An Investigation of Crocidolite Contamination and Mesothelioma in a Rural Area of China^1

Crocidolite was found to be ubiquitous in a county in southwestern China. It had been widely used in the making of road pavement, stoves, wall paint, etc. The environmental levels of the asbestos fibers were determined. Of the 2175 local residents examined. 16 had asbestosis and 232 had pleural plaques. These clinical manifestations were noted mainly in patients over 50 years of age. (c)1990 Academic Press. Inc.

云南省大姚县青石棉污染区恶性胸膜间皮瘤与致瘤性猿猴病毒SV40的关联研究

背景我国云南省楚雄彝族自治州大姚县5%地表散布蓝色青石棉,是恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)的高发区。致瘤性猿猴病毒SV40(simian virus 40,SV40)是一种小型环状双链DNA多瘤病毒,可使人和动物多种组织类型的正常细胞发生恶性转化并促进肿瘤生长。早年的流行病学调查显示,大姚县青石棉污染区恶性间皮瘤发病率高出一般人群几十倍,该地区MPM的发生是否与致瘤性SV40相关尚未见报道。目的本研究旨在探讨致瘤性猿猴病毒SV40是否与云南省大姚县青石棉污染区MPM的发生相关。方法收集大理大学第四附属医院(楚雄彝族自治州第一人民医院)和大姚县人民医院胸外科2014年1月-2019年12月诊治的51例(其中40例有石棉暴露史)MPM患者的肿瘤组织和12例非MPM患者的胸膜组织(包括肺大疱、肺结核等疾病)。同时,体外培养人正常胸膜间皮细胞LP9、Met5A(SV40转化的间皮细胞)和MPM细胞系NCI-H28(上皮型)、NCI-H2052(肉瘤型)、NCI-H2452(双相混合型)。提取各组细胞和组织基因组DNA后,用3组低污染风险引物(SVINT、SVfor2和SVTA1)对SV40大T抗原(TAg)的基因片段分别进行聚合酶链式反应(PCR)扩增检测,用两种SV40 TAg相关抗体(PAb101和PAb416)分别进行Western blotting和免疫组织化学染色,检测MPM肿瘤组织和MPM细胞系中是否存在SV40 TAg蛋白表达。结果PCR、Western blotting和免疫组化染色结果均显示Met5A细胞系中SV40为阳性,含有SV40 TAg基因和蛋白质。而各种MPM细胞系NCI-H28、NCI-H2052和NCI-H2452中SV40均为阴性。在12例非MPM组织和51例MPM组织中,3组低污染风险引物的PCR反应均为阴性。在12例非MPM组织和51例MPM组织中,两种抗体的免疫组化染色均未检测出SV40 TAg。结论云南省青石棉污染区MPM的发生与SV40病毒感染的关系可能不密切,青石棉暴露可能才是导致MPM发生的主要原因。

环境接触青石棉肿瘤发生危险的15年随访调查

目的 探讨环境接触青石棉队列人群患肿瘤的危险。方法 采用回顾队列调查方法对大姚县 6 2 5 4人进行 15年 (1987～ 2 0 0 1)的追踪研究 ,调查石棉相关肿瘤的死亡率及相对危险度 (RR)。结果 观察组中有 186例死于癌症 ,死亡率为 2 16 0 .5 /10 6 人年 (RR=1.2 93;95 % CI:1.0 32～ 1.6 18)。其中 2 0例间皮瘤 ,死亡率为 2 32 .3/10 6 人年 (RR=17.92 9;95 % CI:2 .4 0 6～ 133.5 92 ) ,男女分别为 2 6 7.5 /10 6 人年和 186 .7/10 6 人年 ;5 6例死于肺癌 ,死亡率(6 5 0 .5 /10 6人年 )的增加与对照组比较差异无统计学意义 (RR=1.4 34;95 % CI:0 .96 8～ 2 .4 86 ) ;胃肠道肿瘤的死亡率在两组中差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ,但在观察组男性中患肠癌的危险显著增加 (RR=3.781;95 % CI:1.0 77～13.2 70 )。结论 环境接触青石棉后人群患间皮瘤的危险明显增加 。

标准石英粉尘及青石棉直接诱导8-羟基脱氧鸟苷加合物形成的研究

应用液相色谱结合电化学检测技术 ,研究了标准石英粉尘和青石棉体外诱导DNA分子氧化损伤产生加合物 8 羟基脱氧鸟苷的形成与机制 .结果表明 ,石英粉尘和青石棉均可致DNA分子氧化损伤并形成 8 羟基脱氧鸟苷 ,但青石棉作用强于石英粉尘 ;石英粉尘和青石棉对H2 O2 氧化DNA的催化能力有较大差异 .标准石英粉尘和青石棉 ,具有直接的遗传毒性 ;两者诱导DNA分子形成强致突变的 8

青石棉诱发BALB／c－3T3细胞恶性转化

用国产青石棉染毒ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞７２ｈ后继续培养５ｗｋ，观察其恶性转化．试验结果表明，从１．０μｇ·ｃｍ－２剂量组开始转化率比阴性对照组增高（Ｐ＜０．０５），且有剂量反应关系．将各剂量组转化灶的细胞分别作软琼脂生长试验，结果均有细胞增殖成克隆；将２０μｇ·ｃｍ－２剂量组－转化灶的细胞分别接种至裸鼠皮下，ｗｋ４即形成接种部位包块，所有包块经病理组织学检查证实为纤维肉瘤．本研究首次证明青石棉可诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞恶性转化．

SOD对青石棉诱导BEAS-2B细胞产生过氧化物歧化酶的作用

目的:探讨SOD对青石棉诱导BEAS-2B细胞产生过氧化物歧化酶(ROS)的抑制作用。方法:采用台盼蓝吞噬实验和乳酸脱氢酶同工酶(LDH)试剂盒分别测定0mg/L、100mg/L、250mg/L、500mg/L青石棉作用后BE-AS-2B细胞成活率和培养上清LDH水平。分别采用双氢溴乙啶(DHE)和双氯荧光素双醋酸盐(DCF)荧光探针测定青石棉刺激BEAS-2B细胞后ROS的产生情况,同时使用200USOD与青石棉共孵育观察其对ROS产生的抑制作用。结果:100mg/L以下剂量的青石棉与BEAS-2B细胞共培养24h后细胞成活率为97%,未显示明显毒性;DHE荧光染色显示青石棉可诱导BEAS-2B细胞产生ROS,细胞呈深红染色,使用SOD后可抑制ROS产生,细胞染色减弱;且不同剂量青石棉作用BEAS-2B细胞不同时间后DCF染色差异无统计学意义(P>0.05)。结论:青石棉可诱导BEAS-2B细胞产生ROS,且该作用可被SOD抑制。

青石棉体外诱发细胞微核与多核

采用国产青石棉对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞和Ｖ７９细胞染毒，发现该２种细胞均可被青石棉诱发微核与多核．并且观察到含青石棉细胞的微核细胞率和多核细胞率均显著高于不含青石棉的细胞，而后者又比阴性对照显著增高．这提示青石棉进入细胞是其发挥遗传毒性作用的重要条件，但并非必需条件．与青石棉样品比较（２２％），这２种细胞内所含青石棉长纤维（＞１０μｍ）比例增大（６０％－６６％），提示细胞对青石棉的吞噬或保留作用具有一定长度选择性．

大鼠体内青石棉纤维表面变化的红外光谱研究

肌体蛋白质在与青石棉的相互作用过程中,组织结构对称性降低,结构疏松;青石棉的硅已与蛋白质中的烷基、胺基交联成键,存在明显的Si—O—C(N),Si—R新的吸收谱带;青石棉残留的粉尘仅为以硅为主的物质。石棉小体(斑)内的纤维表面基团和组织内的某些蛋白反应形成新的表面介体。染尘肌体组织在加热过程中,蛋白质类结构对称性降低并逐渐氧化,末端基团如—CH_3,—CH_2振动减弱。C—C长链骨架的分解,并可分成200,400和600℃三个相变温区。Si—O,Si—O-Si吸收加强,新生成的表面介体的稳定性(Si—O—C,Si—C,Si—CH_3)基团介于二者之间。在500℃以上,肌体组织、表面介体和体内残留纤维已全部破坏。体内青石棉被生物作用溶解和生化反应结合后,其热稳定温度大为降低。

青石棉诱发大鼠胸膜间皮瘤的实验研究

为探讨国产４种青石棉致大鼠胸膜间皮瘤的潜能，右侧胸膜腔注入青石棉４０ｍ ｇ 诱发大鼠胸膜间皮瘤。结果显示： 各组间皮瘤诱发率在５６．０％ ～６８．８％ （盐源组最高），第１例间皮瘤的存活时间在２３７～３７４天（盐源组最短），间皮瘤鼠的平均存活时间分别为５６０天，４９０天，５９３天，４９８天（盐源组最短）。青石棉诱发的间皮瘤组织学类型以纤维型为主。间皮瘤的分化程度以中、低分化为主。结果表明，胸膜腔注入石棉后均可诱发出胸膜间皮瘤。生理盐水组没有间皮瘤发生。该实验各石棉组中盐源青石棉致间皮瘤的潜能较强。

大姚县青石棉天然暴露区主要恶性肿瘤死亡及其危险因素调查

目的:探讨云南省大姚县低剂量青石棉相关暴露与当地恶性肿瘤死亡的关联,为制定当地恶性肿瘤的防治策略提供依据。方法:对大姚县部分青石棉污染区的农村居民进行27年回顾性队列(1984年2月至2011年4日)研究。结果:观察队列共1 249人,随访总人年数为28 848.27人年,其中443人死亡,占全部随访对象的35.47%。队列中有121人死于恶性肿瘤,总死亡率为1 535.64/10万人年。居恶性肿瘤死因顺位首位的是肝癌,共29例,粗死亡率为100.53/10万人年(标化死亡率为51.22/10万人年);居第2位的是肺部恶性肿瘤(不含胸膜间皮瘤),共27例,粗死亡率为93.59/10万人年(标化死亡率为41.05/10万人年);居第3位的是胸膜间皮瘤,共26例,粗死亡率为90.13/10万人年(标化死亡率为54.36/10万人年)。肠癌与胃癌死亡率分别为45.06/10万人年(标化死亡率为23.68/10万人年)和41.60/10万人年(标化死亡率为18.27/10万人年)。多因素分析显示,当地主要青石棉暴露因素(生产石棉炉、使用石棉炉数量、石棉修路和居住时间)均与恶性肿瘤死亡相关。而且男性的相对危险度高于女性。结论:消化道恶性肿瘤已成为严重危害大姚县居民健康的首位癌种,以肝癌、肠癌及胃癌为主,青石棉相关暴露是当地恶性肿瘤高发的主要危险因素。

动物体内青石棉纤维变化特征的显微研究

石棉纤维粉尘注入动物体内后 ,一部分形成石棉小体或石棉斑 ,一部分仍为裸露纤维。石棉小体内的纤维表面基团和组织内的某些蛋白反应可形成新的表面介体。粉尘在动物体内引起的动物病变主要是纤维化组织包裹和间皮瘤 ,机体以吞噬、包裹、缠绕 ,或以生化溶解方式排解粉尘。纤维自身则出现变短、尖部圆化、折断、分叉现象 ,也可以出现溶解、迁移、表面化学反应等。肺泡内纤维的碳酸盐化现象是体内纤维溶解和反应的新方式。动物体内间皮瘤可生长在注入部位也可在非注入部位 ,某种毒性衍生物质的生成和迁移是引起病变的主要原因。体内纤维粉尘的溶解是一个非常缓慢的过程 ,细小粉尘易于溶解和迁移。体内粉尘的膜阻滞现象在腹膜、胸膜上较为常见 ,在膜部位不易生成间皮瘤 ,肿瘤多引发在膜的内侧。但膜可以弱纤维化包裹。

青石棉处理的肺泡巨噬细胞上清液对人胚肺成纤维细胞的作用

为了探讨青石棉对肺损伤的机理 ,用兔肺泡巨噬细胞(AM)和人胚肺成纤维细胞 (HEPF)组成体外模型 ,采用MTT颜色反映法测定青石棉处理兔AM 2 4h后的培养上清液刺激HEPF细胞增殖情况 ,同时用标准石英作为阳性对照 ,二氧化钛作为阴性对照 ,以不用粉尘处理的AM培养上清液作为正常对照。结果发现青石棉能明显刺激HEPF增殖 ,呈剂量 效应关系 (P <0 0 1)。青石棉浓度在 10 0 μg/ml时 ,青石棉组HEPF的净增殖率达 6 0 91% ,是正常对照组的 3 48倍 ,高于阳性对照和阴性对照 10 0 μg/ml青石棉处理兔AM的培养上清液的不同稀释度对HEPF增殖的影响不同 ,随稀释度的加大 ,其促细胞增殖的能力越弱 ,以 1∶2稀释度作用最强 ,明显高于阳性对照和阴性对照 (P <0 0 1)。提示青石棉处理肺泡巨噬细胞的培养上清液中存在有促进肺成纤维细胞增殖的生物活性物质 。

青石棉诱导A549细胞ERK1/2及Elk1激活的研究

目的 研究细胞外信号调节蛋白在青石棉致肺部疾病的作用。方法 用Western免疫印迹、免疫沉淀等对石棉刺激A5 4 9细胞后细胞外信号调节蛋白及其下游Elk1蛋白磷酸化等进行了研究。结果 石棉刺激细胞后 ,磷酸化ERK1 2、Elk1等高表达 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论 ERK1 2。

环境低浓度石棉暴露与肺癌危险性的巢式病例对照研究

目的 探讨云南省大姚县环境低浓度青石棉暴露与肺癌之间的关联以及肺癌高发的主要危险因素,为当地的肺癌防制提供依据。方法 采用巢式病例对照研究方法,从队列中获得5 3例肺癌病例,按1∶3的比例分别匹配以性别相同、年龄相当的对照。结果 单因素条件logistic回归分析发现石棉环境污染、吸烟、饮酒、喝茶与肺癌有统计学关联,石棉环境污染的各种形式中,只有使用石棉炉对肺癌发生有显著性意义。用多因素条件logistic回归进一步分析,使用石棉炉和吸烟与肺癌有统计学关联,OR值分别是3.38(95 % CI1.4 3～7.95 )和2 .6 2 (95 % CI1.0 8～6 .5 6 ) ,其他各因素对肺癌的影响未发现有显著性意义。对吸烟与使用石棉炉的交互作用进行相乘模型的拟合,未发现两因素存在相乘模型的交互作用(P =0 .310 )。相加模型交互作用分析结果显示,吸烟和使用石棉炉对肺癌发病的影响可能存在着相加模型的交互作用。结论 吸烟和使用石棉炉是当地肺癌高发的主要危险因素。

青石棉诱发大鼠胸膜间皮瘤

本文采用右胸腔内注入染尘法，对大鼠染青石棉尘４０ｍｇ。收集１９例胸膜间皮瘤标本，提取标本中ＤＮＡ，用人工合成的寡核苷酸引物行ＰＣＲ体外扩增，再用ｒ－（３２）ＰＡＴＰ标记正常和两种空变Ｋｉ－ｒａｓ１２位探针，杂交，放射自显影。结果表明，７例正常对照组标本Ｋｉ－ｒａｓ１２位点突变为阴性；１９例间皮瘤标本中，２例突变阳性，其中１例由ＧＧＴ（Ｇｌｙ）突变为ＡＧＴ（Ｓｅｒ），１例由ＧＧＴ（Ｇｌｙ）突变为ＴＧＴ（Ｃｙｓ）。

青石棉污染区恶性肿瘤死亡率10年回顾队列研究

为了探讨环境低浓度石棉接触对居民恶性肿瘤尤其是肺癌和间皮瘤发生的关系，对大姚县部分青石棉污染区３０ 岁以上的农村居民进行了１０ 年回顾性队列调查（１９８７ 年１ 月１ 日１９９６ 年１２ 月３１ 日）。队列人数为３ ３６３ 人，其中男１ ５０３ 人，女１ ８６０ 人。对照选用无青石棉污染的该县龙街乡农民和远离该县２３０ 多公里的禄丰县金山镇农村居民共７ ６３９ 人（男３ ５５０ ，女４ ０８９），观察期９ 年（１９８７ 年１ 月１ 日１９９５ 年１２ 月３１ 日） 。结果发现观察组全肿瘤死亡率为１２５－６４／１０ 万人年，肺癌死亡率为２５－１３／１０ 万人年，相对危险度（ ＲＲ） 分别为１－４０、３－２６ ，差异有显著性（Ｐ＜ ０－０５） 。值得注意的是观察组中有８ 例死于间皮瘤（男５，女３），平均死亡年龄６３ 岁，死亡率为２５－１３／１０ 万人年，ＲＲ＞ １６－３２，差异有极显著性（ Ｐ＜ ０－０１）。提示非职业环境接触青石棉可能会引起恶性肿瘤，尤其是肺癌。

蛋白激酶在青石棉处理的肺泡巨噬细胞培养上清液致肺成纤维细胞增殖中的作用

为探讨蛋白激酶在青石棉诱导的肺成纤维细胞增殖中的作用 ,本研究采用体外细胞培养技术 ,用兔肺泡巨噬细胞 (AM)和人胚肺成纤维细胞 (HEPF)组成体外模型 ,用 MTT法测定 HEPF的增殖活力 ,检测了蛋白激酶 (PKA、PKC和 TPK)的抑制剂和激活剂对青石棉诱导的 HEPF增殖的影响 ,以二氧化钛为阴性对照 ,标准石英为阳性对照。结果发现 ,PKA、PKC和 TPK的抑制剂和激活剂均能使青石棉诱导的 HEPF增殖受到抑制和激活 ,并随剂量的变化而变化 ,呈显著的剂量 -效应关系 (P<0 .0 1) ,且青石棉组被抑制和激活的程度强于各对照组。从 3种蛋白激酶的作用强度分析 ,发现 TPK信号通路在青石棉诱导的 HEPF增殖中的作用最强 ,其次是 PKC信号通路 ,PKA信号通路的作用最弱。提示 PKA、PKC和 TPK信号通路均参与了青石棉处理 AM上清液致 HEPF增殖过程 ,TPK信号通路可能起着主导作用 ,这为寻找石棉致纤维化因子的研究方向提供了参考。

青石棉纤维的体内变化显微特征研究

目的 观察和研究天然青石棉矿物粉尘在动物体内病理变化 ,纤维自身变化、残留特性及表面新生成物质形貌特征。方法 大鼠体内染尘后 ,用高倍显微镜、电子显微镜观察其在动物体内的变化 ,并统计对比纤维变化特征。结果 动物体内机体以吞噬、包裹、缠绕 ,或以生化溶解方式排解粉尘 ,纤维自身则出现变短、尖部圆化、折断、分叉现象 ,也可以出现溶解、迁移、表面化学反应等。在肺泡内的纤维有碳酸盐化的现象。动物体内间皮瘤可生长在注入部位也可在非注入部位。结论 体内纤维粉尘的溶解是一个非常缓慢的过程 ,细小粉尘易于溶解和迁移。纤维在肺内碳酸盐化是体内纤维溶解和反应的新方式。体内粉尘的膜阻滞现象在腹膜、胸膜上较为常见 ,在膜部位不易生成间皮瘤 ,肿瘤多引发在膜的内侧。但膜可以弱纤维化包裹。

大姚县农村疾病死亡回顾性队列研究

本文采用回顾性队列研究的方法，调查了云南省大姚县青石棉污染区农民疾病死亡率。结果显示：农村中肺心病的死亡率仍占第一位。观察组恶性肿瘤死亡的危险性高于对照组（ＲＲ＾＝１．８３，Ｐ＜０．０５）。在不同部位的肿瘤中，以肺癌占首位，年死亡率为８０．１２／１０万（ＲＲ＾＝５．５３，Ｐ＜０．０５）；间皮瘤死亡率为３６．４６／１０万，对照组中无一例死于间皮瘤。提示非职业性环境接触青石棉可导致石棉相关肿瘤肺癌和间皮瘤的死亡率增高。

青石棉诱导A549细胞表达IL-8的研究

目的 研究青石棉纤维作用于A5 4 9细胞后IL 8蛋白和基因表达水平及酪氨酸激酶抑制剂PD980 5 9对IL 8表达的影响。方法 用定量RT PCR法测定青石棉诱导A5 4 9细胞后的IL 8mRNA水平 ;用免疫反应法测定A5 4 9细胞培养上清中IL 8蛋白水平。结果 不同浓度青石棉刺激A5 4 9细胞后 ,培养上清中IL- 8释放量明显增加 ,细胞中A5 4 9IL- 8mRNA表达显著上升 ,使用酪氨酸激酶抑制剂PD980 5 9可明显抑制IL- 8的蛋白及mRNA表达水平。结论 青石棉可诱导IL- 8的高表达 ,而这种表达可为PD980 5 9所抑制 ,提示IL -8的表达源于胞浆中MAPKs信号通路。