补骨脂化学成分的研究

从补骨脂(Psoralea corylifolia L.)中分得八个化合物,经光谱鉴定为:异补骨脂素(Ⅰ),补骨脂素(Ⅱ),补骨脂定(Ⅲ),补骨脂宁(Ⅳ),补骨脂色烯素(Ⅴ),补骨脂查耳酮(Ⅵ),对羟基苯甲醛(Ⅶ),补骨脂乙素(Ⅷ)。对羟基苯甲醛为首次从该属植物中分得。

HPLC法同时测定补骨脂药材中6种成分的含量

目的:建立同时测定补骨脂药材中6种成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法同时分析补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂甲素、补骨脂异黄酮、补骨脂定和补骨脂查耳酮6种成分。用AlltechC18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,1%冰醋酸溶液和乙腈为流动相,采用梯度洗脱,流速1.0ml/min,检测波长245nm。结果:6种成分线性关系良好,r>0.9991,平均加样回收率均大于95.0%,RSD均小于3.0%。结论:该方法适用于补骨脂药材中6种成分的同时测定,可作为药材质量的综合评价方法。

补骨脂中两个黄酮类成分的高效液相色谱测定

目的 :同时测定补骨脂中的两个黄酮类成分。方法 :以实验室制备的补骨脂二氢黄酮和补骨脂异黄酮为对照品 ,采用反相高效液相色谱法测定含量。TechsphereODS色谱柱 (4.6mm× 2 5 0mm ,5 μm) ;流动相为甲醇 2 0mmol·L-1醋酸铵缓冲液 (pH 4 .0 ) (6 7∶33) ;检测波长 2 4 0nm。 结果 :补骨脂二氢黄酮和补骨脂异黄酮浓度为 1.2 5～ 2 0 μg·mL-1,线性关系良好 ;补骨脂二氢黄酮和补骨脂异黄酮的平均回收率分别为 94 .9%和 96 .2 % ;RSD分别为 3.1%和 3.6 %。结论 :首次建立了同时测定补骨脂中补骨脂二氢黄酮和补骨脂异黄酮的HPLC分析方法 ,本方法结果准确 ,重现性好 ,适用于补骨脂黄酮类成分的分析测定。

高效液相色谱法测定补骨脂中三种黄酮类成分的含量

目的 :建立补骨脂中三种黄酮类成分含量测定方法。方法 :采用高效液相色谱法分析补骨脂中补骨脂甲素和补骨脂异黄酮的含量。色谱柱 :汉邦 Lichrosphore C1 8(2 5 0 mm× 4.6mm ,5μm) ;流动相 :乙腈 -水 (4∶6) ;流速 1.0 ml/ min;检测波长 :2 79nm(0～ 3 0 min) ,2 47nm (3 0～ 45 min) ;进样量 2 0μl。补骨脂查耳酮 :色谱柱 :汉邦 L ichrosphore C1 8(2 5 0 mm× 4.6mm,5 μm) ;流动相 :甲醇 -水 (85∶ 15 ) ;流速 1.0 ml/ min;检测波长 3 87nm ;进样量 2 0μl。结果 :平均加样回收率为 98.2 % ,RSD为 1.3 % ,0 .0 489～ 0 .3 91μg,r=0 .9999(n=7)。结论 :该方法适合于测定补骨脂中黄酮类成分的含量 ,应用该方法对不同产地的补骨脂中 3种成分含量进行了测定。不同产地中黄酮类成分的含量存在很大差异 ,对补骨脂黄酮类成分进行含量测定应成为补骨脂质量控制的重要环节。

补骨脂异黄酮对炎症小体的调控作用及机制初探

目的基于小鼠骨髓巨噬细胞系,建立NLRP3、NLRC4及AIM2炎症小体活化模型,探索补骨脂异黄酮对炎症小体的调控作用及初步机制。方法采用LPS联合ATP、Nigericin、Salmonella和Poly(dA∶dT)等刺激因子,分别构建NLRP3、NLRC4和AIM2炎症小体活化模型;Caspase-Glo~® 1 Inflammasome Assay检测caspase-1活性;免疫印迹法检测细胞培养上清中mature IL-1βp17、caspase-1 p20的蛋白水平,以及细胞裂解液中pro-caspase-1、pro-IL-1β、ASC、NLRP3等蛋白表达。结果补骨脂异黄酮可抑制LPS联合ATP、Nigericin、Salmonella和Poly(dA∶dT)诱导的pro-caspase-1自我剪切,抑制caspase-1介导的IL-1β产生,表明补骨脂异黄酮可抑制NLRP3、NLRC4及AIM2炎症小体活性。此外,研究发现补骨脂异黄酮对NLRP3炎症小体活性的抑制作用具有不可逆性,且不依赖于NF-κB通路。结论补骨脂异黄酮可通过抑制pro-caspase-1自我剪切活化,从而抑制NLRP3、NLRC4、AIM2炎症小体的激活,进一步抑制其介导的免疫炎症反应,本研究也在一定程度上为补骨脂异黄酮相关制剂治疗免疫炎症疾病提供依据。

补骨脂异黄酮抑制破骨细胞分化缓解小鼠去卵巢骨质疏松

背景:骨代谢平衡由破骨细胞介导的骨吸收作用和成骨细胞介导的骨形成作用共同完成。破骨细胞的过度激活可导致一系列的骨代谢疾病如风湿性关节炎、骨质疏松等。RANKL介导的NF-κB通路激活在破骨细胞分化中发挥重要作用。目的:探究补骨脂异黄酮在RANKL介导的破骨细胞分化中的作用。方法:以0,1,2,4,8,16,32,64,128μmol/L补骨脂异黄酮孵育RAW264.7细胞,CCK-8分析补骨脂异黄酮的细胞毒性;RANKL诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,分化过程中给予2,5,10μmol/L补骨脂异黄酮,干预5 d后采用TRAP染色分析破骨细胞数量,F-actin染色分析破骨细胞形态及功能;干预2 d后骨吸收实验分析破骨细胞的骨吸收功能;干预0,15,30,60 min后western blot分析RANKL介导的NF-κB通路的激活情况;然后进行体内实验,卵巢切除小鼠每周接受10 mg/kg补骨脂异黄酮腹腔注射治疗2次,干预6周后取小鼠股骨进行形态学分析。结果与结论:①在16μmol/L浓度以下补骨脂异黄酮无细胞毒性;②补骨脂异黄酮可抑制RANKL介导的破骨细胞分化,抑制作用呈浓度依赖性;③补骨脂异黄酮可抑制破骨细胞F-actin形成和破骨细胞的骨吸收功能;④补骨脂异黄酮可抑制RANKL介导的NF-κB通路;⑤补骨脂异黄酮干预可缓解小鼠绝经后骨质疏松后的骨量丢失;⑥结果表明,补骨脂异黄酮通过抑制RANKL介导的NF-κB通路激活,进而调控破骨细胞分化并缓解绝经后骨质疏松。

补骨脂异黄酮治疗代谢性骨病的研究进展

骨是不断进行再生和重建的动态组织,其代谢活动主要由成骨细胞介导的骨形成和破骨细胞介导的骨吸收共同调节。此外,脂肪细胞、炎症细胞、内皮细胞和神经细胞等多种细胞均可通过改变骨髓微环境进而影响骨代谢。骨代谢紊乱导致的骨代谢疾病的发病率随着老龄化的加重而逐年攀升。目前临床对骨代谢疾病的治疗有着周期长、费用高及不良反应多等缺点,亟需安全、高效的防治药物。补骨脂异黄酮(corylin)是从传统中药补骨脂中提取的一种异黄酮类物质,其具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、缓解肥胖和改善胰岛素抵抗等多种药理作用。研究表明,corylin不仅可通过促进成骨细胞分化、抑制破骨细胞分化发挥骨保护作用,还能通过调节脂代谢、炎症反应、血管生成和抗衰老发挥对骨代谢的积极作用。该文就corylin直接或间接调控骨代谢的作用及机制进行综述,以期为骨质疏松、骨折及骨关节炎等疾病的防治开拓新的视角。

补骨脂炮制历史沿革和机制研究进展及质量标志物(Q-Marker)预测

补骨脂Psoralea Fructus具有温肾壮阳、健脾等功效,但因辛热而燥,长用有伤阴之嫌,炮制可缓和偏燥之性,在我国传统中医药历史上应用广泛。通过查阅相关医学典籍及文献,对补骨脂的炮制方法历史沿革及现代炮制机制的研究进展进行总结。从化学成分可测性、成分与传统功效相关性、药动学及体内过程等对补骨脂的质量标志物(quality marker,Q-Marker)进行预测分析,初步确定补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮、补骨脂异黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂酚等为其可能的Q-Marker,为补骨脂的炮制工艺传承、质量标准制定以及临床应用提供参考。

补骨脂宁通过激活Nrf2/HO-1并抑制NF-κB信号通路在过氧化氢诱导的HT22细胞和脂多糖诱导的BV2细胞上发挥抗氧化和抗神经炎症作用

氧化损伤和神经炎症与许多神经系统疾病相关。近年来,研究发现中药补骨脂能够改善中枢神经系统损伤。本研究旨在评价两个来自补骨脂的化合物:补骨脂宁和补骨脂定的神经保护作用,并揭示其作用机制。实验结果表明,补骨脂宁和补骨脂定能够抑制过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的小鼠海马神经原代细胞(HT22)活性氧(ROS)的生成,抑制脂多糖(LPS)诱导的小鼠神经小胶质细胞(BV2)一氧化氮(NO)的生成。由于补骨脂宁在低剂量即表现出活性,且在高剂量时未表现出细胞毒,因此进一步研究其潜在的神经保护作用机制。在H_(2)O_(2)诱导的HT22细胞中,补骨脂宁显著增加过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,促进谷胱甘肽(GSH)分泌,抑制线粒体膜电位(MMP)降低。同时上调Nrf2和HO-1蛋白在HT22细胞中的表达。在LPS诱导的BV2细胞中,补骨脂宁显著抑制炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,并能够特异性抑制NF-κBp65转移入核。分子对接结果显示:补骨脂宁能够进入Keap1和NF-κB蛋白的疏水口袋,结合良好。本研究证实,补骨脂宁能够改善H_(2)O_(2)诱导的氧化损伤和LPS诱导的神经炎症,其作用机制可能与Nrf2/HO-1和NF-κB信号通路有关。

D-最优设计响应面法结合UHPLC优选补骨脂药材炮制工艺

目的采用D-最优设计响应面法结合UHPLC技术优选补骨脂药材炮制工艺。方法以补骨脂药材炮制工艺的关键参数闷润时间、炒制温度及加盐量为自变量,进行D-最优设计;以UHPLC检测获得的补骨脂药材中9种主要指标成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素、补骨脂宁、补骨脂查耳酮和补骨脂酚炮制前后的质量分数变化为因变量,进行响应面分析;并结合单因素试验优化炒制时间,优选出补骨脂药材炮制工艺。结果补骨脂药材的最佳炮制工艺为在100 g补骨脂药材中加入2.10 g盐,闷润12 h,在80℃炒制30 min。结论利用D-最优设计响应面法结合UHPLC能够优选补骨脂药材炮制工艺参数,提高炮制工艺的稳定性和重复性,为提高补骨脂盐炙品的质量均一性和临床用药安全性提供技术支持。

炮制时间对盐补骨脂中10种化学成分的影响

目的建立同时测定补骨脂Psoralea corylifolia中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂二氢黄酮、补骨脂二氢黄酮、异补骨脂查耳酮、补骨脂宁、新补骨脂异黄酮和补骨脂酚10种化学成分的方法,并探讨炒制时间对盐补骨脂中10种成分的影响。方法采用UPLC法,色谱条件:C18柱(50 mm×4.6 mm,1.8μm),流动相为乙腈-水,采用梯度洗脱,体积流量1 m L/min,检测波长250 nm,柱温30℃。结果被测定的10种成分色谱峰在15 min分析时间内均有良好的分离度,精密度RSD均小于3%;在室温条件下24 h内稳定;各成分均有较宽的线性范围和良好的线性关系(r≥0.997 0);平均加样回收率96%~105%,RSD均小于3%。结论本方法操作简便,快速,测定结果准确可靠,可用于补骨脂的质量控制。随炒制时间的延长,香豆素类成分呈现先降后升再降趋势,黄酮类、补骨脂酚及10种成分总量有降低趋势。

杜鹃兰化学成分及神经保护活性研究

目的研究杜鹃兰Cremastra appendiculata的化学成分及其神经保护活性。方法采用AB-8大孔树脂柱色谱、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、ODS中低压柱色谱及高效液相柱色谱等手段进行分离，并通过波谱方法对所得化合物的结构进行鉴定和解析。结果对杜鹃兰乙醇提取物的醋酸乙酯萃取层进行分离，共得到了23个化合物。通过理化性质、现代波谱学手段及文献对照等方法鉴定了其中20个化合物的的结构，分别为双[4-（β-D-吡喃葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯（1）、1-[4-（β-D-吡喃葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基-4-甲基苹果酸酯（2）、1-[4-（β-D-吡喃葡萄糖氧）苄基]-4-甲基-2-苄基苹果酸酯（3）、山药素Ⅲ-3-葡萄糖苷（4）、红果酸（5）、橙皮苷（6）、1,3-二甲氧基酰胺基-4-甲基苯（7）、（3-甲氧基酰胺基-2-甲基苯）-氨基甲酸甲酯（8）、4，4’-二甲氧基酰胺基二苯甲烷（9）、3，3’-二羟基-2，6-双（p-羟基苄基）-5-甲氧基苯（10）、3’，5-二羟基-2-（4-羟基苄基）-3-甲氧基苯（11）、3,3’-二羟基-2-（4-羟基苄基）-5-甲氧基苯（12）、补骨脂宁（13）、山药素Ⅲ（14）、新补骨脂异黄酮（15）、异补骨脂查耳酮（16）、2,6，2’，6＇-四甲基-4，4-R2（2，3-环氧基-1-羟基丙基）联苯（17）、coelonin（18）、石斛酚（19）、β-谷甾醇（20）。结论其中化合物7～9、13、15～17为首次从该属植物中分离得到，化合物5、6为首次从该植物中分离得到。其中化合物1和17在H202损伤模型中表现出了较好的神经保护作用，并且推测其发挥神经保护作用的机制可能是通过减轻氧化损伤实现的一。

补骨脂药材UPLC指纹图谱建立及12种主要成分含量测定

目的建立补骨脂Psoralea corylifolia药材的UPLC指纹图谱,同时对其中12种成分进行含量测定,为其质量控制提供参考。方法采用Shim-pack GIST-HP色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm);以水和乙腈为流动相,梯度洗脱,建立10个产地29个批次的补骨脂药材的UPLC指纹图谱,并采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012年版)进行相似度评价。同时测定了补骨脂药材中12种成分的含量。结果建立了补骨脂药材的UPLC指纹图谱,29批药材的相似度在0.827~0.989,共标定出21个共有峰,并指认出其中12个色谱峰。定量分析条件方法学考察结果良好,29批药材中补骨脂素、异补骨脂素、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、欧前胡素、补骨脂宁、补骨脂定、4,5-去氢异补骨脂定、补骨脂乙素、异补骨脂色烯查耳酮、补骨脂酚的质量分数依次为1.08~6.95、0.76~5.01、0~0.62、0.40~2.54、0.32~1.75、0~0.25,0.06~0.73、0.23~1.83、0~0.27、0.86~6.86、0.08~1.59、4.20~20.76 mg/g。结论UPLC指纹图谱结合多成分同时测定的方法,操作简便,结果准确、稳定,可为补骨脂药材的质量评价提供参考。

基于高通量测序技术探讨补骨脂宁治疗肺癌的潜在机制

目的:探索补骨脂宁治疗肺癌的潜在分子机制。方法:利用不同浓度的补骨脂宁干预A549细胞,采用噻唑蓝(MTT)法、高通量测序技术、趋势分析、基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析的方法分别检测A549细胞的增殖能力,筛选补骨脂宁抑制A549细胞增殖的关键基因以及关键通路,并利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)对测序的结果进行验证,探讨补骨脂宁治疗肺癌的潜在机制。结果:补骨脂宁可明显抑制A549细胞的增殖,并调节细胞内4364个基因的表达。通过趋势分析发现这些差异基因分别聚类在20个基因表达模式中,其中前4个基因表达模式具有统计学意义,且均为显著下调趋势,说明补骨脂宁主要通过抑制某些基因的表达,发挥抗增殖的作用;通过组间差异基因的比较,笔者发现随着补骨脂宁浓度的增加,下调基因也随之增加,细胞增殖趋势越加减弱,与趋势分析结果一致,因此,笔者着重分析高浓度补骨脂宁干预组的278个差异基因,GO分子功能结果显示,补骨脂宁主要改变细胞和代谢的过程,KEGG通路富集结果显示,补骨脂宁主要通过影响类固醇生物合成、脂肪酸代谢、不饱和脂肪酸的生物合成、酮体的合成与降解和类固醇激素的合成等通路发挥作用,因此选取显著富集于脂质代谢通路并且P<0.01的差异表达基因LSS,硬脂酰基辅酶A脱氢酶(SCD),3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶基因(HMGCS1),血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)进行验证,Real-time PCR显示补骨脂宁可以抑制LSS,SCD,HMGCS1的mRNA表达,升高ANGPTL4的mRNA表达,与测序结果基本一致。结论:补骨脂宁主要通过靶向脂质代谢途径相关的代谢因子,抑制A549细胞增殖,从而达到治疗肺癌的作用。