竞争ELISA和间接ELISA方法应用于牛布鲁氏菌病净化的研究

旨在评价竞争ELISA方法和间接ELISA方法联合使用在布鲁氏菌病(以下简称“布病”)净化中的效果,为布病防控提供技术支撑。采用本实验室开发的动物布鲁氏菌病竞争ELSIA(cELISA)抗体检测试剂盒、牛布鲁氏菌病间接ELISA(iELISA)抗体检测试剂盒及微量法补体结合试验(mCFT),对西北某牛场3 271份牛血清进行检测。本研究采用cELISA初筛、iELISA确诊的净化策略,对检测阳性牛进行淘汰,可疑牛和阴性牛在完全消毒后隔离饲养,并在前一次检测后每隔1个月重新对群体采样,进行多次连续的“检—淘”策略,在群体的个体阳性率低于2%或全部转阴后使用微量补体结合试验(mCFT)进行验证。并在群体全部转阴后继续检测2个月后确定净化结果。结果显示,首次检测阳性率35.36%的感染群体实施本净化策略后,在第1个月阳性率下降至25.41%,第2个月下降至7.16%,第3个月下降为1.86%,到第4个月则实现了布病阳性群体的全面转阴,mCFT验证个体阴性率100%。此后持续检测2个月,个体阳性率均为0,至此实现了感染群体的布病净化,使得群体内近一半的牛免于扑杀,大大减少了经济损失。综上发现,将cELISA用于布病初筛,iELISA用于布病确诊的联合使用,经多次连续检测并结合常规的隔离消毒措施,可以在短时间内实现对于布病感染群体的全面净化。

大理州牛羊布鲁氏菌病血清学流行病学调查分析

目的检测大理州牛羊布鲁氏菌抗体,了解和掌握云南大理地区的家畜布鲁氏菌病流行现状。方法采用动物布鲁氏菌竞争ELISA(cELISA)抗体检测方法、牛布鲁氏菌间接ELISA(iELISA)抗体检测方法、羊布鲁氏菌间接ELISA(iELISA)抗体检测方法、布鲁氏菌荧光偏振(FPA)方法等4种不同方法,分别对大理州12县(市)2022年的18640份家畜血清进行检测,其中牛血清样品7813份、羊血清样品10827份。最后采用微量法补体结合试验(mCFT)对cELISA、iELISA和FPA检测阳性的样品进行确诊。结果大理州羊血清mCFT确诊阳性189份,阳性率为1.75%(189/10827),其中大理市1.90%(2/105)、宾川县4.23%(34/803)、祥云县2.53%(19/752)、巍山县1.58%(12/760)、洱源县2.52%(22/873)、剑川县2.00%(91/4554)、云龙县1.54%(9/585),牛血清布病抗体阳性率均为0。cELISA、iELISA和FPA 3种方法检测出的阳性样品采用mCFT进行确诊时,mCFT确诊的阳性样品与这3种方法检测阳性样品之间的符合率分别为75.00%,100.00%和98.81%,其中iELISA与mCFT符合率最高。结论大理州牛群未检测到布病抗体阳性,感染风险低;羊群布鲁氏菌感染率高,12个县(市)中有7个县(市)检出羊布病阳性样品,绘制的大理州羊布病流行情况分布图为今后有效防控和净化畜间布病提供基础数据和技术支撑。

保健食品非法添加化学药品的特点与监管建议

目的为保健食品非法添加化学品的监管提供思路和对策。方法总结近年来保健食品中添加的化学药品和类别,以及非法添加化学药品的保健食品中出现的新添加物、添加多种物质、地域特点、非正式销售样品等4个特点。提出加强对薄弱环节、广告的监管,建立参考图谱等3点建议。结果与结论提出的建议和对策可以降低执法与检验成本,提高检出率和靶向性,对行政监管起到强有力的技术支撑作用。

人Elongator复合物Elp4亚基基因可部分补偿酵母ELP4缺失菌株的生长缺陷

为研究人Elongator复合物Elp4亚基的功能 ,将人ELP4基因转入酵母ELP4基因缺失的突变菌株 (elp4△菌株 )中 ,并对转化菌株进行功能互补实验和SSA3和PHO5基因表达分析 ,结果表明人的ELP4基因不能恢复突变菌株对高盐的敏感性 ,但可以在一定程度上缓解突变菌株对高温、咖啡因 (Caffeine)和 6 氮尿嘧啶 (6 AU)的敏感性 ,部分恢复低磷条件下PHO5基因表达延迟的缺陷 ,并可在热激条件下提高SSA3基因的表达 ,因此人的ELP4基因可以部分补偿酵母ELP4基因缺失所引起的生长缺陷 ,提示人的Elp4亚基可能与酵母的该亚基功能相似。

黑腹果蝇黑条体突变型的基因定位研究

黑腹果蝇的体色突变类型常见的有黄体（ｙｅｌｌｏｗ；ｙ）、黑体（ｂｌａｃｋ，ｂ）和黑檀体（ｅｂｏｎｙ，ｅ），分别位于Ｘ染色体，第二染色体和第三染色体上。黑条体突变型是本实验室１９９１年９月从野外采集的黑腹果蝇野生型单雌系后代中发现的自发突变品系，为了探明黑条体突变型是原有黑体突变类型的再现还是新的突变，采用常规杂交方法和互补实验技术对黑腹果蝇黑条体突变型的基因定位进行了探讨。互补测验的结果表明，黑条体与黑檀体杂交的子一代为反式排列的杂合体无互补，表现为突变型，子二代中，由于交换而产生重组类型的顺式排列的杂合体表现为野生型。因此确定黑条体突变基因（ｂｓｒ）与黑檀体突变基因（ｅ）是等位的，位于第三染色体的９３Ｄ２区，但分别位于不同的位点上，属于同一顺反子的新的点突变。同时对于各体色基因间的相互作用及遗传传递方式的进行了讨论。

牛布鲁菌病补体结合试验测量不确定度评估

本试验应用补体结合试验方法对牛布鲁菌病进行检测,分别从溶血素效价测定、补体效价测定、抗原效价测定及血清效价测定4个方面分析了补体结合试验测量不确定度来源,并计算了合成不确定度、扩展不确定度,最终样品测量结果报告值为:X=(1.06±0.043)mg/mL(95%置信区间),即本试验中判定的可以抑制50%溶血的血清最高效价所对应的溶血素浓度为1.06mg/mL,不确定度U为0.043。

人Elongator复合物Elp3亚基基因可显著补偿酵母elp3缺失菌株的生长缺陷

从HeLa细胞中分离的人的Elongator复合物在组成及与RNAPⅡ的作用方式上与酵母的E- longator复合物十分相似,但对其功能研究极少。为了研究人的Elongator复合物催化亚基Elp3的功能,将人elp3等基因转入酵母elp3基因缺失的突变菌株(elp3Δ菌株),并对转化菌株进行功能互补实验和ssa3和pho5基因表达分析,结果表明人elp3基因可显著恢复突变菌株对高温和Caffeine的敏感性,在低磷条件下显著补偿了突变株pho5基因表达延迟的缺陷,并可在热激条件下提高ssa3基因的表达。含酵母elp3非HAT区和人elp3 HAT区的融合yhelp3对上述缺陷有着更强的补偿能力。而HAT区催化结构域缺失的yhelp3HAT没有任何补偿能力,表明人Elp3亚基可能与酵母的该亚基功能相似,人Elp3的HAT活性也为其行使功能所必需。

棉花红腐病菌氮代谢途径相关酶的基因位点测定

通过对菌株同类型的nit突变体互补测定方法,对棉花红腐病菌(串珠镰孢霉)氮代谢途径相关因子的基因位点进行研究。根据对单孢菌株SC50的42个含钼协同因子缺陷型突变体(nitB)的互补测定,鉴定出至少有7个基因位点控制含钼协同因子;对硝酸盐还原酶缺陷型突变体(ni tA)间以及亚硝酸盐还原酶缺陷型突变体(nitC)间互补测定的结果表明,这两种酶均由多个基因位点控制,并有其它基因参与互作。

口蹄疫诊断技术研究进展

口蹄疫的有效控制关键在于早期检测 ,然而有很多疾病症状与口蹄疫相似 ,仅靠临床症状难以确诊 ,因此必须进行实验室诊断。实验室诊断包括病毒学诊断和血清学诊断。病毒学诊断方法有病毒分离、补体结合试验、酶联免疫吸附试验 ( EL ISA)、RT-PCR以及乳胶凝集试验 ( L AT)。 RT-PCR有待进一步完善 ,而用于野外检测的现场诊断方法已取得可喜进展。血清学诊断包括中和试验和 EL ISA,中和试验已经被 EL ISA方法取代 ,并且通过检测非结构蛋白的抗体可以区分感染动物和免疫动物。更加快速、敏感、可靠以及用于检测潜伏感染的诊断技术将是今后研究的热点。

pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒的构建及其在活细胞内的作用

目的:构建pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察趋化因子受体4(chemokine receptor 4、CXCR4和CD184)与CXCR4抑制性多肽的相互作用。方法:应用化学合成法获得巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ(viralmacrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)N端21肽(N-terminal 21-mer peptide,NT21MP)编码的基因序列,克隆至经Kpn I和EcoRⅠ酶切的pBiFC-VC155中,筛选含有目标基因的正确克隆。利用RT-PCR扩增人乳腺癌细胞株SKBR3的CXCR4全长基因后,T-A亚克隆至经Kpn I和EcoRⅠ酶切的pBiFC-VN173载体中。然后,经酶切鉴定及DNA测序分析2个基因是否正确连接至真核表达载体中。应用脂质体转染的方法共转染pBiFC-VC155-NT21MP和pBiFC-VC155-CXCR4至细胞株COS-7中,在荧光显微镜下观察NT21MP与CXCR4在胞内的相互作用。结果:经DNA测序及同源性对比,证实pBiFC-VC155-NT21MP和pBiFC-VN173-CXCR4重组载体构建成功;基因片段与NCBI基因库vMIP-Ⅱ和CXCR4基因CDS序列同源性达99.9%。BiFC法观察NT21MP与CXCR4在细胞内结合出现的荧光信号,该信号分布细胞内。结论:本实验成功构建了应用BiFC技术的真核表达载体,并且在活细胞内检测到NT21MP与CXCR4的互相结合。

粗糙脉孢霉瓜氨酸需求型突变株的分离

对粗糙脉孢霉双突变株arg4,arg13进行了紫外诱变,利用过滤富集法分离了不能利用鸟氨酸、能利用瓜氨酸的3个突变株.利用互补实验将分离的约60个突变株分成了4个互补群,这可能代表4个独立的基因位点.

人DNA修复基因hR24L参与细胞周期检定点调控

目的：研究酵母ＲＡＤ２４Ｌ基因功能，克隆人类同源物。方法：分离ＲＡＤ２４基因区域ｒａｄ２４Ｌ突变株，以人的ｃＤＮＡ表达文库转化突变株，筛选回复表型；大剂量Ｘ线照射观察细胞周期。结果：ｒａｄ２４Ｌ对紫外线敏感，从转化文库后的回复表型中克隆出人类ｈＲ２４Ｌ全长ｃＤＮＡ。结论：克隆的人类ＤＮＡ修复基因ｈＲ２４Ｌ，它能校正ｒａｄ２４Ｌ的突变表型，参与细胞周期检定点调控。

幽门螺杆菌的血清学诊断

目前幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的实验诊断技术已日益完善,临床上常用的诊断方法包括细菌形态观察,细菌尿素酶活性测定,血清抗 Hp 抗体测定、细胞 DNA 检测及粪便 Hp 抗原检测.毋庸置疑,经内镜取材的标本进行快速尿素酶试验及组织病理学检查是确诊 Hp 感染的常用方法.但侵入性诊断在某些情况下并不适用,因此血清学检测和尿素呼吸试验等无创性检测方法也具广泛用途,而血清学检测被视为流行病学调查的首选方法.

新疆边境地区马、驼锥虫病流行病学调查

为了解中哈边境地区马、骆驼感染伊氏锥虫病流行情况,本试验用哈萨克斯坦国立农业大学研发的伊氏锥虫病检测试剂盒(补体结合试验CF)与现场全血接种小白鼠试验相结合,对中哈边境地区伊犁州昭苏县、阿勒泰地区吉木乃县和塔城地区裕民县10个乡的马、骆驼采集血样(n=512),疑似病症的骆驼全血接种试验动物小白鼠。伊氏锥虫病检测试剂盒(补体结合试验CF)检测结果显示,马匹的阳性率3.96%(16/404),驼的阳性率4.62%(5/108)。接种小白鼠9 d后发病,尾尖采血镜检可看大量虫体;本试验为新疆与哈萨克斯坦边境地区伊氏锥虫病流行病学基础资料提供参考。

拟南芥液泡分拣蛋白AtVPS25调控植物生长素响应的功能分析

【目的】鉴定生长素胁迫条件下纯合突变体vps25的表型,获得拟南芥液泡分选蛋白AtVPS25的互作蛋白,并分析AtVPS25和其互作蛋白在生长素响应过程中的功能及其分子机制。【方法】根据"三引物法"鉴定突变体;通过观察拟南芥vps25突变体在外加生长素的培养基上的表型,鉴定AtVPS25的功能;以AtVPS25为诱饵蛋白,采用泛素分离系统筛选在拟南芥中与其互作的蛋白;利用酵母互作试验和双分子荧光互补试验(BiFC)验证AtVPS25与AtAIR12(for Auxin-Induced in Root cultures)的互作关系;鉴定AtVPS25和AtAIR12蛋白在植物细胞中的定位情况;采用Real-time PCR方法,分析在生长素处理条件下,部分生长素运输相关基因在拟南芥vps25突变体中的表达变化。【结果】Real-time PCR结果显示,10μmol·L-1 IAA处理条件下,在野生型拟南芥(WT)中,AtVPS25的表达量随着胁迫时间的增长而增高,并在12 h达到最高,约为0 h的40倍,证明AtVPS25受生长素处理的诱导表达。利用泛素分离系统筛库获得AtVPS25的互作蛋白AtAIR12、AtVPS25与AtAIR12全长蛋白序列的酵母双杂交试验证明AtVPS25与AtAIR12互作。亚细胞定位试验证明AtVPS25定位在细胞膜和细胞质中,AtAIR12定位在细胞膜及叶绿体膜上。BiFC(双分子荧光互补)试验结果显示,AtVPS25蛋白与AtAIR12蛋白互作,并且互作位点在细胞膜和细胞质中。突变体鉴定获得纯合突变体vps25。vps25在0.1 mg·L-1 IAA条件下生长,表现为主根伸长受到抑制,并且相对同一条件下的WT的主根长度差异极显著(P<0.01),而同时侧根数无明显差异,这与已报道的air12-1突变体在生长素处理条件下的表型相似。10μmol·L-1 IAA处理时,在WT背景条件下,AtAIR12的表达量对IAA响应明显,并且随着胁迫时间的增长而增高,在12 h时达到最高,约为0 h的80倍,证明10μmol·L-1 IAA处理条件下,WT中AtAIR12表达量的变化趋势与AtVPS25完全相同。同时在vps25突变体背景条件下,AtAIR12的表达相对于WT受到抑制,在0-24 h表达量无明显变化。此外,在vps25突变体背景条件下,生长素输出载体基因AtPIN2相对于WT中表达量降低,生长素输入载体基因AtLAX2相对于WT中表达量提高。【结论】拟南芥液泡分拣蛋白基因AtVPS25受IAA诱导表达,参与调控植物主根的发育,AtVPS25可以与生长素响应蛋白AtAIR12在细胞质和细胞膜上互作,AtVPS25调控部分生长素相关基因的表达,AtVPS25通过调控这些下游基因的表达影响生长素在根部的响应。AtVPS25与AtAIR12的调控机制需要进一步深入研究。

一种新型的定量测定特异性体液免疫功能的溶血空斑试验

根据补体经典途径激活时，可通过“旁立损伤”机制使邻近正常细胞溶解破坏的原理，该种溶血空斑试验不仅可以用来定量检测分泌ＩｇＭ的抗体形成细胞，也可直接用来定量检测分泌ＩｇＧ的抗体形成细胞。与传统溶血空斑试验相比，其最大的优点是可用来检测机体对任何一种可溶性抗原的特异性体液免疫应答能力，从而扩展了应用范围。

改良微量淋巴细胞毒实验在反复自然流产免疫病因方面的实验诊断研究

目的提高反复自然流产(RSA)免疫病因实验诊断水平。方法应用改良微量淋巴细胞毒实验(CDC)检测封闭抗体1591例。结果此实验中台盼蓝染色优于伊红Y,补体是关键成分;封闭抗体缺乏与原发RSA明显相关,与继发RSA有相关性。结论改良微量淋巴细胞毒实验是RSA实验诊断及免疫治疗效果监测重要手段,原发RSA中免疫病因占有重要位置,继发RSA中免疫因素较复杂。

动物布鲁菌病补体结合试验的影响因素及应注意的问题

补体结合试验是目前血清学试验中最为准确的实验技术之一,被世界动物卫生组织(OIE)认证为布鲁菌病诊断的确诊性试验。对动物布鲁菌病补体结合试验中影响因素及应该注意的问题进行了较全面的分析和总结,以供同行参考。

组织胞浆菌感染的血清学调查

对湖南省慈利县101名志愿者组织胞浆菌素皮肤试验(皮试)的阳性者6例和部分阴性者15例,以补体结合(CP)和双向免疫琼脂扩散(ID)试验测定其血清中组织胞浆菌特异性抗体。结果表明,CF与皮试相符而ID均为阴性;提示慈利县有组织胞浆菌感染人群存在。

血清免疫球蛋白及补体检测水平在肾病综合征诊断中的作用研究

目的分析肾病综合征诊断中血清免疫球蛋白、补体检测水平的应用价值。方法选取50例肾病综合征患者作为观察组,另选取50例健康体检者作为对照组。对比两组研究对象的血清免疫球蛋白指标[免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)]、补体指标(C_(3)、C_(4))检测结果。结果观察组IgM(2.96±1.07)g/L高于对照组的(1.48±0.51)g/L,IgA(1.74±0.49)g/L、IgG(4.91±1.19)g/L低于对照组的(2.46±0.72)、(12.76±2.85)g/L,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组C_(3)(0.94±0.17)g/L低于对照组的(1.33±0.31)g/L,差异具有统计学意义(P<0.05);两组C_(4)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论于肾病综合征诊断中应用血清免疫球蛋白、补体检测具有较高的诊断价值,在患者治疗期间具有一定参考意义,值得借鉴和推广。