山羊clock和cry1基因的克隆及其在大脑和垂体中表达差异的研究

本研究旨在探讨生物钟基因clock和cry1在山羊出生后不同时期的大脑和垂体中的表达差异。在出生后30、60、90和120d共屠宰24只南江黄羊羔羊(公母各12只),取其大脑皮质层和垂体组织样品用于抽提RNA,进行分子克隆和实时荧光定量PCR分析。结果,分离克隆得到了山羊clock基因外显子1到外显子8以及cry1基因外显子6到外显子15的CDS区序列,其长度分别为1 479bp和993bp,其中clock基因部分CDS区序列与绵羊、牛、人和小鼠的对应序列相似性分别为99%、90%、94%和92%,cry1基因部分CDS区序列与绵羊、牛、人和小鼠的对应序列相似性分别为99%、98%、94%和87%。组织表达分析结果表明,性别对clock和cry1基因的表达影响不显著(P>0.05),2个基因在垂体中的mRNA表达量极显著高于大脑中的表达量(P<0.01);在不同时期的垂体组织中,clock和cry1基因表达量均呈现先上升后下降的趋势;在不同时期的大脑组织中,clock基因的表达量趋于波动平衡,呈现上升趋势,cry1基因的相对表达量呈细微的上升趋势。结果提示:clock和cry1基因的CDS区在物种间保守性较高。clock和cry1基因在山羊大脑和垂体组织中起到重要的作用,且其mRNA发育性表达模式具有组织特异性。

苏云金芽孢杆菌cry1基因在荧光假单胞菌Pfx-18中的表达特性

用DIG标记的cry1Aa基因EcoRI-F片段的RNA探针，对筛选的鳞翅目高毒力菌株的质粒进行Southern分析，将cry基因定位在39．3MD质粒上。该质粒经HindⅢ酶解，用同样探针进行杂交，呈现6．5kb和7．1kb两条阳性带，其中7．1kb片段的杂交强度明显高于6．5kb片段。将7．1kb片段与多寄主质粒pSUP106连接，转化荧光假单胞菌Pfx－18，获得克隆子LZP-1。克隆基因用PCR鉴定，显示典型的cry1Ab谱带。经SDS-PAGE分析，克隆株表达66kD杀虫晶体蛋白和一些小分子多肽。其发酵液稀释1000倍对三龄小菜蛾幼虫的致死率为33％。

转cry1Ab基因水稻田寄生蜂亚群落结构及其优势类群数量动态的研究

从寄生蜂的优势度、数量和时间动态等方面,对含cry1Ab基因的Bt水稻对稻田寄生蜂群落的影响作了评价。寄生蜂各科的组成与优势度的分布在Bt稻田和对照间无显著差异,但数量低于对照,其中,优势类群茧蜂数量显著低于对照。从田间动态看,仅在寄生蜂发生的高峰期,Bt稻田中的主要寄生蜂才显著低于对照。因此,Bt水稻对靶标害虫主要寄生蜂尤其是茧蜂可能具一定的负面影响。

电针对自由运行状态小鼠SCN内Cry基因表达的影响

目的:研究电针对自由运行状态下小鼠视交叉上核(suprachiasmatic nucleus,SCN)内核心钟基因隐色素基因(cryptochromes gene,Cry)Cry1和Cry2表达的作用,为临床择时针灸效应规律的研究提供分子生物学依据。方法:选用昆明种小鼠,按体重随机分为空白组、捆绑组、电针组。电针组固定动物后,选"百会"和"长强"针刺,电压1-3V,疏密波,频率2/20Hz,时间15min。捆绑组只固定15min,不予其它特殊处理;空白组不予任何特殊处理。在小鼠进入自由运行(free running,FR)状态第3天于近似昼夜时间(circadian time,CT)6:00(即CT6)应用实时荧光定量RT-PCR方法观测电针对SCN内Cry1和Cry2mRNA表达情况的影响。结果:在CT6针刺,有降低Cry1基因表达的作用和下调Cry2基因表达的趋势。结论:针刺导引节律相位的作用可能与其下调SCN内Cry基因的表达、降低负反馈抑制作用有关。

转cry1 Ab基因粳稻对稻田节肢动物群落的影响

在将稻田节肢动物群落按营养关系分为植食类、寄生类、捕食类、腐食类和其他类等5个功能团的基础上,从功能团优势度、群落结构参数及群落相异性等方面,经2年3点的调查就2个转cry1Ab基因粳稻(Bt粳稻)品系KMD1和KMD2对稻田节肢动物群落结构的影响做了评价。结果表明:在大多数情况下,Bt粳稻与对照间各功能团优势度、群落结构参数[物种丰富度(S)、Shannon-Wiener多样性指数(H′)、均匀性指数(J)、优势集中性指数(C)]及其时间动态无明显差异;Bt粳稻与对照间植食类、寄生类、捕食类亚群落,及整个节肢动物群落的相似性也较高。综合分析认为,Bt粳稻对稻田节肢动物群落结构无明显的负面影响。

生物钟基因Cry1在消化道腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的:探讨生物钟基因Cry1在消化道腺癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法:采用免疫组织化学法检测生物钟基因Cry1在63例消化道腺癌组织和对应癌旁组织中的表达,分析两者之间的关系以及Cry1的表达与临床病理特征之间的关系。结果:生物钟基因Cry1在63例消化道腺癌组织和对应癌旁组织中表达强度无显著相关性(P>0.05),Cry1的高表达与肿瘤的低分化相关(P<0.05);Cry1的表达定位在细胞核和细胞质中,癌组织和癌旁组织之间的亚细胞分布差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论:生物钟基因Cry1在低分化腺癌中的表达增高以及在癌组织中的亚细胞定位发生改变,提示Cry1蛋白定位在消化道腺癌的发生发展中可能发挥作用,Cry1的表达也可能与肿瘤的恶性程度有关。

转cry1Ac+cry2Ab基因棉与转cry1Ac+EPSPS基因棉荒地的生存竞争能力

【背景】此研究为"十二五"转基因生物新品种培育国家项目中创建新的转基因棉花品种环境安全评价技术而设。【方法】以转双价双Bt抗虫基因(cry1Ac+cry2Ab)棉和转双价抗虫、抗除草剂基因(cry1Ac+EPSPS)棉为观察品种,非转基因棉赣棉11号为对照品种,在荒地用撒播和3cm深度播种2种方式,于2011年5月～2012年3月对棉花出苗率、株高、生育进程、棉吐絮瓣数、絮瓣脱落率、自生苗等生存竞争能力进行比较,检测、评价其杂草化的风险,并探讨、验证检测技术的可行性。【结果】在荒地条件下,以2种方式播种的转cry1Ac+cry2Ab基因棉和转cry1Ac+EPSPS基因棉与非转基因棉相比,上述各项指标的竞争能力总体上未表现显著优势。【结论与意义】转cry1Ac+cry2Ab基因棉和转cry1Ac+EPSPS基因棉在荒地条件下生长无杂草化风险。同时,研究证明,在荒地自然生态条件下,可以采用撒播和3cm深度播种方法检测新的转基因棉花品种在生存竞争能力上的杂草化风险,在测评上有互为参照效应,为定性评价新的转基因棉花品种的杂草化风险提供了保障。

转基因高粱Cry1Ab蛋白含量的比较研究

通过农杆菌介导法将杀虫晶体蛋白基因cry1Ab导入高粱恢复系115中,共获得13个独立的转基因株系,26株转基因植株,转化率为5.1%;GUS活性、PCR、Southern和Western杂交分析表明,此基因已整合进高粱基因组并得到正确表达。利用ELISA试剂盒测定Cry1Ab蛋白含量,结果表明,不同转基因植株的Cry1Ab蛋白含量有明显差异,最高可达0.850μg/g,占可溶性蛋白的0.016%,还有一些转基因植株中不能表达;同一转基因植株的不同组织中表达量有明显差异,其顺序为:叶>颖壳>籽粒>根>茎;不同部位的叶片也有差异,其顺序为:中部叶>基部叶>新叶。

抗虫抗除草剂转基因水稻B1C893的获得与鉴定

利用农杆菌介导法将Cry1Ca#和Bar基因转化水稻恢复系R893,获得6株再生植株。经过分子鉴定,发现Bar基因和Cry1Ca#基因成功整合到水稻基因组并稳定表达。测定其中单拷贝且可育的转基因株系苗期不同器官中Cry1Ca蛋白的表达量,发现根系中最低而叶片中最高,其中最高的第6号株系叶片中含量达到35.07μg/g。获得的转基因株系对除草剂草铵膦和稻纵卷叶螟均具有良好的抗性。