大肠埃希菌表达苏云金杆菌cryIVD基因杀蚊幼活性观察

目的 :观察表达B .t.icryIVD基因的大肠埃希菌对蚊幼虫的毒效。 方法 :细菌的诱导表达及蚊虫毒效测试。结果 :加入工程菌 48h对淡色库蚊和白纹伊蚊均具有明显的杀灭作用 ,LC50 分别为 2 .3 8× 10 6 、1.6× 10 7个 ml细胞 ,其中对淡色库蚊的杀灭作用要好于对白纹伊蚊幼虫的杀灭效果。结论 :单独表达B .t .

苏云金杆菌以色列亚种晶体蛋白CryIVD基因的克隆及表达产物的效果测定

目的 克隆、表达苏云金杆菌以色列亚种晶体蛋白CryIVD基因并测定其杀蚊毒效。 方法 采用PCR技术 ,扩增得到CryIVD基因片段 ;通过双酶切及连接反应 ,将该基因克隆入大肠杆菌质粒 pUC18构建重组克隆及表达载体 ;转化E .coliDH5α,提取重组质粒进行酶切鉴定及DNA序列测定 ;以IPTG诱导表达CryIVD蛋白 ,SDS PAGE分析表达产物并进行杀蚊毒效测定。 结果 CryIVD基因成功克隆并在宿主菌中正确表达 ,表达产物对蚊幼的杀灭毒效测定显示其对淡色库蚊Ⅱ～Ⅲ龄健康幼虫的LC50 为 2 .3 8× 10 6 cells ml,对白纹伊蚊健康幼虫的LC50 为 1.6× 10 7cells ml。 结论 CryIVD基因被成功克隆和表达 ,且其表达产物有明显杀蚊幼活性。

苏云金杆菌cryIVD基因的表达及杀蚊毒效测定

目的 研究苏云金杆菌(B.t.i)cryIVD基因用于蚊虫生物防治。 方法 经IPTG诱导,重组质粒在大肠埃希菌DH5α中进行表达,并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫印迹(Western-blot)分析,观察其杀蚊毒效。 结果 经SDS-PAGE及Western-blot分析显示,特异蛋白带的分子质量单位为72 ku,并且该蛋白对蚊虫具有杀灭作用。 结论 在大肠埃希菌中B.t.i cryIVD基因单独表达,并具有杀蚊活性。

苏云金杆菌CryIVD转基因工程藻不同贮存时间对淡色库蚊不同龄期幼虫的杀灭效果

目的观察苏云金杆菌CryIVD转基因贮存藻对不同龄期淡色库蚊幼虫的杀灭效果。方法大量培养工程藻,干燥后保存,应用不同时间的贮存藻作用于不同龄期淡色库蚊幼虫。结果干燥贮存的工程藻数年后仍有较高的杀蚊毒效,尽管杀蚊毒效较新鲜工程藻有所下降,但在105个/ml数量级不同龄期的幼虫仍有50%以上死亡。对不同龄期淡色库蚊幼虫杀灭效果比较表明,1~3年贮存藻3组比较,在106个/ml数量级浓度的蚊幼虫死亡率差异无统计学意义（F=9.32,P〉0.01）,而贮存1年组和3年组在105个/ml数量级浓度及以下,死亡率差异有统计学意义（F=101.21,P〈0.01）。结论转基因蓝藻在干燥贮存情况下仍能保持毒蛋白的稳定遗传和杀幼虫作用,为今后的现场应用提供更方便的选择。

苏云金杆菌cry IVD基因的克隆及序列分析

目的 克隆苏云金杆菌 ( B.t.i) cry IVD基因并测定其序列。 方法 根据 B.t.i cry IVD已知序列 ,设计合成 1对引物 ,应用 PCR技术扩增 cry IVD基因 ,克隆入 p UC18载体 ,阳性克隆的重组质粒经酶切、电泳鉴定后进行序列测定。 结果 PCR扩增得到特异的 2 .0 kb基因片段。重组质粒经酶切后得到预期大小的基因片段。序列分析证明目的基因被完整且正向克隆。 结论 B.t.i cry IVD基因被成功克隆。

转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻实验室杀蚊幼毒效的观察

目的观察转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻实验室对淡色库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊不同龄期幼虫杀灭效果。方法利用不同浓度的工程藻,分别作用于淡色库蚊、白纹伊蚊、中华按蚊敏感品系III龄幼虫,以及它们不同龄期的幼虫,并设计阴性及空白对照,分别于24H、48H计数死亡率,从而分析基因蓝藻的杀蚊幼毒效。结果工程藻对三种蚊种III龄幼虫均具有杀灭作用,对淡色库蚊、白纹伊蚊幼虫杀灭效果较高,对中华按蚊幼虫效果较差。48H对以上三种蚊虫III龄幼虫的杀灭率分别为100%、100%和42%;工程藻对低龄幼虫的杀灭效果高于高龄幼虫,即龄期越低对工程藻的敏感性越高,杀蚊毒效与龄期呈负相关。结论转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻具有明显杀蚊幼效果,为今后蚊虫防治提供了新的方法。

转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻现场防治蚊虫的研究

目的观察转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻现场杀灭蚊幼虫的效果。方法大量培养转基因工程藻,显微镜下计数,在济宁市郊区选择不同孳生地进行现场应用,评价杀蚊幼效果。结果工程藻浓度≥106cells/ml时,在无污染的水体中2d杀死99%以上的蚊幼虫,在轻度污染的水体中3d杀死99%以上的蚊幼虫。连续观察3个月工程藻仍有杀灭蚊幼虫的效果,实验组蚊幼虫密度最多16条/勺,对照组平均为80条/勺。结论工程藻在水质较好或轻度污染的水体中均有较强的杀蚊幼作用,且持续时间长,有望用于蚊虫防治。