乌司他丁通过上调Cx43表达减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞铁死亡的作用机制

目的探讨乌司他丁(UTI)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞铁死亡的影响,并分析其保护机制。方法体外培养大鼠H9c2心肌细胞,分为对照组、H/R组、铁死亡诱导剂(Erastin)组、UTI组、UTI+Erastin组、UTI+小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)组、UTI+连接蛋白43(Cx43)siRNA(si-Cx43)组,各组给予相应干预后,检测各组细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧、Fe^(2+)、丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及Cx43、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)mRNA和蛋白水平。结果与对照组比较,H/R组细胞活力、SOD、CAT活性和Cx43、GPX4、FTH1mRNA及蛋白水平显著降低,LDH活性、活性氧、丙二醛、Fe^(2+)和ACSL4mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01)。与H/R组比较,UTI组细胞活力[(71.40±8.05)%vs(42.63±6.71)%]、SOD、CAT活性和Cx43、GPX4、FTH1mRNA及蛋白水平显著升高,LDH活性、活性氧、丙二醛、Fe^(2+)和ACSL4mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05)。与UTI组比较,UTI+Erastin组和UTI+si-Cx43组细胞活力、SOD、CAT活性和Cx43、GPX4、FTH1mRNA及蛋白水平显著降低,LDH活性、活性氧、丙二醛、Fe^(2+)和ACSL4mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论UTI可能通过上调Cx43抑制H/R诱导的心肌细胞铁死亡。

血清Cx43、Gal-9水平对老年急性脑梗死患者超早期静脉溶栓治疗预后的评估价值

目的探讨血清间隙连接蛋白43(Cx43)、半乳糖凝集素-9(Gal-9)水平对老年急性脑梗死(ACI)患者超早期静脉溶栓治疗预后的评估价值。方法选取2020年9月至2022年9月在该院行超早期静脉溶栓治疗的106例老年ACI患者作为研究组,另外选取同期来该院体检的100例体检健康者作为健康组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测所有研究对象的血清Cx43、Gal-9水平。治疗2周后参考美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分将106例老年ACI患者分为预后良好组(81例)与预后不良组(25例)。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Cx43、Gal-9水平对老年ACI患者超早期静脉溶栓治疗预后的评估价值,采用多因素Logistic回归分析探讨老年ACI患者超早期静脉溶栓治疗预后不良的影响因素。结果研究组血清Cx43、Gal-9水平高于健康组(P<0.05);预后不良组血清Cx43、Gal-9水平高于预后良好组(P<0.05);血清Cx43、Gal-9预测老年ACI患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.721(95%CI:0.673~0.758)、0.837(95%CI:0.787~0.886),二者联合预测的AUC为0.901(95%CI:0.857~0.946)。预后不良组高血压占比高于预后良好组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,高血压(OR=3.487,95%CI:1.564~7.773),血清Cx43≥106.53 pg/mL(OR=4.586,95%CI:1.982~10.611),血清Gal-9≥11.84 ng/mL(OR=4.345,95%CI:1.957~9.648)是老年ACI患者超早期静脉溶栓治疗预后不良的危险因素(P<0.05)。结论血清Cx43、Gal-9在老年ACI患者中均呈高表达,可用于评估老年ACI患者超早期静脉溶栓治疗的预后,二者联合检测的评估价值更高。

外周血单个核细胞Cx37、AIM2、Cx43对冠心病的预测价值分析

目的探讨外周血单个核细胞缝隙连接蛋白37(Cx37)、黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)、缝隙连接蛋白43(Cx43)对冠心病的预测价值。方法选取2019年1月至2023年10月该院收治的460例因“疑似冠心病或者胸闷、胸痛待查”而入院拟择期行冠状动脉造影(CAG)的患者作为研究对象,根据CAG检查结果分为冠心病组(212例)和非冠心病(248例)。比较两组临床特征及外周血单个核细胞Cx37、AIM2、Cx43,并予以多因素Logistic回归分析冠心病发生的危险因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血单个核细胞Cx37、AIM2、Cx43对冠心病的预测价值。结果冠心病组年龄、体质量指数大于非冠心病组(P<0.05),心率、血清糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(FINS)水平高于非冠心病组(P<0.05),吸烟、高血压、高脂血症、冠心病家族史的患者占比高于非冠心病组(P<0.05),血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于非冠心病组(P<0.05)。冠心病组外周血单个核细胞Cx37、Cx43表达水平低于非冠心病组,外周血单个核细胞AIM2表达水平高于非冠心病组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,吸烟,高血压,高脂血症,冠心病家族史,外周血单个核细胞Cx37、Cx43表达水平降低,外周血单个核细胞AIM2表达水平升高是冠心病发生的独立危险因素(OR=2.568、2.375、3.313、2.713、0.647、0.464、2.995,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血单个核细胞Cx37、AIM2、Cx43及3项联合检测预测冠心病的曲线下面积(AUC)分别为0.712、0.732、0.708、0.922,灵敏度分别为66.51%、70.28%、71.70%、89.15%,特异度分别为69.76%、70.16%、69.35%、82.26%,其中联合检测的AUC最大(P<0.05)。结论外周血单个核细胞Cx37、AIM2、Cx43对冠心病发生具有一定的预测价值,其中联合检测的预测价值最高。

Cx43、β-catenin、Smo在第二生心区的表达规律及意义

背景:第二生心区对于胚胎心脏发育具有重要意义,其发育异常会导致多种心脏畸形,Cx43基因敲除后第二生心区细胞的形成和增殖减少,但具体原因尚未明确。目的:①明确β-catenin、Smo以及Cx43在内胚层与第二生心区的表达模式,观察其有无共表达;②探究Cx43与Wnt/β-catenin通路或Shh通路之间是否存在相互作用,共同参与第二生心区的发育。方法:选取胚龄10-12 d的ICR小鼠胚胎石蜡包埋连续切片,进行免疫组织化学染色、苏木精-伊红染色、免疫荧光染色;剥离胚龄11 d小鼠胚胎的原始消化管用于蛋白印迹实验和免疫共沉淀。结果与结论:①胚龄10-12 d,Cx43与Isl1在前肠腹侧和心包腔背侧壁的部分间充质细胞呈共表达,Isl1阳性细胞增多的同时Cx43阳性细胞也增多;②胚龄10-12 d,Cx43与β-catenin在内胚层腹侧共表达;③胚龄10-12 d,Cx43与Smo在内胚层上共表达;④免疫共沉淀结果表明Cx43与β-catenin之间存在相互作用,共同参与第二生心区的发育。

Cx43在基质刚度调控骨髓间充质干细胞分化中的作用机制研究

目的骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有力学敏感性,对周围力学微环境高度敏感。连接蛋白43(connexin 43,Cx43)作为骨组织细胞中组成半通道和间隙连接的主要蛋白,在力学信号传导中发挥重要作用。然而关于Cx43是否参与基质刚度对BMSCs分化的调节仍有待研究。方法本实验制备了模拟骨髓力学微环境不同位置处基质刚度(1、10、34 k Pa)的聚丙烯酰胺水凝胶培养基底;培养间充质干细胞细胞系C3H10T1/2,利用18α-GA抑制C3H10T1/2中Cx43功能;提取BMSCs条件性敲除(c KO)Cx43小鼠(Prx1-Cre;Cx43 flox/flox)和同窝对照flox小鼠(Cx43 flox/flox)原代BMSCs进一步验证。结果抑制Cx43均会导致BMSCs在10、34 k Pa基质刚度上的成脂能力显著下降,而对1 k Pa上BMSCs成脂能力无影响。相比于1 k Pa和34 k Pa,在10 k Pa基质刚度上抑制Cx43导致了BMSCs成骨能力显著下降。在不同基质刚度上抑制BMSCs上Cx43均会导致糖酵解和线粒体融合裂变相关基因表达显著变化,以及成脂和成骨分化过程中ATP的生成。结论BMSCs响应骨髓力学微环境,较软的基质刚度可能对成脂能力有一定程度的恢复作用,而Cx43可能通过代谢途径参与了基质刚度对BMSCs分化的调节。

RgpB通过抑制自噬小体与溶酶体融合避免Cx43降解参与食管癌化疗耐药

目的探讨牙龈卟啉单胞菌(Pg)的毒力因子RgpB在食管鳞癌化疗耐药中的作用机制。方法采用免疫沉淀-质谱联用技术筛选与Pg的毒力因子RgpB互作的自噬调节因子;运用免疫共沉淀实验探索RgpB和自噬调节因子TBC1D5之间的相互作用;采用蛋白免疫印迹法测定Pg感染对食管癌细胞膜受体分子Cx43表达的影响;使用细胞免疫荧光检测Lamp1、Cx43与TBC1D5的关系;利用自噬双荧光观察Pg感染对自噬小体与溶酶体融合的影响;使用平板克隆及CCK-8法检测Pg感染及Cx43抑制剂在使用化疗药后对食管癌细胞系增殖作用的影响。结果免疫沉淀-质谱联用技术筛选出与RgpB互作的自噬调节因子TBC1D5;免疫共沉淀结果显示,Pg分泌的毒力因子RgpB可与自噬调节因子TBC1D5直接结合并相互作用;蛋白免疫印迹法结果显示,感染Pg后食管癌细胞膜Cx43表达量高于未感染组(P<0.05);细胞免疫荧光结果显示,在感染Pg后,Cx43在细胞膜表面的表达量增加(P<0.05);stubRFP-sensGFP-LC3自噬双荧光结果显示,在Pg感染时,自噬体与溶酶体融合受到阻断;平板克隆及CCK-8法结果显示,使用化疗药后,Cx43抑制剂能够逆转Pg感染对食管癌细胞系的促进作用。结论Pg入侵食管癌,其毒力因子RgpB阻碍自噬小体与溶酶体融合,从而使膜受体分子Cx43免受溶酶体降解,导致食管癌化疗耐药。

Cx43对胆总管结扎大鼠心肌损伤的负向调控作用及其机制

目的探讨缝隙连接蛋白43(Cx43)在胆总管结扎(CBDL)引起的大鼠心肌损伤中的作用及其分子机制。方法将18只SD大鼠随机分为假手术组、CBDL组及Cx43抑制剂组,每组6只。假手术组大鼠行胆总管游离术,CBDL组大鼠游离、结扎并切断胆总管,Cx43抑制剂组大鼠术前24 h通过尾静脉单次注射25 mg/kg的Gap 26后,游离、结扎并切断胆总管。三组大鼠饲养至术后第14天时采用心脏超声检查评估心脏射血分数(EF)、缩短分数(FS)和心率(HR);随后测定三组大鼠血清总胆红素(TBil)、苯丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶-MB(CK-MB)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)水平;取三组大鼠心脏组织行HE染色和Masson染色;采用免疫印迹实验检测心脏组织中Cx43、Wnt 3α、β-catenin蛋白的水平。结果心脏超声检查结果显示,CBDL组、Cx43抑制剂组大鼠心脏EF、FS、HR均显著低于假手术组(F=22.95~43.55,t=5.10~9.32,P<0.05)。血生化及氧化应激指标检测结果显示,与假手术组相比,CBDL组、Cx43抑制剂组大鼠血清中TBil、AST、ALT、LDH、CK-MB、MDA、GSH-PX水平显著升高,SOD的水平显著降低(F=19.29~100.60,t=3.67~13.72,P<0.05)。HE染色及Masson染色结果显示,CBDL组和Cx43抑制剂组大鼠发生心肌损伤及心肌间质纤维化。免疫印迹实验结果显示,与假手术组相比,CBDL组和Cx43抑制剂组大鼠心脏组织中Cx43水平显著下降,Wnt 3α、β-catenin水平显著升高(F=28.50~70.07,t=4.32~11.79,P<0.05);与CBDL组相比,Cx43抑制剂组大鼠心脏组织中Cx43水平显著下降,Wnt 3α、β-catenin水平显著升高(t=4.95~5.20,P<0.05)。结论CBDL大鼠心脏组织中Cx43下调可负向调控激活Wnt 3α/β-catenin通路,导致大鼠心肌组织损伤加剧及心脏功能下降。

尼古丁上调Cx43促发PASMCs炎性反应致小鼠肺动脉重构的机制

目的研究缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)介导肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)炎性反应在尼古丁致小鼠肺动脉重构中的作用机制。方法5周龄雄性C57BL/6J小鼠、Tagln-Cre(+);Cx43^(flox/WT)小鼠各32只,分别随机分为对照组(灭菌注射水)、0.02、0.2和2.0 mg/(kg·d)尼古丁组,每组8只。小鼠按体重每天固定时间进行一次鼻腔滴注,持续8周。染毒结束后,通过HE染色观察各组小鼠肺动脉重构情况;采用磁性分离法培养C57BL/6J、Tagln-Cre(+);Cx43^(flox/WT)小鼠原代远端PASMCs;通过Western blot法检测小鼠PASMCs中Cx43、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)蛋白表达水平。结果与C57BL/6J小鼠对照组相比,尼古丁染毒组C57BL/6J小鼠体重总体呈现增长趋势,且随着尼古丁浓度增加,体重增长变缓。小鼠远端肺动脉出现管壁增厚、管腔狭窄等典型的动脉重构病理特征,Cx43表达上调且呈剂量依赖性关系。Tagln-Cre(+);Cx43^(flox/WT)小鼠HE染色结果显示其肺动脉管壁增厚和管腔狭窄现象有所缓解,且PASMCs中上述炎性反应因子表达减少。结论Cx43表达下调可缓解尼古丁诱导的小鼠远端PASMCs炎性反应,从而改善小鼠肺动脉重构。

牙周炎患者血清LTB4、Cx43水平及其临床意义

目的分析白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)、连接蛋白43(connexin43,Cx43)在牙周炎患者血清中的表达水平,并探究其临床意义。方法选择2020年1月至2022年1月我院口腔科收治的98例牙周炎患者为牙周炎组,根据其病情严重程度分为轻度组34例,中度组36例,重度组28例;同期牙周健康的口腔志愿者95例为对照组。采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中LTB4、Cx43的表达水平。采用Pearson相关性分析血清LTB4、Cx43表达水平相关性以及二者与牙周探诊深度(probing depth,PD)、附着丧失(attachment loss,AL)、菌斑指数(plaque index,PLI)的相关性;Logistic回归分析牙周炎发生的影响因素。ROC曲线分析血清LTB4、Cx43表达水平对牙周炎患者的预测价值。结果牙周炎组不正规刷牙方式、每日刷牙时间<3min、次数<2次、夜磨牙的人数显著多于对照组,PD、AL、PLI的水平显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,牙周炎组血清中LTB4、Cx43的表达水平显著升高(P<0.05);重度组牙周炎患者的LTB4、Cx43的表达水平高于中度组和轻度组,中度组高于轻度组(P<0.05);Pearson相关性分析显示,血清中LTB4与Cx43水平以及二者与PD、AL、PLI的值均呈正相关(P<0.05);Logistic回归分析显示,PD、AL、PLI、LTB4、Cx43为牙周炎发生的影响因素(P<0.05)。血清LTB4、Cx43预测牙周炎患者发生的曲线下面积均大于单一指标预测(Z=13.582,P<0.001;Z=8.103,P<0.001)。结论牙周炎患者血清中LTB4、Cx43表达水平显著增加,二者表达呈正相关,是牙周炎发生的影响因素。

上调Cx43蛋白表达增强自杀基因治疗鼻咽癌的旁观者效应

目的:研究上调Cx43基因蛋白表达增强自杀基因治疗鼻咽癌的旁观者效应。方法:构建带Cx43基因的重组质粒,转染鼻咽癌细胞CNE-2和CNE-2/tk,实验分组:Cx43未转染组:不同比例鼻咽癌CNE-2细胞与CNE-2tk细胞混合,Cx43转染组:不同比例鼻咽癌CNE-2-Cx43细胞与CNE-2tk-Cx43细胞混合;对照分组:对照组1:不同比例鼻咽癌CNE-2细胞与CNE-2tk细胞混合;对照组2:不同比例鼻咽癌CNE-2-Cx43细胞与CNE-2tk-Cx43细胞混合。以不同对照组比较Cx43转染组与未转染组细胞存活率的差异。结果:以对照组1作为对照,tk^(-)与tk^(+)细胞的混合比例分别为100∶0,95∶5,90∶10,80∶20,75∶25,50∶50,0∶100时,Cx43未转染组与Cx43转染组细胞存活率分别对应为94.3%∶82.4%,83.2%∶63.5%,73.3%∶51.6%,52.7%∶33.9%,38.2%∶27.6%,17.6%∶16.8%,8.1%∶6.3%。tk^(-)与tk^(+)细胞的混合比例分别为100∶0,95∶5,90∶10,80∶20,75∶25时,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),其他各组比较,差异无统计学意义(P>0.05);以对照组1作为Cx43未转染组对照,以对照组2作为Cx43转染组对照,tk^(-)与tk^(+)细胞的混合比例分别为100∶0,95∶5,90∶10,80∶20,75∶25,50∶50,0∶100时,Cx43未转染组与Cx43转染组细胞存活率分别对应为91.8%∶94.7%,82.1%∶71.9%,72.6%∶58.1%,51.6%∶38.7%,35.5%∶29.8%,13.2%∶16.8%,7.6%∶6.3%。tk^(-)与tk^(+)细胞的混合比例分别为95∶5,90∶10,80∶20,75∶25时,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其他各组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:上调鼻咽癌细胞的Cx43和缝隙连接可明显增强自杀基因治疗鼻咽癌旁观者杀伤效应,为鼻咽癌的防治开拓新的方法和思路。

参附汤调控Cx43分布和表达逆转心肌重塑所致心律失常实验研究

目的:评估参附汤(SF)是否能预防梗死边界区(IBZ)重塑和减少心肌梗死(MI)后阶段发生的室性心律失常。方法:通过对左冠状动脉前降支进行结扎的方法制作MI模型,MI后第一天开始进行SF治疗2周,观察SF对MI的影响。结果:SF治疗可显著降低MI后大鼠快速心律失常诱导率和心律失常评分。在超声心动图中,SF改善了左室收缩和舒张功能。组织学评估显示,SF显著减少了IBZ的纤维区和肌细胞区,增加间隙连接蛋白43(Cx43)阳性区。免疫印迹表明,SF处理显著增加了Cx43的总蛋白和磷酸化蛋白水平。结论:SF干预通过Cx43表达和重新分布抑制左室重塑,降低了MI后快速心律失常的易感性。证明了新的抗心律失常药物能够通过逆转IBZ重塑降低MI后室性心律失常的易感性。

Cx43对高糖诱导下心肌细胞功能的调控及机制研究

分析高糖诱导下Cx43对心肌细胞功能的调控及相关机制情况。方法 建立高糖诱导心肌细胞损伤模型,构建Cx43过表达/干扰质粒。共分为4组,包括模型组(HG组)、模型+Cx43过表达组(HG+OE组)、模型+Cx43空质粒组(HG+EV组)、模型+Cx43干扰组(HG+KD组),将各组H9C2心肌细胞转染后用含有浓度30mmol/L的葡萄糖培养基培养48h。根据增殖、划痕以及细胞黏附实验对心肌细胞功能进行观察。采用Western Blot 对各组内质网应激指标GRP78和NLRP3、ASC、IL-1、pro-caspase-1、caspase-1等焦亡相关蛋白进行检测。结果 1.与HG+EV组相比,HG+OE组心肌细胞增殖率、迁移率、黏附率明显增加(P<0.001);而HG+KD组心肌细胞增殖率、迁移率、黏附率显著下降(P<0.001)。2.Western blotting结果显示,与HG+EV组相比,HG+OE组GRP78、NLRP3、ASC、IL-1、pro-caspase-1、caspase-1 蛋白表达水平均明显下降,而HG+KD组上述蛋白表达水平均明显上升(P<0.01)。结论 Cx43可通过调控细胞焦亡而改善高糖诱导后的心肌细胞功能。

柴胡疏肝散对胃肠功能紊乱大鼠结肠肌层缝隙连接蛋白43表达的影响

目的:探讨柴胡疏肝散对胃肠功能紊乱大鼠结肠肌层缝隙连接蛋白43(CX43)表达的影响。方法:将8周龄SD大鼠100只随机分为对照(sham)组、模型(FGID)组、FGID+药物组及sham+药物组,每组25只。对于FGID组、FGID+药物组,利用腹腔注射利血平的方式建立胃肠功能紊乱大鼠模型;sham组及sham+药物组大鼠实施生理盐水腹腔注射;完成造模后,为sham+药物组及FGID+药物组大鼠实施柴胡疏肝散汤剂灌服,sham组与FGID组大鼠灌服灭菌注射用水;通过实时荧光定量聚合酶链反应、Westeron Blot及组织免疫荧光技术检测四组大鼠结肠肌层CX43 mRNA、CX43蛋白表达水平及CX43阳性表达率。结果:四组大鼠结肠肌层CX43 mRNA、CX43蛋白表达水平及CX43阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:柴胡疏肝散能够提高胃肠功能紊乱大鼠结肠肌层CX43的表达水平,从而改善胃肠功能。

CMV致感音神经性耳聋患儿氧化应激指标、Cx43变化及意义

目的探讨巨细胞病毒(CMV)致感音神经性耳聋患儿氧化应激指标、缝隙连接蛋白(Cx)43变化及意义。方法选择2020年6月—2022年6月诊治的CMV感染新生儿102例作为感染组,足月新生儿56例作为对照组。比较2组一般资料、血生化指标、氧化应激指标和Cx43,以及不同听阈CMV感染患儿氧化应激指标和Cx43,探讨CMV感染新生儿Cx43与氧化应激指标、听阈损伤程度相关性。结果感染组总胆红素、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶和丙二醛(MDA)均高于对照组,过氧化物歧化酶(SOD)和Cx43低于对照组(P<0.01)。CMV感染新生儿脑干听觉诱发电位异常以Ⅲ波和Ⅴ波潜伏期延长为主。CMV感染新生儿随着听阈损伤程度逐渐加重,SOD和Cx43逐渐降低,MDA逐渐升高(P<0.05)。CMV感染新生儿Cx43与SOD呈正相关,与MDA和听阈损伤程度呈负相关(P<0.05)。结论CMV致感音神经性耳聋患儿听阈损伤与SOD、MDA和Cx43相关。

CX43蛋白表达对晚期结直肠癌奥沙利铂联合5-FU衍生物化疗疗效和预后影响

目的 分析结直肠癌组织中连接蛋白43(connexin43, CX43)的表达与临床病理特征的关系,以及对短期疗效与长期预后的影响。方法 选取本院2015年1月~2017年4月期间收治的58例接受奥沙利铂联合5-FU衍生物化疗的晚期结直肠癌患者为研究对象,免疫组织化学染色法分析患者结直肠癌组织中CX43蛋白的表达情况。探讨CX43蛋白表达水平与临床病理特征、化疗疗效及生存期之间的关系。结果 58例患者癌组织中,CX43蛋白阳性表达33例,阴性表达25例。CX43表达阳性的患者其组织分化程度为高、中分化的比率明显高于CX43表达阴性患者(P<0.05)。在CX43表达阳性的结直肠癌患者中,Dukes分期为A、B期的比率显著高于CX43表达阴性的患者,Dukes分期为C+D期的比率显著低于CX43表达阴性的患者(P<0.05)。CX43表达阳性的结直肠癌患者存在淋巴结转移阳性的比率明显低于CX43表达阴性的患者,Ki67高表达的比率显著高于CX43表达阴性的患者(P<0.05)。CX43阳性表达组患者的化疗有效率、中位PFS和OS均显著高于CX43阴性表达组(P<0.05)。结论 CX43蛋白表达与结直肠癌分化程度、Dukes分期、淋巴结转移、短期疗效、长期预后等均有密切关系。CX43蛋白表达异常可能是结直肠癌发生发展过程中的重要影响因素。

血清Cx43 miR-125a-5p对四肢骨折延迟愈合临床诊断价值

目的 探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)、细胞间隙连接蛋白43(Cx43)在四肢骨折患者血清中的表达水平及与骨折延迟愈合的关系。方法 选取2018年1月至2021年12月秦皇岛市第一医院收治的188例四肢骨折患者为研究对象,其中骨折延迟愈合患者30例作为延迟组,正常愈合患者158例为对照组。收集两组一般资料,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定两组对象血清miR-125a-5p、Cx43水平;利用受试者工作特征(ROC)曲线评价Cx43、miR-125a-5p水平对四肢骨折延迟愈合的预测价值;logistic回归分析影响四肢骨折延迟愈合发生的危险因素。结果 本研究中188例四肢骨折患者共有30例发生延迟愈合,发生率为15.96%;术后6周、术后12周时,延迟组血清Cx43表达水平低于对照组,miR-125a-5p水平高于对照组(P<0.05);多因素logistic回归分析结果显示,Cx43(OR=0.127,95%CI:0.021~0.775)、miR-125a-5p(OR=3.056,95%CI:1.092~8.552)、年龄(OR=1.142,95%CI:1.008~1.294)、吸烟(OR=1.537,95%CI:1.115~2.117)、骨折类型(OR=1.671,95%CI:1.084~2.577)、合并糖尿病(OR=2.024,95%CI:1.074~3.812)、合并骨质疏松(OR=1.525,95%CI:1.128~2.062)是影响四肢骨折延迟愈合发生的因素;ROC曲线结果显示,术后6周和术后12周血清Cx43、miR-125a-5p水平联合预测四肢骨折患者延迟愈合的曲线下面积(AUC)分别为0.944、0.964,均高于单一指标检测。结论 骨折延迟愈合患者血清中Cx43表达下调,miR-125a-5p表达上调,二者均是骨折延迟愈合的危险因素,联合检测二者表达水平对骨折延迟愈合有较高的预测价值。

缝隙连接蛋白43经典与非经典作用在疾病治疗中的潜在价值

背景:缝隙连接蛋白43在维持组织代谢稳态平衡中发挥着重要作用,传统观点认为它参与了缝隙连接过程,为细胞与细胞之间建立直接的物质信号交换通道奠定结构基础。而近年来研究对于其独特的半通道作用提出了新的看法,并发现了其亚细胞定位、自身片段等对于细胞生理活动及病理过程的重要意义。目的:综述数据库中相关文献,系统性总结缝隙连接蛋白43分子特征及在多种细胞表达的研究进展,重点阐述通道依赖性与非通道依赖性缝隙连接蛋白43的生理与病理作用,并探讨其在疾病治疗中的潜在价值。方法:分别设置“gap junction,connexin 43(Cx43),hemichannel,channel-dependent Cx43,channel-independent Cx43,extracellular vesicles(EVs),mitochondria,GJA1-20k”为英文关键词,以“缝隙连接,缝隙连接蛋白43,半通道,通道依赖性Cx43,非通道依赖性Cx43,线粒体,细胞外囊泡,GJA1-20k”为中文关键词,分别在PubMed数据库及中国知网数据库进行文献检索,最终共入选81篇文献进行综述分析。结果与结论:(1)缝隙连接蛋白43的经典作用即构成缝隙连接通道,通道依赖性缝隙连接蛋白43主要可通过直接构成缝隙连接通道参与组织器官的生理或病理过程,应充分关注其结构和功能的完整性,而黏附是缝隙连接的重要特性,与屏障障碍类疾病密切相关。(2)缝隙连接蛋白43的非经典作用即非缝隙连接通道依赖性作用,缝隙连接蛋白43六聚体目前被发现定位于质膜、线粒体内膜和细胞外囊泡表面等结构,参与炎性疾病的正向促炎机制、线粒体功能代谢和细胞外囊泡的靶向摄取等,选择性截短片段则参与全长连接蛋白43靶向转运至胞内各结构域过程,并且通过促使线粒体周围肌动蛋白聚合,调控线粒体稳态。(3)以上两种作用为开发靶向治疗药物及基于组织工程技术的治疗手段中种子细胞转化机制等问题的解决提供了新思路,但现存的一些原始研究常不能全面考虑不同形式缝隙连接蛋白43的相互作用,从而混杂地描述了其总体特征,使得研究结果产生偏差。(4)未来研究需要系统地构架不同形式存在的缝隙连接蛋白43的生理特性及在各疾病中的潜在机制,为缝隙连接蛋白43完整性机制探索及多疾病的诊断和治疗提供参考依据。

连接蛋白43半通道介导NLRP3炎症小体激活在脑缺血中的作用

缝隙连接蛋白在脑缺血后的神经炎症扩散中发挥重要作用。连接蛋白43(connexin 43,Cx43)作为中枢神经系统中主要的连接蛋白,通常以寡聚形式形成六聚体的半通道,与相邻细胞上的半通道对接,形成缝隙连接通道。在正常生理条件下,细胞表面的半通道开放维持在正常生理水平;然而,在脑缺血的过程中,Cx43半通道的过度开放导致了大量的离子(Na^(+)、Cl^(−)、Ca^(2+)、K^(+))、谷氨酸、天冬氨酸和三磷酸腺苷(ATP)等物质的释放,引起相邻细胞功能紊乱,从而加重神经细胞的损伤。此外,Cx43半通道的开放还诱导炎症因子的释放,这与脑缺血后NLRP3炎症小体的激活密切相关。因此,通过调控Cx43半通道能够缓解脑缺血后神经炎症,进而减轻脑缺血损伤。本文重点综述了Cx43半通道蛋白与NLRP3炎症小体激活的关系,以及其在脑缺血中的作用,旨在为脑缺血的治疗提供新的思路和方法。

Connexin 43-膜纳米管-Ca^(2+)信号途径参与房颤发生的机制研究

目的探讨膜纳米管(membrane nanotubes,MNTs)参与心房颤动(atrial fibrillation,AF)发生的作用机制。方法8周龄雄性SD大鼠随机分为电刺激组和假手术组,每组10只。电刺激组经食道高频心房起搏进行电刺激诱导建立大鼠AF模型,假手术组不予心房起搏电刺激。分离两组大鼠心房肌细胞建立细胞水平电刺激组与假手术组,在此基础上,给予电刺激组心房肌细胞MNTs结构抑制剂Cyto D建立细胞水平电刺激+Cyto D组。利用免疫荧光染色评估心房肌细胞之间的MNTs变化;应用细胞内钙离子(calcium ion,Ca^(2+))荧光钙探针标记心肌细胞中Ca^(2+),随后利用流式细胞术检测荧光探针标记的Ca^(2+)变化;采用蛋白免疫印迹法检测缝隙连接蛋白43(Connexin 43)的蛋白水平表达。结果应用经食道高频心房起搏电刺激成功建立大鼠AF模型。与假手术组相比,电刺激组心房肌细胞之间MNTs连接增多增粗,钙信号显著增强(P<0.01)。与电刺激组相比,电刺激+Cyto D组MNTs减少变细,钙信号显著减低(P<0.05),Connexin 43蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。结论Connexin 43参与MNTs诱发钙信号增加触发晚后除极诱发AF发生。

缝隙连接蛋白43通过调控凋亡参与大鼠牙周炎相关肾损伤

目的本研究旨在探讨缝隙连接蛋白43(Cx43)在大鼠牙周炎诱导慢性肾损伤模型中的作用。方法按照完全随机数字表法将12只SPF级Wistar雄性大鼠分为对照组和牙周炎组,每组6只。对照组大鼠不做处理,牙周炎组大鼠采用钢丝结扎大鼠双侧上颌第一磨牙的颈部,构建牙周炎模型。建模8周后检查大鼠牙周临床指标。显微CT(micro‑CT)扫描大鼠上颌骨重建其三维结构并分析牙槽骨吸收情况;组织病理学检测牙周及肾组织的病理改变;MitoSOX red试剂检测肾组织中活性氧(ROS)含量;生化试剂盒检测血清氧化应激生物标志物;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾组织中Cx43、核因子-κB(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)mRNA表达水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肾组织中Cx43、NF-κB、IL-1β、Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平。结果micro-CT三维重建结果显示,牙周炎组大鼠第一磨牙牙槽骨骨质吸收明显,牙槽嵴高度降低,且釉牙骨质界到牙槽嵴顶的距离显著大于对照组。组织病理学结果显示,牙周炎组大鼠牙周组织内可见大量炎症细胞浸润和牙槽骨明显吸收;牙周炎组大鼠肾组织中肾小球基底膜轻度增厚,鲍曼氏囊腔扩张,肾小管刷状缘破坏。MitoSOX red染色结果显示牙周炎组肾组织中ROS含量明显升高。生化检测结果显示,牙周炎组大鼠血清中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽水平降低,丙二醛水平升高。qRT-PCR和Western blot结果显示,牙周炎组肾组织中Cx43、IL-1β、IL-6、Bax和Caspase-3 mRNA及Cx43、IL-1β、NF-κB、Bax和Caspase-3蛋白表达水平较对照组上升,而Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平下降。结论牙周炎可能通过上调大鼠肾组织中Cx43的表达激活NF-κB信号分子,引起大鼠肾脏组织中炎症水平和凋亡水平升高,最终诱导肾脏损伤的发生。