“DNA粗提取和鉴定”实验设计与改进

对DNA粗提取与鉴定实验进行优化,探究植物组织的多种破碎方法对DNA粗提取的影响,并用氯仿等有机物对DNA粗提取物进一步纯化,分析DNA未纯化与纯化后的纯度差异。结果显示,相较于破壁机破碎、加液氮研钵研磨以及玻璃匀浆器研磨,不添加液氮用研钵研磨效果更好。DNA粗提液经纯化后纯度显著提高,蛋白质及盐类等污染明显减少。

一种土壤微生物总DNA的高效提取方法

获得高浓度、大片段、多样性程度高的土壤微生物总DNA 是研究土壤微生物群落结构的分子生态学基础。本文采用间接法(菌体细胞回收法)提取红壤地区两种土壤类型的土壤微生物总DNA,定量计算其回收率,并与直接法(细胞原位裂解法)比较了提取效率和纯度。结果表明:红壤地区2种土壤每克干土的总DNA提取量,间接法约为0.34和0.53礸/g干土,直接法约为13.62和24.32礸/g干土;间接法的提取效率低于直接法,但所得DNA片段较大,且Sau 3AⅠ 酶切和16 S rDNA通用引物PCR扩增结果显示,间接法比直接法更能有效地去除土壤中的某些抑制剂,所得总DNA的纯度更高,有利于后续操作。

几种植物化学物粗提物体外抗DNA氧化损伤功能的检测

近年来，植物化学物功能开发备受关注，其粗提物有效生理功能快速筛选方法成为制约保健食品开发速度的一个重要因素。以CuSO4-Phen—Vc—H2O2-DNA化学发光体系为基本检测手段，调整检测条件，分别对竹叶提取物、黑加仑提取物、葡萄籽提取物进行了体外抗DNA氧化损伤功能的筛选。结果提示葡萄籽提取物具有良好的抗DNA氧化损伤功能，在5～25mg／L呈现剂量效应关系（r=0．97，P〈0．01）。竹叶提取物在400mg／L表现为一定的抗DNA氧化损伤功能，但其仅表现为延缓自由基的生成，并不能阻止DNA的氧化损伤，而黑加仑提取物则表现为促进DNA氧化损伤。由此可见CuSO4-Phen—Vc—H2O2-DNA化学发光体系可以作为植物化学物，甚至粗提物抗DNA氧化损伤功能检测的一个快速、经济、有效的方法。葡萄籽提取物可作为良好的保健食品资源，竹叶提取物则需慎重，黑加仑提取物不能作为保健食品资源直接利用。

氨基化二氧化硅颗粒应用于大豆油DNA提取研究

建立了以氨基化二氧化硅为载体提取大豆油DNA并进行转基因成分检测的方法。结果表明:利用氨基化二氧化硅法富集提取大豆毛油中的DNA质量浓度高于国标法;以氨基化二氧化硅法提取的大豆毛油DNA为模板成功扩增出了大豆内源基因、外源基因片段和转基因调控元件,而精炼油DNA未扩增出。氨基化二氧化硅法只适用于大豆毛油DNA的提取,而不适用于精炼油。

几种DNA粗提取与鉴定的最佳试验材料

[目的]对DNA粗提取与鉴定试验的材料和试验条件进行探索,为该试验在中学生物教学中得到普及推广提供帮助。[方法]以鲜茼蒿叶、鲜芍药叶、鲜芹菜叶、鲜枣树叶、干枣树叶、鲜龙爪槐叶、鲜月季叶等多种常见植物叶片为材料,进行DNA的粗提取与鉴定试验。[结果]在所选择的试验材料中,以鲜龙爪槐叶、鲜月季叶效果最佳;鲜芹菜叶、鲜枣树叶、干枣树叶次之;鲜茼蒿叶、鲜芍药叶亦可以。[结论]该研究提供了几种DNA粗提取与鉴定的最佳试验材料,为该试验简便高效的进行提供了帮助。

油茶果皮多酚粗提物对DNA氧化损伤的影响

探究油茶果皮多酚粗提物对DNA氧化损伤的保护作用。采用单细胞凝胶电泳技术（SCGE）和琼脂糖凝胶电泳技术（AGE），分别研究不同浓度的油茶果皮多酚粗提物对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）DNA损伤的保护作用，以及对APPH损伤质粒pGL6DNA的保护作用。经SCGE分析显示：H202诱导细胞DNA严重损伤，在经50～1000mg／L药物作用后，阴性对照组的细胞拖尾率和彗星尾长与阳性对照组相比均有显著的下降（P〈0．01或P〈0．05）；而经1500mg／L的药物预处理后，细胞拖尾率和彗星尾长与阳性对照组相比无显著性差异（P〉0．05）；经AGE分析，油茶果皮多酚粗提物对APPH介导的DNA链断裂有显著的保护作用。油茶果皮多酚粗提物能有效地清除羟自由基，从而起到保护DNA的作用。

DNA的粗提取与鉴定实验方案的改进与探讨

DNA的粗提取与鉴定是高二生物课程中一个重要的实验,从鸡血中提取DNA,材料难得,操作比较复杂,实验的成功率较低。文章针对导致实验失败的原因进行了探讨,改进操作步骤,解决了实验中存在的问题,最后获得了理想的实验效果。

枣疯病植原体的快速检测

以表现丛枝症状的‘金丝4号’枣树为试材,以叶片总DNA粗提物为模板通过PCR扩增技术克隆16SrDNA基因,建立了枣疯病植原体快速检测方法。序列分析结果显示,枣疯病植原体‘金丝4号’株系(JWB-Jinsi4,TA)与JWB-G1(AB052876)同源性为99.7%,归属于16SrⅤ-B组。实验结果表明,以DNA粗提物为模板的PCR扩增技术,可快速有效地检测枣疯病植原体,为生产实践中枣疯病的诊断和防治提供技术支持。

基于PCR-DGGE技术的渤海湾滩涂原油降解菌群分析

采集天津渤海湾滩涂沉积物,以原油为唯一碳源富集原油降解菌群.采用三种不同细菌DNA提取试剂盒提取原油降解菌总DNA,结果显示New Probe细菌基因组DNA小量提取试剂盒提取出的细菌总DNA质量和纯度最理想.通过对PCR体系中引物量、模板量和PCR程序中退火温度、循环数的优化,确定优化的PCR条件为:25μL Master、3μL DNA模板、1μL Primer-1、1μL Primer-2、20μLdd H_2O.扩增程序为:94℃预变性4 min;94℃变性1 min、55℃退火1 min、72℃延伸1 min,25个循环;72℃延伸6 min.原油降解菌的DGGE指纹图谱分析表明原油降解菌群的群落结构相对稳定,没有出现明显的减弱趋势.