狂犬病病毒SRV_9株修饰全长基因组cDNA克隆的构建

为获得狂犬病病毒(rabies virus,RV)SRV9株的基因组全长cDNA克隆并对其进行基因修饰,深入研究狂犬病病毒的基因组特性及构建新型病毒载体,本研究根据GenBank中公布的SRV9基因组序列设计数对引物,以SRV9病毒为材料,从病毒总RNA中将全长基因组11 928 bp分5段扩增,克隆至载体测序鉴定。测序正确后,设计引物缺失基因组Ψ区并在缺失位置插入人细胞色素C基因,又设计引物删除糖蛋白(G)胞质区(CD区)。利用引物在病毒基因组起始处添加锤头状核酶序列,在病毒序列结尾处添加了丁型肝炎核酶序列。再次测序后克隆至pcDNA3.1(+)载体,利用扩增片段自身内切酶位点顺次进行修饰后全长连接,从而获得含修饰SRV9全长基因组的质粒pcDNA3.1-SRV9,为RV感染性克隆的建立奠定了基础。

丙型肝炎病毒核心区多片段基因在大肠杆菌内表达

用融合蛋白表达质粒pGex,在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒(HCV)核心区不同基因片段。共获得四个表达蛋白,用免疫印染和ELISA检测均与HCV抗体阳性血清反应而不与正常人血清反应,证明有HCV核心蛋白抗原活性。本工作为进一步研究HCV不同片段核心蛋白多肽功能及发展我国高质量HCV临床诊断试剂提供了基础。