES16749,构建并分析了RANKL联合M-CSF诱导小鼠单核细胞系RAW264.7分化成熟过程的蛋白—蛋白相互作用网络。结果在蛋白—蛋白相互作用网络中,转化生长因子β受体Ⅰ(TGFBR1)、劳氏肉瘤原癌基因(SRC)、髓细胞增生原癌基因(MYC)和整合素β3(ITGB3)能够和多种蛋白质分子发生相互作用,是信号在网络中传导的重要承载分子。结论TGFBR1、SRC、MYC和ITGB3可能是RANKL联合M-CSF诱导破骨细胞发育过程中的关键分子。 展开更多
关键词 正畸牙移动 破骨细胞 核因子-ΚB受体活化因子配体 巨噬细胞集落刺激因子 蛋白-蛋白相互 作用网络
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破骨细胞分化机制的研究进展 被引量:6
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作者 任莉荣 徐永清 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1522-1525,1528,共5页
破骨细胞为人体主要的骨吸收细胞,对骨骼的发育及维持具有重要作用,同时破骨细胞的异常活化对多种溶骨性疾病的发展具有重要作用;明确破骨细胞的分化机制,可为多种骨代谢性疾病提供新的治疗策略及药物靶点。大量的实验对破骨细胞的分化... 破骨细胞为人体主要的骨吸收细胞,对骨骼的发育及维持具有重要作用,同时破骨细胞的异常活化对多种溶骨性疾病的发展具有重要作用;明确破骨细胞的分化机制,可为多种骨代谢性疾病提供新的治疗策略及药物靶点。大量的实验对破骨细胞的分化机制进行了研究,并确认有一些基因为破骨细胞分化形成所必需,这些基因的缺失或突变将导致破骨细胞形成障碍,进而引起骨质硬化;并且由巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)、核因子κB受体活化因子配体(receptor Activator for Nuclear Factor-κB Ligand,RANKL)及免疫受体酪氨酸激活基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif,ITAM)介导的3条重要的信号通路参与其分化过程,3条信号通路相互作用,共同促进破骨细胞的分化形成,但RANKL如何激活ITAM信号通路,有待进一步研究,本文就破骨细胞分化机制的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 破骨细胞 骨吸收 巨噬细胞集落刺激因子 核因子ΚB受体活化因子配体
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细菌脂多糖对破骨细胞发育的抑制作用研究 被引量:3
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作者 赵为公 王莹 +2 位作者 邱希江 白斌 邱裕生 《中日友好医院学报》 2013年第1期30-33,F0002,共5页
目的:寻找调节破骨细胞分化成熟的途径。方法:采用细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)体外诱导骨髓单核细胞分化为成熟破骨细胞的培养方法,在培养体系中加入不同浓度细菌脂多糖(LPS),用抗酒石酸酸性... 目的:寻找调节破骨细胞分化成熟的途径。方法:采用细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)体外诱导骨髓单核细胞分化为成熟破骨细胞的培养方法,在培养体系中加入不同浓度细菌脂多糖(LPS),用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察成熟破骨细胞形成情况;实时定量RT-PCR检测LPS处理后破骨细胞前体表达核因子-κB受体活化因子(RANK)和M-CSF受体mRNA。结果:LPS不能刺激骨髓单核细胞形成TRAP阳性的破骨细胞;减少了RANKL诱导的TRAP阳性破骨细胞形成数量;0.2ng/ml和20ng/ml LPS降低了30%和90%RANKL诱导TRAP阳性细胞形成数量(与未加LPS组比较,均P<0.01);降低破骨细胞前体表达RANK和M-CSFR mRNA。结论:LPS能够抑制RANKL诱导的破骨细胞分化成熟,抑制破骨细胞前体表达RANK和M-CSFR,能够阻断其向成熟分化。 展开更多
关键词 破骨细胞 细菌脂多糖 核因子-κB受体活化因子 巨噬细胞集落刺激因子受体
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肿瘤坏死因子α对类风湿关节炎患者外周血单核细胞向破骨细胞分化的影响 被引量:2
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作者 商玮 徐子涵 +3 位作者 刘春丽 李婧 郭郡浩 蔡辉 《广西医学》 CAS 2018年第16期1782-1785,共4页
目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对类风湿关节炎(RA)患者外周血单核细胞向破骨细胞分化的影响。方法采集RA患者外周血,密度梯度离心后经贴壁法纯化后获得单核细胞,分为A组、B组、C组、D组、E组、F组,分别加入核因子κB受体活化因子配体(... 目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对类风湿关节炎(RA)患者外周血单核细胞向破骨细胞分化的影响。方法采集RA患者外周血,密度梯度离心后经贴壁法纯化后获得单核细胞,分为A组、B组、C组、D组、E组、F组,分别加入核因子κB受体活化因子配体(RANKL)0 ng/ml+TNF-α0 ng/ml、RANKL 100 ng/ml+TNF-α0 ng/ml、RANKL 0 ng/ml+TNF-α5 ng/ml、RANKL 100 ng/ml+TNF-α2.5 ng/ml、RANKL 100 ng/ml+TNF-α5 ng/ml、RANKL 100 ng/ml+TNF-α10 ng/ml进行诱导培养。细胞培养14天后通过细胞形态学特征及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定所得细胞,并对TRAP染色阳性细胞进行计数。免疫印迹法检测TRAP染色阳性的各组细胞核因子κB受体活化因子(RANK)、活化T细胞核因子c1(NFATc1)蛋白的表达。结果 TRAP染色显示,A组、C组获得的细胞不具有典型破骨细胞特征,B组、D组、E组和F组的细胞符合破骨细胞TRAP染色特征。D组、E组和F组TRAP阳性细胞计数、RANK及NFATc1蛋白表达均高于B组(均P<0.05)。结论在缺乏RANKL的条件下,TNF-α不能独立诱导RA患者外周血单核细胞分化为破骨细胞,但存在RANKL时TNF-α能增加RANKL诱导生成的破骨细胞数量,这可能与其上调RANK、NFATc1蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 破骨细胞 肿瘤坏死因子Α 核因子κB活化因子 单核细胞 巨噬细胞集落刺激因子
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多功能蛋白增活器的研制及性能研究 被引量:4
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作者 刘彤 耿信笃 《西北大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期123-126,共4页
自制了一种新型的多功能蛋白增活器,它具有同时除变性剂、分离杂蛋白、复性目标蛋白及便于回收变性剂的功能。考查了其对蛋白的分离、复性性能。发现这种多功能蛋白增活器可对6种标准蛋白进行良好地分离。同时对盐酸胍变性的溶菌酶和... 自制了一种新型的多功能蛋白增活器,它具有同时除变性剂、分离杂蛋白、复性目标蛋白及便于回收变性剂的功能。考查了其对蛋白的分离、复性性能。发现这种多功能蛋白增活器可对6种标准蛋白进行良好地分离。同时对盐酸胍变性的溶菌酶和核糖核酸酶完全复性。通过测定压力-流速曲线,发现多功能蛋白增活器的压力均远远低于普通色谱柱。将其应用于基因工程发酵的粒细胞集落因子(G-CSF)的分离纯化,可使纯度接近于100%。 展开更多
关键词 蛋白增活器 基因工程 粒细胞集落因子 发酵
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