荧光光谱法和分子模拟技术研究考马斯亮蓝G-250与牛血清白蛋白的相互作用

采用多种光谱技术结合圆二色谱技术研究了考马斯亮蓝G-250(CBBG-250)相互作用于牛血清白蛋白(BSA),探究了两者之间的作用机理。荧光光谱结果表明BSA与CBBG-250结合形式是静态猝灭,随CBBG-250浓度增加,其形成常数随温度逐渐减小,结合比为1∶1,根据Stern-Volmer曲线计算焓变值(ΔH)和熵变值(ΔS)分别为-4.38kJ·mol^(-1)和-6.16J·mol^(-1)·K^(-1),均小于零,证明该过程是一个自发过程。傅里叶红外光谱测定结果表明CBBG-250的加入引起BSA结构的变化,随着CBBG-250溶液浓度的增加,BSA中色氨酸微环境极性被改变,在1 600~1 700cm^(-1)(酰胺带Ⅰ)和1 600~1 500cm^(-1)(酰胺带Ⅱ)处的特征吸收带蓝移。其中1 650cm^(-1)移动至1 710cm^(-1),1 544cm^(-1)移动到1 573cm^(-1),显示BSAα-螺旋(1 650~1 658cm^(-1))和β-折叠(1 620~1 640cm^(-1),1 675cm^(-1))结构发生变化,且α-螺旋含量比结合前有所降低。圆二色谱分析结果表明,两者间通过氢键和范德华力为主的作用力使得BSA二级结构发生变化,α-螺旋含量由42.15%下降至1.27%,该结果进一步被分子建模对接技术证明。

考马斯亮蓝G-250染色法测定柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白含量

目的:建立快速、灵敏的蛋白质含量测定方法,对柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白质含量进行测定;方法:运用超声与研磨两种方法提取柠条锦鸡儿种子中的可溶性蛋白,采用考马斯亮蓝G-250染色法对其进行测定;结果:超声提取与研磨提取得到可溶性蛋白含量分别为6.91%、6.87%,RSD分别为0.72%0,.67%;结论:考马斯亮蓝G-250染色法简单、迅速,且两种方法提取的蛋白质含量差别不大。

考马斯亮兰G-250法测定苹果浓缩汁生产中的蛋白含量

考马斯亮兰G 250法(Bradford法)是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。将其用于检测果汁中的蛋白,研究发现,苹果 汁中的几种主要成分,如:果糖、葡萄糖、蔗糖和苹果酸等不会对测定造成干扰,其最大吸收波长不变,标准曲线的线性较 好。并对苹果浓缩汁生产中不同工序物料中的蛋白含量进行测定,测定结果的精密度较好,加标回收率在97.76%～103.20% 之间。

考马斯亮蓝G250染色法测定啤酒中蛋白质含量

以啤酒为原料,利用蛋白质与考马斯亮蓝显色原理,测定啤酒中蛋白质含量,并对测定条件进行优化研究,实验结果表明:波长在595nm处蛋白质有最大吸收峰,反应时间3～5min为最适宜,SDS对马斯亮蓝测定蛋白质含量有干扰。测定所用的标准曲线方程为:y=0.1296x+0.0907。考马斯亮蓝G-250法测量蛋白质含量与凯氏定氮法相比较误差范围3%～8%。

一种新的考马斯亮兰R—250固相染料结合法测蛋白质含量的方法

本文介绍了一种用考马斯亮兰Ｒ—２５０因相染料结合法测蛋白质含量的方法。将蛋白样品点在滤纸上，甲醇固定，考马斯亮兰Ｒ—２５０染色，脱色，用洗脱液洗脱下与染料结合的蛋白质，在波长６１０ｎｍ处测其光密度（ｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙ．Ｏ．Ｄ）值。方法简便，所用样品少，灵敏度高，检测线性范围在０．１ｇ／Ｌ～５ｇ／Ｌ间，重复性较好，批内变异３．５６％～６．６７％，批间变异１．４８％～７．０２％。样品稳定，染色后的滤纸可保存一个月，洗脱液体放置４８ｈ颜色不变。受干扰物质少是本法的一个特点，仅受ＳＤＳ、强碱等少数几种物质的干扰，不受叠氮钠、硫酸铵、ＴｒｔｏｎＸ－１００等物质的干扰。

考马斯亮兰G-250法测定胃液蛋白质含量及其临床意义

目的：探讨考马斯亮兰Ｇ２５０法测定胃液蛋白质含量的方法和意义。方法：采用改进的Ｂｒａｄｆｏｒｄ法对２６例正常人、８例胃癌、２４例溃疡及慢性胃炎、４例肠上皮化生以及４例萎缩性胃炎患者胃液进行蛋白质含量测定。结果：Ｇ２５０与胃液蛋白结合后的最大吸收波长为５９５ｎｍ，反应体系中加入２０μｌ１０ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ后明显提高光吸收值（Ｐ＜０．０５），线性范围在０～５００μｇ／ｍｌ间，比文献报道的高，胃液蛋白质与Ｇ２５０结合后３０ｍｉｎ内保持稳定，本法重复性好，回收率达９３．７％。结果还提示：胃癌组的胃液蛋白质含量明显高于正常对照组和其它胃疾病组（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。结论：用Ｇ２５０法测定胃液蛋白质含量是一种可靠、简便、快速、灵敏的方法，结果具有一定的临床意义。

蛋白质电泳中考马斯亮蓝R-250染色方法的优化与改进

为了优化与改进蛋白质电泳中传统考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue,CBB)R-250染色法凝胶背景深、脱色时间长、试剂消耗多等弊端,通过优化试验,建立了一种简单经济的CBB R-250染色方法。与传统方法相比,该方法在染色液配制中降低了甲醇、冰醋酸的比例,增加了硫酸铵成分,从而有效改善了染色效果,改进后的方法,染色几乎无背景,不需专用脱色液,只需用清水洗涤即可观察效果,大大缩短了试验时间,节约了成本,值得推广应用。

次氯酸钠脱色考马斯亮蓝G-250废液的优化研究

本研究利用次氯酸钠对测蛋白试验废水考马斯亮蓝G-250废液进行脱色处理,利用响应面法优化了次氯酸钠溶液的投加量、废液的pH值和反应时间对考马斯亮蓝G-250废液脱色率的影响.结果表明:次氯酸钠法氧化降解考马斯亮蓝G-250废液的最佳条件为,10 mL的废液里次氯酸钠投加量为10μL,反应时间为15 min,pH为4.77,此条件下废液脱色率达92.55%.研究结果为次氯酸钠脱色处理实验室考马斯亮蓝G-250废液提供参考.

响应面法优化Fenton试剂脱色考马斯亮蓝G-250废液

研究使用响应面法优化Fenton试剂脱色考马斯亮蓝G-250废液.探究pH、H2O2和FeSO4溶液浓度三个单因素对G-250废液褪色率的影响.在单因素实验的基础之上,响应面法优化G-250废液脱色条件.结果表明,Fenton试剂脱色考马斯亮蓝废液G-250的最佳优化条件为:20 mL G-250废液体系中,H2O2投加量为60μL,FeSO4投加浓度为1.5 g/L,pH值为4,该条件下G-250废液褪色率为95.93%.光谱扫描结果表明褪色的废液中含有大量具有苯环结构的分子.实验验证结果为实验室考马斯亮蓝G-250废液的脱色提供了实验依据.

用分光光度法快速测定蛋白质含量的研究

基于分光光度法检测技术,建立了样品中蛋白质含量的快速分析方法.利用试样中蛋白质与染色剂考马斯亮蓝G-250间的快速结合反应,生成有色结合物,在最大吸收波长610 nm处生成物吸光值与样品中蛋白质浓度成比例,线性范围0～100μg/mL,相关系数为0.997,检测时间少于2 min,可用于样品中蛋白质含量的快速测定.

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法

目的建立一种操作简便、快速、灵敏度高、无毒的蛋白质电泳染色方法。方法利用考马斯亮蓝G-250(CBB G-250)在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后对蛋白质条带进行染色,对不同染色条件进行探讨,并与考马斯亮蓝R-250(CBB R-250)染色法进行比较。结果 CBB G-250染色法试剂无毒,背景浅,经改良其灵敏度与CBB R-250染色法相当,达到0.1～0.5μg。结论 CBB G-250染色方法简单经济,灵敏度能够满足一般要求,适用于蛋白质电泳结果的快速分析。

考马斯亮蓝与牛血清白蛋白相互作用机理的研究(英文)

利用光谱探针技术研究在酸性溶液中考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250,CBBG)与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)相互作用机理,考察了不同实验条件对CBBG-BSA复合物吸收光谱的影响。实验结果表明:CBBG与BSA相互作用产生光谱蓝移主要是由CBBG与BSA间的疏水相互作用引起,而静电作用则是形成CBBG-BSA蓝色复合物的必要条件。同时,CBBG聚集体的聚集程度是影响CBBG-BSA蓝色复合物形成的重要因素。

柞蚕微孢子虫侵染后柞蚕5龄雌雄个体血淋巴蛋白质含量和组成的变化及差异分析

以柞蚕5龄幼虫为材料添食柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi,Np),通过测定与分析不同性别5龄幼虫血淋巴蛋白质含量和组成变化的差异,为探究柞蚕对柞蚕微孢子虫感染的免疫应答提供依据。感染柞蚕微孢子虫的不同性别柞蚕5龄幼虫的血淋巴蛋白质含量随蚕体发育进程出现不同的变化:雌性个体与雄性个体分别在添食Np后24 h与48 h,血淋巴蛋白质含量极显著增加(P<0.01),且持续至添食后96 h,其中雌性个体的血淋巴蛋白质含量又极显著高于雄性个体(P<0.01);在添食Np后120 h,雌、雄个体的血淋巴蛋白质含量与对照组无显著性差异(P>0.05)。SDS-PAGE分析表明,添食Np后的柞蚕5龄幼虫血淋巴蛋白质组成与对照组基本一致,均显示出20条分子质量在20.1～97.2 kD的蛋白条带,其中雌、雄个体在添食后96 h,大小约44 kD的蛋白条带明显加深,大小约28 kD的蛋白条带雌性个体在添食后144 h、雄性个体在添食后120 h明显加深,且雄性个体在添食后120～168 h大小约42 kD的蛋白条带明显加深,但在添食后192 h与对照组无明显差异。研究结果说明Np侵染后,柞蚕5龄幼虫血淋巴蛋白质的含量及组成均产生了一定的变化,并且雌雄个体间的变化存在差异。

蚓激酶提取条件的优化与酶活性测定

蚯蚓纤溶酶是目前较为理想的溶栓药物之一,具有广泛的临床应用前景。采用盐析法从蚯蚓中提取蚓激酶,通过采用考马斯亮蓝G-250染色法间接地测定蚓激酶活性,优化出最佳的提取条件。结果显示,蚓激酶的提取最佳PH为7.5-8.0,二次盐析硫酸铵饱和度应在80%以上。

蛋白质SDS-PAGE电泳实验常见问题及改进措施

SDS-PAGE电泳是检测蛋白质纯度和评估蛋白质分子量的常用方法,也是一项极其重要的生物化学实验技术。本文针对SDS-PAGE电泳实验过程中凝胶渗漏、凝固时间不易把握等问题,以及染色、脱色耗时长且需使用甲醇等缺点,提出巧用白吸头解决漏胶问题,设立对照判断凝胶是否凝固,用考马斯亮蓝G250代替G250,用乙醇代替甲醇等改进措施。改进后的方法具有耗时短、少用有毒试剂、效果好等特点,比较适宜于课堂教学。

快速测定生物样品中蛋白含量的同步荧光法研究

基于胞苷酸(CMP)与人血清白蛋白(HSA)相互作用,体系的同步荧光强度和溶液中白蛋白的浓度呈良好的线性关系,建立了以胞苷酸为分子探针,运用同步荧光光谱法测定生物样品中蛋白质含量的新方法.考察了Δλ值、介质、试剂用量、离子强度、加入顺序、反应时间等因素对体系同步荧光光谱的影响,在最佳实验条件下,体系的同步荧光强度与白蛋白在2.76～552.0μg·mL-1范围内的线性相关系数为0.9984,方法的检测限可达0.13μg·mL-1.用本方法对人血清、唾液和尿液等样品进行测定并做了加标回收实验,回收率在97.8%～103.6%之间.对11份空白溶液进行平行测定,相对标准差为1.16%.并用CBB法做了对照实验,取得了令人满意的结果.

二氧化钛光催化降解蓝色染料的动力学研究

本文选择两种蓝色有机染料——曲利苯蓝与考马斯亮蓝R250为研究对象,使用二氧化钛为催化剂,研究了它们在254nm紫外光下降解的影响因素以及相应的动力学模型。实验结果显示,随着二氧化钛投加量的增加以及反应时间的延长,曲利苯蓝与考马斯亮蓝R250的脱色率均随之升高;而增大曲利苯蓝与考马斯亮蓝R250的起始浓度,它们的脱色率则随之下降。此外,溶液p H也对对于这两种染料的降解存在一些影响。在二氧化钛的催化下,曲利苯蓝与考马斯亮蓝R250的降解均符合准一级Langmuir-Hinshelwood方程。

尿蛋白定量方法探讨及对CBB法的改良

探讨了尿蛋白测定方法,并改良了CBB—I尿蛋白定量法,于试剂中加入SDS和TritcX-100,可改善不同比例白、球蛋白反应灵敏的差异。并观察了蛋白成份及温度对5种蛋白测定方法反应的影响。实验证明:CBB—Ⅱ法在许多方面优于其他方法,操作简单、快速,适于临床常规尿蛋白定量测定。

Bradford法测量不同加工工艺鹿茸蛋白含量研究

目的:通过测定不同加工工艺鹿茸中可溶性蛋白质的含量,为鹿茸加工工艺的优选提供理论依据。方法:采用Bradford法分别测定鲜品鹿茸、鲜品去血鹿茸、煮炸鹿茸、直接冻干鹿茸、匀浆鹿茸、冻干加保护剂鹿茸、冻干未加保护剂鹿茸、冻干加保护剂40℃,10天鹿茸样品中的蛋白质含量,通过Kruskal-Wallis检验进行统计学分析不同加工工艺对鹿茸质量的影响。结果:不同加工工艺鹿茸中的蛋白质含量由大到小依次为鹿茸鲜品、直接冻干、匀浆鹿茸、冻干未加保护剂、冻干加保护剂40℃10天、冻干加保护剂、鲜品去血鹿茸、煮炸鹿茸。经秩和检验统计分析,与鹿茸鲜品相比,其它各组的蛋白质含量均显著降低(P≤0.05);与煮炸鹿茸相比,其它各组的蛋白质含量均显著提高(P≤0.05);此外,鹿茸匀浆组显著低于鹿茸直接冻干组(P≤0.05);鹿茸冻干品组显著低于鹿茸匀浆组和鹿茸直接冻干组(P≤0.05)。结论:鹿茸加工过程中的冻干、粉碎、匀浆、加热等工艺均会影响鹿茸中蛋白质的含量。加工工艺的步骤越多,工艺越复杂,对活性蛋白质成分的破坏作用越大。特别是鹿茸传统煮炸工艺中的高温加热与去血操作极易造成鹿茸中活性蛋白质成分的破坏和损失。与传统煮炸工艺相比,冻干工艺在低温下进行,有利于保持鹿茸中蛋白类成分的含量和活性。

玉米芯水解制木糖过程中氛态氬类成分研究

分别利用微量凯氏定氮法检测了玉米芯及木糖生产过程中物料、副产物的总氨态氮含量;利用考马斯亮蓝染色法检测了木糖生产过程中物料的蛋白质含量;利用SDS-PAGE检测了木糖生产过程中蛋白质的相对分子质量分布变化情况。结果显示,玉米芯中总氨态氮含量约为2.44%(干基);活性炭对物料中的总氨态氮和蛋白质有一定的脱除作用;离子交换树脂相对脱除作用不明显;玉米芯水解液中蛋白质相对分子质量主要分为66.4 KDa附近和小于14.3 KDa的两个区域,通过活性炭有效脱除的是低分子量的蛋白质,相对分子质量为66.4 KDa的蛋白质无法在活性炭脱色和离子交换工序有效脱除。