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转cry1Ac和CpTI双基因抗虫水稻对二化螟和大螟的致死效应及田间螟虫构成的影响 被引量:22
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作者 高玉林 傅强 +4 位作者 王锋 赖凤香 罗举 彭于发 张志涛 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期543-548,共6页
就转crylAc+CpTI双基因抗虫水稻不同生育期对二化螟Chilo suppressalis和大螟Sesamia inferens的室内致死特性及田间螟虫的构成进行了研究。室内测定结果表明,不同生育期转基因水稻对二化螟、大螟都表现明显的致死效应,但水稻生长后... 就转crylAc+CpTI双基因抗虫水稻不同生育期对二化螟Chilo suppressalis和大螟Sesamia inferens的室内致死特性及田间螟虫的构成进行了研究。室内测定结果表明,不同生育期转基因水稻对二化螟、大螟都表现明显的致死效应,但水稻生长后期的致死效果降低。转基因水稻对大螟的致死效应显著弱于对二化螟的,其中,二化螟除在齐穗期和成熟期有少量幼虫(0.5%~6.4%)存活到第4天外,其余均在第4天死亡;大螟在两种转基因水稻上的存活率高于二化螟,且少量个体(〈1.6%)还能化蛹、羽化,但化蛹率和羽化率均明显低于在非转基因对照上的。早、晚两季水稻的田间调查结果表明,转基因水稻上两种螟虫虫口数量均显著低于相应的非转基因对照品种,转基因水稻上二化螟虫口减退率〉99%;大螟虫口减退率相对较低,早、晚稻上有所不同,其中早稻〉93%,晚稻仅44%~64%。转基因水稻上残存螟虫中,大螟所占比例明显上升,推测转基因水稻对两种螟虫致死效应差异可能是其主要原因。 展开更多
关键词 转基因水稻 二化螟 大螟 致死效应 生态风险 crylac基因 CPTI基因
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外源基因在苏云金杆菌染色体上的定点整合及表达 被引量:10
2
作者 刘萍 夏立秋 +4 位作者 胡胜标 严礼 丁学知 张友明 喻子牛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期661-666,共6页
【目的】研究构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)工程菌的方法。在构建Bt工程菌时,高拷贝外源质粒的转入导致Bt芽孢数量减少,芽孢形成期延滞,影响Bt菌株的杀虫活力。而且,外源质粒在Bt... 【目的】研究构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)工程菌的方法。在构建Bt工程菌时,高拷贝外源质粒的转入导致Bt芽孢数量减少,芽孢形成期延滞,影响Bt菌株的杀虫活力。而且,外源质粒在Bt中的稳定性较差,外源基因容易丢失。将基因整合入染色体是一种构建遗传性状稳定、杀虫活力高的Bt工程菌的有效方法。【方法】本研究采用PCR技术,分两段扩增定位于Bt无晶体突变株XBU001染色体上的trigger factor基因片段作为同源臂,克隆入温度敏感型载体pKSV7,构建了定点整合载体pKTF12。并利用pKTF12质粒将cry1Ac基因定点整合入XBU001染色体上。【结果】利用载体pKTF12将cry1Ac定点插入triggerfactor位点,对宿主菌XBU001的正常生长没有影响。重组菌株KCTF12中的cry1Ac基因能够稳定遗传、表达并形成菱形晶体。与携带高拷贝外源质粒的Bt菌株HTX42相比较,KCTF12具有芽孢数量增多、芽孢形成期提前的优势。【结论】定点整合法是一种构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因Bt工程菌的有效方法。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 定点整合 同源重组 pKSV7 triggerfactor基因 CRY1AC基因
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基因枪法获得转cry1Ac基因甘蔗的研究 被引量:6
3
作者 高世武 郭晋隆 +2 位作者 许莉萍 陈如凯 傅华英 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期142-148,共7页
根据定向克隆原则,以pGreenⅡ0229为载体骨架,cry1Ac为目的基因,bar为筛选标记基因,构建了大小为8602bp的植物表达载体pUBCG0229-cry1Ac。酶切结果表明,构建的载体pUBCG0229-cry1Ac结构完全正确。用基因枪轰击法将pUBCG0229-cry1Ac质粒... 根据定向克隆原则,以pGreenⅡ0229为载体骨架,cry1Ac为目的基因,bar为筛选标记基因,构建了大小为8602bp的植物表达载体pUBCG0229-cry1Ac。酶切结果表明,构建的载体pUBCG0229-cry1Ac结构完全正确。用基因枪轰击法将pUBCG0229-cry1Ac质粒DNA转化甘蔗(Saccharum Complex)品种福农95-1702和桂糖94-119的胚性愈伤组织,使用PPT(phosphinothricin)对轰击后的材料进行继代、分化和生根筛选,移栽成活后使用Basta溶液喷洒进行初步筛选,共获得86株抗性植株,通过PCR检测、Dot-Southern检测及PCR产物测序,证明已将cry1Ac基因整合到其中22株甘蔗基因组中。 展开更多
关键词 甘蔗 CRY1AC基因 BAR基因 遗传转化 基因枪 抗螟虫
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苏云金芽孢杆菌晶体杀虫蛋白Cry1Ac基因在虫生真菌球孢白僵菌中的表达 被引量:1
4
作者 刘振邦 任小芳 +3 位作者 宋文婧 朱虹 黄勃 李增智 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期742-747,共6页
依据苏云金芽孢杆菌晶体杀虫蛋白Cry1Ac基因序列设计引物进行PCR扩增,纯化产物与载体pbarGPE1连接,构建真菌表达载体pBARGPE1-Cry1Ac,通过芽生孢子转化法转入野生型球孢白僵菌中,获得多拷贝转化子;毒力测定结果表明转化子对马尾松毛虫的... 依据苏云金芽孢杆菌晶体杀虫蛋白Cry1Ac基因序列设计引物进行PCR扩增,纯化产物与载体pbarGPE1连接,构建真菌表达载体pBARGPE1-Cry1Ac,通过芽生孢子转化法转入野生型球孢白僵菌中,获得多拷贝转化子;毒力测定结果表明转化子对马尾松毛虫的LC25比出发株降低5.4倍,LD25减少7.1倍,LT25缩短2.2 d,毒力明显提高;喂食处理和虫体喷雾喂食结合处理与单纯虫体喷雾处理相比,累计致死率分别提高了55.6%和63.0%,致死中时分别缩短了4.5 d和5.3 d。结果表明,苏云金芽孢杆菌晶体杀虫蛋白Cry1Ac基因的表达显著提高了球孢白僵菌的毒力。这是Cry1Ac基因首次在虫生真菌中表达。 展开更多
关键词 BT毒蛋白 CRY1AC基因 球孢白僵菌 表达
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Effect of feeding transgenic cry1Ab/cry1Ac rice on indices of immune function in broilers 被引量:2
5
作者 LIU Ran-ran ZHAO Gui-ping +7 位作者 ZHENG Mai-qing LIU Jie ZHANG Jing-jing LI Peng LI Qing-he FENG Jing-hai ZHANG Min-hong WEN Jie 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2016年第6期1355-1363,共9页
The safety of feeding transgenic crylAb/crylAc rice (a genetically modified (GM) rice variety) to broilers was examined from an immunological perspective. HatchlingArborAcres chickens (240) were assigned to two ... The safety of feeding transgenic crylAb/crylAc rice (a genetically modified (GM) rice variety) to broilers was examined from an immunological perspective. HatchlingArborAcres chickens (240) were assigned to two dietary treatments (diets containing GM or non-GM rice) with 12 replicates per group and 10 birds per replicate. Traits were measured on one randomly selected bird from each replicate at d 21 and 42. The 42-d feeding trial revealed that crylAb/crylAc rice had no significant effect relative to non-GM rice on body weight and the immune organ indices. No significant pathological lesion in the spleen and bursa of Fabricius was found in the GM rice group. There were no significant differences in serum concentrations of immunoglobulin Y (IgY), IgM, interleukin 4 (IL-4) and IL-6 between the two groups at d 21 or 42, except for IL-6 being higher (P〈0.05) in the GM- fed chickens at d 42. There were no differences in the T and B lymphocyte transformation rate and CD4+/CD8+ ratio between the two groups at d 42. Additionally, there was no significant difference between the two diets in expression of relevant genes viz. the major histocompatibility complex class II beta chain (BLB2), interferon beta 1 (IFNβ), tumour necrosis factor alpha-like (TNFa) and toll-like receptor 4 (TLR4)in the spleen and bursa of Fabricius. All the data demonstrated that transgenic crylAb/ crylAc rice had no adverse effect on these aspects of immune function of broilers during 42-d feeding trial. Transgenic rice was therefore indistinguishable from non-GM rice in terms of short-term feeding in chickens. 展开更多
关键词 TRANSGENIC crylAb/crylac gene RICE broiler immune trait gene expression
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转双价双Bt抗虫基因(Cry1Ac+Cry2Ab)棉与非转基因棉生物学特性差异分析 被引量:3
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作者 张兴华 田绍仁 +3 位作者 张天玉 李捷 杨兆光 乔艳艳 《中国农学通报》 CSCD 2012年第24期35-41,共7页
此研究为国家转双价双Bt抗虫基因棉环境安全评价技术的建立而设。以转双价双Bt抗虫基因(Cry1Ac+Cry2Ab)棉为观察品种,非转基因棉‘赣棉11号’为对照品种,进行棉花生育性状、产量性状上生物学特性表现对比。结果表明,转双价双Bt抗虫基因... 此研究为国家转双价双Bt抗虫基因棉环境安全评价技术的建立而设。以转双价双Bt抗虫基因(Cry1Ac+Cry2Ab)棉为观察品种,非转基因棉‘赣棉11号’为对照品种,进行棉花生育性状、产量性状上生物学特性表现对比。结果表明,转双价双Bt抗虫基因棉与非转基因棉相比,前者株高生长超速介于显著与不显著之间,增长幅度在3.3~4.7cm之间;单株成铃数增加显著(增12.5个);第一果枝高度提升显著(上升3cm);总果节数增加显著(增10.2个);主茎节距拉长显著(0.5cm);叶色加深显著;籽棉增产极显著(增267.0kg/hm2);皮棉增产极显著(增118.35kg/hm2);霜前籽棉减产极显著(减220.95kg/hm2);霜前皮棉减产极显著(减88.5kg/hm2);单铃重下降极显著(低0.54g);单铃籽棉重下降极显著(低0.44g);单铃皮棉重下降极显著(低0.18g);籽指上升极显著(升1.65g);纤维整齐度指数上升显著(高1.025%);马克隆值升高显著(高0.787);发芽率提高极显著(增2.75%)。结果说明转双价双Bt抗虫基因棉的一些生育性状、产量性状较差,总产性状较好,纤维品质上整齐度较好,推广种植性一般。 展开更多
关键词 双价双Bt抗虫基因棉 苏云金芽孢杆菌Cry1Ac+Cry2Ab基因 生物学特性
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Bt基因介导的大豆抗蚜虫表达载体的构建
7
作者 袁成志 高美玲 张艳馥 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第23期10924-10927,共4页
[目的]构建用于大豆抗蚜虫研究的Bt基因介导的Cry1Ac植物表达载体。[方法]以含有Cry1Ac的质粒pRH201为模板进行PCR扩增,将PCR产物克隆至载体质粒pBS中,将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α,并对重组质粒进行酶切和测序鉴定。经验证的Cry1A基... [目的]构建用于大豆抗蚜虫研究的Bt基因介导的Cry1Ac植物表达载体。[方法]以含有Cry1Ac的质粒pRH201为模板进行PCR扩增,将PCR产物克隆至载体质粒pBS中,将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α,并对重组质粒进行酶切和测序鉴定。经验证的Cry1A基因扩增产物双酶切后与pBI121载体连接转化,挑取重组子pBIC121进行BamHⅠ/SnaBⅠ双酶切鉴定。[结果]从pRH201质粒中扩增获得长约3.5 kb的Cry1Ac基因序列,对重组质粒pBSCRY的插入片段进行测定,确定了Cry1Ac片段的全长为3 534 bp,共编码1176个氨基酸。[结论]构建了Cry1A基因的植物表达载体,为大豆抗蚜虫转基因研究奠定了基础。 展开更多
关键词 BT基因 CRY1AC基因 农杆菌介导 大豆 表达载体
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Polyhedrosis Virus in Bacillus thuringiensis
8
作者 YE Xiang-li XIA Li-qiu 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2011年第1期92-100,共9页
This study was conducted to build a recombinant strain with highly insecticidal activity and a wide host range by using the crylAc and p74 gene. Firstly, the p74 gene was amplified from the genosome ofAutographa calif... This study was conducted to build a recombinant strain with highly insecticidal activity and a wide host range by using the crylAc and p74 gene. Firstly, the p74 gene was amplified from the genosome ofAutographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus. The crylAc gene and the terminator gene of crylAc, named crylAct, were amplified from the plasmid of Bt 4.0718 strain. Three T vectors, named pTp74, pT1Ac, and pT1Act which held the aimed gene p74, cry1Ac, and crylAct, respectively, and two middle vectors, named pTp74Act and pTIAcp74 which held the aimed fusion gene p74-crylAct and cry lAc-p74, respectively, were built by using pMDI 8-T. Then pTiAcp74 and the shuttle plasmid were digested and linked and an expressing-vector pH1Acp74 was built. Finally, pH1Acp74 was transformed into the acrystalliferous strain XBU001 and the aimed recombinant strain XBU-H1Acp74 was obtained. The expression of Bt transformant XBU-H1Acp74 was analyzed by SDS-PAGE which showed XBU-H1Acp74 could produce 130 kDa CrylAc protein and 50 kDa P74 protein. The insecticidal activity of transformant against Spodoptera exigua was evaluated compared with the contrast strains HTX-42 (only crylAc gene was transformed into XBU001) after autolysis. The LCs0 of HTX-42 was higher than that of the XBU-H IAcp74's, which implied that P74 could increase the efficacy and range of Bt Cry toxins in insect control. The fusion gene of crylAc and p74 were constructed successfully which will be served as the foundation lbr constructing the fusion genes of Bt cry gene and other foreign genes. 展开更多
关键词 Bacillus thuringiensis Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus crylac gene p74 gene fusion gene
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转Bt基因糙米对断奶仔猪潜在致敏性的安全评价
9
作者 曹正辉 王占彬 顾宪红 《家畜生态学报》 北大核心 2014年第3期32-37,共6页
试验旨在研究转Bt(bacillus thuringiensis)基因糙米对断奶仔猪的致敏性。选用30头21日龄的"大×白"断奶仔猪,随机分为2组,对照组日粮中添加70%的亲本非转基因糙米,试验组日粮中添加70%的转Bt基因糙米,试验期30d。在试验... 试验旨在研究转Bt(bacillus thuringiensis)基因糙米对断奶仔猪的致敏性。选用30头21日龄的"大×白"断奶仔猪,随机分为2组,对照组日粮中添加70%的亲本非转基因糙米,试验组日粮中添加70%的转Bt基因糙米,试验期30d。在试验第7d和28d采血,试验第25d利用Bt基因在水稻中表达的Cry1Ac杀虫蛋白的标准品进行仔猪的皮肤试敏试验。结果表明,对两组糙米的氨基酸水平进行了检测和对比分析,发现两组糙米的氨基酸水平差异不显著(P>0.05);通过对仔猪血清免疫球蛋白E、组织胺含量;血浆中二胺氧化酶活性及D-乳酸含量;唾液皮质醇含量等的检测,结果显示两组间这五个指标均差异不显著(P>0.05);利用Cry1Ac的蛋白标准品对仔猪进行的皮肤试敏试验,结果显示两组均无红斑产生。由试验结果可见,在本试验条件下,转Bt基因的糙米对仔猪无明显的致敏性。 展开更多
关键词 BT基因 糙米 CRY1AC 致敏性
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转cry1Ac基因抗虫水稻环介导等温扩增检测方法的建立及应用 被引量:3
10
作者 于妍 李志辉 +6 位作者 王志鑫 张先舟 张伟 檀建新 束长龙 张杰 张永军 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期86-91,共6页
为了方便快速地检测转cry1Ac基因抗虫水稻的转基因成分,本研究以转cry1Ac基因水稻‘华恢1号’为主要研究对象,根据环介导等温扩增技术的原理,针对人工改造的cry1Ac晶体蛋白毒素基因的6个区段设计4条特异性引物,在65℃条件下,利用链置换... 为了方便快速地检测转cry1Ac基因抗虫水稻的转基因成分,本研究以转cry1Ac基因水稻‘华恢1号’为主要研究对象,根据环介导等温扩增技术的原理,针对人工改造的cry1Ac晶体蛋白毒素基因的6个区段设计4条特异性引物,在65℃条件下,利用链置换DNA聚合酶等温扩增1h,分别通过荧光显色和凝胶电泳完成对转基因作物的检测工作,同时对2种转基因作物和5种非转基因作物进行LAMP检测以检验该方法的特异性。结果表明,该LAMP方法能有效地检测含有cry1Ac的转基因作物,检测结果与常规PCR方法结果一致,灵敏度是PCR方法的10倍,达到0.01%,并且具有高特异性,表明该检测方法适合转cry1Ac基因抗虫作物的快速检测。 展开更多
关键词 转cry1Ac基因抗虫水稻 环介导等温扩增 转基因作物 检测
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BT799玉米对亚洲玉米螟抗性研究 被引量:15
11
作者 王月琴 何康来 +4 位作者 江帆 王依冬 张天涛 王振营 白树雄 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期636-642,共7页
【目的】抗螟性鉴定是转基因抗虫玉米研发的重要一环。本文主要就转基因玉米BT799对亚洲玉米螟的抗性展开评价,同时测定了BT799植株组织中CrylAc蛋白的表达量。【方法】采用了酶联免疫吸附测定法(ELISA)、室内生测和田间人工接虫鉴定... 【目的】抗螟性鉴定是转基因抗虫玉米研发的重要一环。本文主要就转基因玉米BT799对亚洲玉米螟的抗性展开评价,同时测定了BT799植株组织中CrylAc蛋白的表达量。【方法】采用了酶联免疫吸附测定法(ELISA)、室内生测和田间人工接虫鉴定3种方法。【结果】转基因抗虫玉米BT799组织中CrylAc蛋白含量分别为768.0ng/g(蛋白,鲜叶重)和1452.8~2978.5ng/g(蛋白/花丝、苞叶或幼嫩籽粒干重)。田间心叶期接虫条件下转基因抗虫玉米BT799和CC.2XBT799表现高抗亚洲玉米螟。室内取食转CrylAc基因玉米不同组织的亚洲玉米螟敏感幼虫7d后的存活率为0~37.5%,取食非转基因对照的存活率为89.9%~100.O%。亚洲玉米螟不同抗性品系取食郑单958K组织的存活率以Crylle抗性品系最低,其次是CrylF抗性品系,均显著低于取食对照郑单958,CrylAc抗性品系最高,与对照差异不显著。【结论】转CrylAc基因玉米BT799对亚洲玉米螟有很高的杀虫作用和良好的田间抗螟性。 展开更多
关键词 转化事件BT799 Cry1Ac基因玉米 亚洲玉米螟 寄主植物抗虫性
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Bt群体信号应答因子nprR基因的缺失对cry1Ac基因表达的影响 被引量:3
12
作者 王壵 邓超 +4 位作者 彭琦 陈榛 张杰 黄大昉 宋福平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1550-1555,共6页
【目的】研究群体信号应答蛋白编码基因nprR在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)HD-73菌株晶体蛋白形成过程中的作用。【方法】通过同源重组,构建了HD-73nprR基因缺失突变菌株HD73(ΔnprR)。利用启动子-lacZ融合、SDS-PAGE方法... 【目的】研究群体信号应答蛋白编码基因nprR在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)HD-73菌株晶体蛋白形成过程中的作用。【方法】通过同源重组,构建了HD-73nprR基因缺失突变菌株HD73(ΔnprR)。利用启动子-lacZ融合、SDS-PAGE方法,测定不同培养基中nprR基因转录活性及nprR基因缺失对cry1Ac转录及表达的影响。【结果】启动子转录活性分析表明,在LB和SSM培养基中nprR基因从对数期结束(T0)开始表达,稳定期持续表达。在LB培养基中,nprR基因的缺失使cry1Ac基因在生长过渡期和稳定期前期转录活性显著提高,同时HD73(ΔnprR)菌株Cry蛋白生成量也明显高于出发菌株HD-73,但是在芽胞形成释放后,Cry蛋白的表达没有明显的区别。【结论】在丰富培养基中苏云金芽胞杆菌nprR基因的缺失在生长过渡期和稳定期前期能够提高cry1Ac基因转录和表达,从而缩短了cry基因表达时间,并且Cry蛋白总产量与出发菌株相当。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 群体效应 nprR基因 CRY1AC基因
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