水稻瘤矮病毒S3和S8基因共表达杆状病毒转移载体构建及重组病毒的鉴定

为构建携带水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)主要内层衣壳蛋白S3基因和外层衣壳蛋白S8基因的重组杆状病毒,将目的基因(S3和S8)分别亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual多角体启动子(PH)和p10启动子的下游.经酶切和确证性序列测定,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,获得重组杆粒rbpFBDS3-S8,采用脂质体转染法,将rbpF-BDS3-S8转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf9细胞包装病毒,PCR筛选鉴定重组病毒.结果表明:Sf9昆虫细胞被侵染72 h后,倒置显微镜下观察到细胞增大,培养液和细胞内出现颗粒状物质,部分细胞破裂甚至裂解,说明S3和S8基因已整合到重组杆状病毒基因组中,这为开展RGDV主要结构蛋白在昆虫细胞中的表达及其功能研究奠定了基础.

乙型肝炎病毒核心蛋白赖氨酸位点K96对病毒衣壳组装的影响

通过构建突变型蛋白表达质粒,将乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitis B virus core protein, HBc)的赖氨酸位点K96突变为谷氨酰胺(Q)或精氨酸(R),以分别模拟HBc的持续性乙酰化状态以及去乙酰化状态,分析赖氨酸位点K96在病毒衣壳组装过程中的关键性作用;通过建立瞬时转染模型,将野生型及突变型核心蛋白表达质粒转染至细胞中,分别检测突变后的核心蛋白的表达水平和衣壳组装水平,比较分析不同突变对衣壳组装的影响。结果表明:阻断赖氨酸位点K96的乙酰化修饰能够抑制HBc的表达,并且显著降低病毒衣壳的组装水平;而赖氨酸位点K96的持续性乙酰化状态对HBc的表达和病毒衣壳组装水平没有显著影响。