江浙皖部分地区副鸡禽杆菌分离鉴定及生物学特性研究

为了解江浙皖地区鸡传染性鼻炎流行状况,对浙江、江苏和安徽部分地区疑似鸡传染性鼻炎的8个鸡场进行样品采集,对122份样品进行病原菌分离,对10株分离株进行形态学、卫星试验、PCR鉴定、生化鉴定和血清型鉴定等检测;利用分离株人工感染SPF鸡的动物回归试验,对攻毒后7 d和14 d的鸡只进行病理剖检和病理组织切片观察。结果表明,122份样品中副鸡禽杆菌阳性数为48个,阳性率为39.3%,8个养殖场的阳性率为36.8%~50.0%。10株副鸡禽杆菌分离菌,其中A型3株、B型4株、C型3株,致病率为60%~80%。表明不同血清型副鸡禽杆菌在江浙皖地区均有流行,具有一定的致病性,这为鸡传染性鼻炎三价疫苗研发和防控提供参考。

C型副鸡禽杆菌山东株的分离及PCR鉴定

山东某免疫鸡传染性鼻炎(A型)灭活疫苗的蛋鸡场,在疫苗保护期内发生疑似鸡传染性鼻炎感染。通过对患病鸡进行剖检、细菌分离、PCR鉴定和血清型鉴定,结合HMTp210基因Region 2序列测序并分析,最终确定引起该蛋鸡场发病的病原是C型副鸡禽杆菌。

Avibacterium paragallinarum: an emerging birds pathogen in Qinling wildlife conservation center, China

The bacterium Avibacterium paragallinarum,previously known as Haemophilus paragallinarum,is responsible for caus-ing infectious coryza(IC)in chickens and other avian species.In this case report,an outbreak of Avibacterium paragal-linarum occurred in the Qinling area of China,resulting in clinical symptoms of facial swelling in several bird species,including Golden pheasant,Temminck's tragopan,and Peafowls,and three Golden pheasants died due to prolonged infection.Specific PCR results confrmed the presence of the pathogen in the infected birds.The report describes the clinical symptoms and pathological changes observed in the affected birds,as well as the isolation and identification of Avibacterium paragallinarum.Whole-genome sequencing and phylogenetic anal sis y were performed,and this is the frst report of inter-and intra-species transmission of infectious coryza among wild birds in China.

副鸡禽杆菌毒力因子研究进展

副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)是鸡传染性鼻炎的病原菌,可以引起鸡鼻腔分泌黏液性物质、打喷嚏、眶下窦肿胀、面部水肿和结膜炎等临床症状,导致病鸡生长不良,产蛋率急剧下降,从而危害养禽生产。Apg的致病性受多种因素影响,包括荚膜、脂多糖等细胞壁结构成分和菌体分泌的功能性蛋白(如血凝素和金属蛋白酶等)。本文从生物被膜及组分、细菌分泌物、铁离子获取和利用等方面对Apg毒力因子的研究进展进行归纳和综述,以期为鸡传染性鼻炎的科学防治提供理论参考。

培养副鸡嗜血杆菌用干粉培养基的优化研究

优化副鸡嗜血杆菌干粉培养基配方。通过单因素平行对比配方中碳源、血清、辅酶等营养物质,确定各个因素对副鸡嗜血杆菌生长的影响。研究筛选出了适宜副鸡嗜血杆菌生长的干粉培养基配方:鸡肉蛋白胨、酪胨、多价胨、酵母粉、葡萄糖等,再添加7.5%鸡血清和10 mg/L辅酶Ⅰ,于37℃、5%CO_(2)恒温培养箱中160 r/min振荡培养14~16 h。优化后的配方更适于培养副鸡嗜血杆菌,为副鸡嗜血杆菌疫苗大规模生产提供了参考依据。

鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗生产用菌株的筛选

为了筛选免疫原性良好的鸡传染性鼻炎灭活疫苗生产用菌株,本试验对分离的5株A型、3株B型和3株C型副鸡禽杆菌的致病性和免疫原性进行分析。首先通过毒力试验筛选毒力较强的菌株,对筛选出的菌株进行最小发病剂量测定,再将最小发病剂量定为攻毒剂量,进行免疫原性分析和最小抗原含量测定。毒力试验结果显示,11株分离株均具有较强的毒力,从中筛选出毒力较强的A型菌2株(HN3株和HB2株)、B型菌2株(HN5株和SD4株)和C型菌2株(HN1株和SD3株)。最小发病剂量测定结果显示,A型HN3株、B型HN5株和C型SD3株毒力最强,最小发病剂量分别约为2.0×10^(4)、1.8×10^(3)和2.3×10^(3)CFU。免疫原性分析和最小抗原含量测定结果显示,A型HN3株、B型HN5株和C型SD3株具有良好的免疫原性,不仅可以抵抗同源菌株的攻击,还能对同血清型异源菌株提供良好的保护,免疫后血清HI抗体效价和阳性比例均较高,且与攻毒保护相关性较好,A型HN3株、B型HN5株和C型SD3株的最小抗原含量分别为5.0×10^(8)、1.0×10^(9)和1.5×10^(9)CFU/mL。因此,毒力较强和免疫原性良好的A型HN3株、B型HN5株和C型SD3株副鸡禽杆菌可作为鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗的生产用菌株。

副鸡嗜血杆菌的分离鉴定及我国鸡传染性鼻炎的流行状况分析

从不同地区免疫失败鸡场的鸡传染性鼻炎疑似鸡体内共分离到19株细菌,经回归试验、PCR等方法鉴定为副鸡嗜血杆菌。又将分离株用血清平板凝集试验、血凝抑制试验和型特异性单抗进行了血清型的鉴定,结果表明分离菌有15株为A型,4株为B型,说明我国鸡传染性鼻炎的流行已经出现了新的特点,在疾病预防和控制中应加以注意。另外大多数鸡场的免疫失败是由于免疫效果不良所致,但也有相当一部分鸡场的免疫失败是由于B血清型的出现引起的。

2012-2017年我国鸡传染性鼻炎流行态势分析

2012-2017年,北京、山东、安徽、贵州、河北和广西等省市区送检鸡传染性鼻炎疑似病料125份,共分离到副鸡禽杆菌45株,其中A型15株,B型30株。表明近六年来我国的鸡传染性鼻炎以B型为主。

鸡传染性鼻炎单抗阻断ELISA诊断试剂盒的研究

本研究在单抗阻断ELISA方法的基础上成功地建立了鸡传染性鼻炎阻断ELISA诊断试剂盒，结果证明，本盒具有较子的敏感性、特异性和重复性，在对临床病鸡、人工感染鸡和免疫鸡的检测中，A型检出率可高达75％-90％，C型的检出率也可达到60％。试剂盒在37℃可保存7天以上，4℃可保存10个月，-20℃可保存1年以上。是一种适合推广应用的良好的鸡传染生鼻炎诊断产品。

利用aroA基因建立鸡传染性鼻炎PCR诊断方法

利用aroA基因设计了 1对引物 ,分别对 10株标准副鸡嗜血杆菌 (HPG)菌株、14株分离的HPG菌株进行PCR扩增 ,结果均得到了与预期大小一致的片段 ,而对 10株非HPG菌株和 3株病毒进行扩增则无相应片段产生 ;该PCR能检测出 10个菌细胞。与常规PCR方法相比 ,aroA

鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗安全性试验和效力检验初报

利用PageA、B、C型副鸡禽杆菌,研制鸡传染性鼻炎(IC)三价灭活疫苗。用6批IC疫苗进行了大剂量单次接种和单剂量多次接种的安全性试验,结果表明,IC三价灭活疫苗安全无副作用;用3批疫苗进行SPF鸡和普通鸡的免疫效力试验,结果对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥80%;商品鸡42日龄首免,110日龄二免,二免后约9个月对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥80%;用4℃～8℃保存一年的3批疫苗进行了SPF鸡的近期免疫效力试验,结果对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥80%。

单抗阻断ELISA检测副鸡嗜血杆菌血清型特异性抗体的研究

本研究在副鸡嗜血杆菌Ａ、Ｃ型特异性单克隆抗体的基础上成功地建立了能区分Ａ、Ｃ血清型抗体的阻断ＥＬＩＳＡ诊断方法，并应用此法对９种常见病原体阳性血清及多份免疫鸡、人工感染鸡、临床可疑病鸡血清和阴性血清进行了检测，结果证明，本方法具有较好的特异性和敏感性，而且操作简便、快速，是一种适用于鸡传染性鼻炎的诊断、流行病学调查、检疫和监测的良好方法。

鸡传染性鼻炎的诊断

2012年11月-12月,北京、山东和安徽的4家养殖企业发生疑似鸡传染性鼻炎病例,经用鸡传染性鼻炎PCR方法诊断,确定北京的两家企业和安徽的一家企业所送病鸡患有传染性鼻炎。

蛋鸡传染性鼻炎病原的分离鉴定

对50例以打喷嚏、咳嗽、头部肿胀为主要特征的蛋鸡病例进行了病原分离,通过染色镜检、生化试验、凝集试验、动物回归试验确诊该病是由A型、C型等副鸡嗜血杆菌感染引起的鸡传染性鼻炎。

针刺配合天灸治疗过敏性鼻炎36例

目的:观察针刺配合天灸治疗过敏性鼻炎的临床疗效。方法:将过敏性鼻炎病人108例随机分为针刺组、天灸组、针刺配合天灸组,每组36例,连治3a后评价各组疗效。结果:3组治疗后均有明显效果(P<0.05),且针刺配合天灸组疗效明显优于针刺组(P<0.05)、天灸组(P<0.01)。结论:针刺配合天灸治疗过敏性鼻炎疗效显著,值得推广。

鸡传染性鼻炎二价油乳剂灭活疫苗的近期免疫效力检验

应用 3批鸡传染性鼻炎二价油乳剂灭活疫苗进行了安全性和近期免疫效力检验 ,安全性试验采用 15只鸡进行 ,胸肌注射疫苗 4～ 5mL/只后 ,逐日观察 ,结果鸡只食欲、精神未见异常 ,2周后观察 ,注射部位未发现明显异常和病变。用该疫苗免疫 (0 5mL/只 )后的鸡只对A型高致病力菌株的攻击保护率可达 10 0 % ,对C型高致病力菌株的攻击保护率为 93 3%。采用B

间接ELISA检测鸡传染性鼻炎抗体的研究

用副鸡嗜血杆菌Hpg_8菌株制备ELISA抗原 ,与抗鸡Ig单抗 1B7酶结合物建立了检测鸡血清抗体水平的间接ELISA方法。交叉试验、阻断试验、重复性试验等表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高。确立了检测ELISA效价 (ET)的回归方程y =1 4 2 1+ 0 2 99x) (P >0 0 5 ) ,可用于定量测定。间接凝集试验与间接ELISA方法的比较试验表明 ,ELISA法比间接凝集试验敏感性高 3倍以上。

Dot_ELISA检测副鸡嗜血杆菌血清抗体的研究

本研究建立了检测副鸡嗜血杆菌特异性抗体的Dot_ELISA方法,结果证明,本方法不与8 种常见病原体产生交叉反应,对人工感染和临床病鸡的检出率为80% ,抗原预点膜在4℃可保存5 周以上,采用抗原预点膜进行检测可使整个过程在90分钟内完成,因此本方法是一种具有较高敏感性和特异性。

五种市售鸡传染性鼻炎灭活疫苗免疫效力比较

本研究对国内市场上几个主要鸡传染性鼻炎灭活疫苗生产厂家生产的灭活疫苗免疫鸡只进行血清HI抗体水平测定和攻毒,比较不同公司所产疫苗效力的效力差异,并评估A、C型二价灭活疫苗两次免疫鸡群对国内B型分离株:DL-1株和最近从免疫失败鸡场分离到的SD-1株的交叉保护作用,分析免疫失败的原因。结果表明:A、D、E公司的疫苗免疫两次后,A型HI抗体阳性率分别为92.5%、100%和95%,滴度分别为33.9、55.1和59.9,攻毒保护率都是100%。C型HI抗体阳性率分别为72.5%3、8.5%和77.5%,滴度分别为11.4、2.7和27,攻毒保护率分别为80%、70%和80%。而B和C公司的疫苗免疫两次后A型HI抗体阳性率分别为59.4%7、7.1%,抗体滴度分别为5.4和21.8,攻毒保护率分别为50%和66.7%;C型HI抗体阳性率分别为54.1%和51.4%,抗体滴度分别为6.1和6.8,攻毒保护率分别为38.3%和50%。在五个疫苗产品中,以A、D、E的保护效力较好,B、C产品效力较差。另外,A、C型二价灭活疫苗免疫后不能对B型菌的攻击提供保护,其A、C型HI抗体阳性率、抗体滴度与对B型菌攻毒保护率无相关性。

鸡传染性鼻炎(三价)和新城疫二联灭活疫苗的研究

利用Page A型、B型、C型副鸡禽杆菌和新城疫病毒La Sota株,研制鸡传染性鼻炎（三价）和新城疫二联油乳剂灭活疫苗。用3个批次疫苗进行单剂量（0.5mL/次）3次接种和大剂量（2.0mL）单次接种的安全性试验、SPF鸡的免疫效力试验、商品鸡的免疫持续期试验和疫苗的保存期试验。结果表明,3批疫苗对试验鸡安全无副作用;免疫接种SPF鸡只30d后对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥80%,用20μL/只疫苗免疫接种SPF鸡21d后新城疫的平均HI抗体〉24;商品鸡42日龄首免,110日龄二免,二免后9个月对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥70%,对新城疫病毒强毒100%保护;用4℃-8℃保存12个月和15个月的3批疫苗进行了SPF鸡的近期免疫效力试验,结果对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥70%,用20μL/只疫苗免疫SPF鸡,免疫接种后21d新城疫病毒的平均HI抗体〉2^4,对新城疫病毒强毒的攻毒保护率〉70%。说明研制的疫苗安全有效。