利用冰冻切片机快速制作木质茎的显微切片技术

【目的】植物的木质茎因次生维管组织含量多、细胞壁木质化程度高、质地较硬,所以徒手切片和石蜡切片均难以获得满意的切片效果。冰冻切片机可对一定硬度的组织进行切片,是植物木质茎制片的有效工具之一。【方法】利用冰冻切片机对一些质地均匀、含水量较高的幼小木质茎直接切片;对木质坚硬、含水量较少的茎,经过FAA固定液固定、OCT包埋后(-30)~(-25)℃冰冻切片,再用0.1%甲苯胺蓝染色,显微镜观察并拍照染色效果。【结果】来源于乔木或灌木,直径不超过6 cm的木质茎,利用冰冻切片均可快速获得结构完整、图像清晰、色彩丰富的显微结构图像。【结论】冰冻切片机可用于幼小木质茎的显微切片制作,结合甲苯胺蓝染色,具有简便、高效、易操作的优点。

聚合物复合材料冷冻超薄切片技术——以等规聚丙烯/乙丙橡胶/纳米二氧化硅复合材料为例

真实结构图像对聚合物材料的研究和改性极为重要。冷冻超薄切片技术是聚合物材料进行内部微观结构分析必要的前处理技术。根据聚合物材料分子运动随温度变化这一热力学性质,通过对等规聚丙烯/乙丙橡胶/纳米二氧化硅聚合物复合材料在不同温度下的切片实验,探究切片温度对样品的微观形态和结构的影响规律。实验发现,玻璃化转变温度是影响切片质量变化的关键点。当切片温度设定在材料的玻璃化转变温度附近时,前后所得到样品的微观形态结构呈现出显著的差异。然而,如果切片温度过低,可能会引起严重的卷片现象,不利于显微结构的观察与分辨。玻璃化转变温度是聚合物材料进行切片的最佳温度,不仅能确保获得样品的真实结构,还能够得到高质量且平整的切片。

冷冻切片和数字切片在生药学实验教学中的应用

冷冻切片具有简便、高效和易操作的优点;数字切片具有容易保存和观察方便等优点。文章以具体实验教学实例,介绍冷冻切片和数字切片技术在生药学实验课程中的应用和展望,为生药学实验教学改革提供参考。

植物冰冻切片技术的改进

以五味子叶柄、叶片、根和茎为试材进行冰冻切片,过程简单有效且所得图版清晰,在1天内即可获得高质量图片。其关键步骤是选择合适的甘油浓度、切片时的温度及展片技术。

冰冻切片技术在高山红景天细胞学研究中的应用

为了解决利用普通石蜡切片观察植物样品需要进行脱水、浸透、包埋操作且耗时长的问题,以高山红景天为试材,对其根和茎进行冰冻切片,过程简单有效且图版清晰,在1d内即可获得高质量图片。冰冻切片的关键步骤是选择合适的甘油浓度、切片时采用的温度及展片技术。

冰冻切片技术在植物显微结构和组织化学中的应用

介绍了冰冻切片法研究植物显微结构和组织化学的一般程序。结果表明,冰冻切片过程简单有效且图版清晰,在1d内可获得高质量图片,解决了利用普通石蜡切片观察植物样品需要进行脱水、浸透、包埋操作且耗时长的问题,在植物显微结构和组织化学研究中具有广阔的应用前景。

聚乳酸聚乙醇酸微球冷冻切片方法的研究

目的研究聚乳酸聚乙醇酸(PLGA)微球切片的制备方法,以便使用扫描电镜获得孔洞结构完整清晰的微球截面图片,为后期使用图像处理软件计算微球的孔隙率提供基础。方法使用冷冻包埋剂包埋载有牛血清白蛋白(BSA)的PLGA微球,冷冻切片获得微球截面,并用扫描电子显微镜观察切片形态,分别考察包埋剂的种类、浸泡时间、液氮冷冻等对切片质量的影响。结果优化方法为:将微球浸泡在自制的质量浓度10%明胶+5%甘油混合冷冻包埋剂中,于37℃浸泡3 h,然后转移至质量浓度20%明胶+5%甘油混合冷冻包埋剂中,于37℃浸泡1 h,再转移至-20℃的冰箱中使包埋剂凝固;切片前将包埋块浸入液氮中急速冷冻5 min。结论使用优化方法所得的PLGA微球切片,截面孔洞结构完整清晰,且操作方法简单、快速和有效。

大豆根部冰冻切片最佳方法试验

通过对不同品种大豆根部冰冻切片技术的各个环节及参数的研究,建立了一种适合于大豆根部的冰冻切片技术,即材料固定、速冻、冷冻保护、包埋后进行冰冻切片。筛选出适合于大豆根部冰冻切片的温度、包埋剂、保护液、固定剂。探索出影响切片质量的关键因素。从而为大豆根部的细胞生物学提供了简便、快速、高效的切片技术。

适合于植物花器官的冰冻切片技术

通过对4种植物主要花器官冰冻切片技术的各个环节及参数的研究,建立了一种适合于植物花器官的冰冻切片技术,即蔗糖保护-液氮速冻-冰冻切片法。其具体程序是:材料经固定和冷冻保护(蔗糖为冷冻保护剂)后进行速冻包埋(液氮为包埋剂);尔后进行冰冻切片;切片经干燥和染色(或者不染色)后,在显微镜下观察并摄影。此法为植物花器官的细胞生物学和分子生物学研究提供了简便、快速和高效的切片技术。

游离毛囊体外培养模型构建及形态学检查的实验研究

目的:构建游离毛囊体外培养模型,观察离体培养人头皮毛囊形态变化。方法:在Williams E无血清培养基中,建立离体人头皮毛囊培养模型;通过倒置显微镜观察毛囊的形态变化;目镜测微器测量毛囊长度;3H-TdR 掺入检测毛囊DNA合成率;组织学检测用冰冻切片光镜观察和电镜切片透射电镜观察。结果:毛囊有不同程度的生长,随时间后移形态结构由清晰逐渐变为模糊;冰冻切片HE染色后在光学显微镜下可清楚分辨出毛囊的结构;培养3天毛囊的内外根鞘中可见凋亡细胞,内皮根鞘较外皮根鞘明显多见。结论:在离体培养人头皮毛囊时,Williams E无血清培养基是合适的选择,该模型也是筛选促进或抑制毛发生长药物的良好模型;离体培养毛囊组织学检测用冰冻切片可以简化步骤;透射电镜可以用来观察离体培养的毛囊的形态和超微结构的变化,也可以用来协助观察细胞凋亡的状况。目镜测微器测量毛囊长度简单可行,辅以3H-TdR 掺入则更为客观。

杂草果实的冰冻切片技术

介绍一种快速、简便的杂草果实解剖技术。以4种木质化程度高且能够漂浮的杂草果实为材料进行冰冻切片,经过材料固定、前处理、样品冷台固定、冷冻切片、展片、染色和观察并拍照等操作步骤,可以获得清晰的果实解剖照片,直观地揭示杂草果实适应漂浮的显微结构。杂草果实冰冻切片方法的优点是不需要对材料进行长时间的软化处理以及繁琐的脱水和包埋等过程。其关键环节是适宜的甘油浓度、冰冻温度和展片步骤。其中,15%的甘油浓度进行前处理最合适。

观察植物木质部的3种切片方法比较

为探讨出一种能更清楚有效地观察植物木质部结构的细胞学切片方法,以甘蓝型油菜N529及拟南芥野生型col-4为材料,利用快速冷冻切片法、石蜡切片法及徒手切片法制备植物茎组织切片。切片经组织化学染色:1%间苯三酚和25%盐酸处理,并通过Nikon倒置显微镜观察和比较3种不同切片的植物细胞形态结构。结果表明快速冷冻切片法处理的植物细胞结构保存较完好,木质素染色清晰,且操作方法简便、快速、有效。

迎春桃花茶中红开花习性观察

对迎春桃花(Prunus persica var.camelliaeflora Dipp.)茶中红开花习性进行了观察,结果表明,茶中红花芽形态分化划分为未分化期、花芽分化始期、萼片分化期、花瓣分化期、雄蕊分化期和雌蕊分化期等6个时期。茶中红花为辐射对称花,颜色为亮红色。茶中红开花习性存在一些特殊性,有一定比例的单芽双花花序现象和一花多果现象。

颞骨鼓乳段面神经斜矢状位断层解剖方法的研究

目的探讨颞骨鼓乳段面神经的斜矢状位断层解剖方法。方法应用先进的冷冻数控铣削技术,对20例正常国人颞骨标本进行斜矢状位断层解剖研究,数码相机摄影,计算机保存数据,获取鼓乳段面神经斜矢状位断层连续图像,并对所获图像进行形态解剖学观察。结果20例颞骨标本斜矢状位连续断层切片均得到鼓乳段面神经的连续显示层面,图像清晰,形态及走行显示良好。结论斜矢状位断层解剖研究可为临床鼓乳段面神经相关疾病的诊断、治疗、手术及影像学研究提供解剖学基础。

一种用于观察木薯显微结构的冰冻切片技术

采用直接包埋法冰冻切片、蔗糖保护法冰冻切片和石蜡切片3种方式对木薯的根、茎、叶等组织进行切片,并在显微镜下观察和拍照。结果表明,在合适的蔗糖浓度下,蔗糖保护法用于木薯不同器官的冰冻切片,可以真实的反映细胞的显微结构,且切片组织完整性和图片清晰度效果良好。

活体电转化技术在新生小鼠视网膜中的应用

活体电转化技术是在高电压的脉冲作用下,瞬态增加细胞膜的渗透性从而将外源基因高效导入细胞的方法。与病毒载体等其他方法相比,活体电转化技术具有安全、高效、快速、稳定及应用范围广等优点,近年来在很多组织和器官中得到广泛使用,包括在眼科研究领域。文章介绍了活体电转化技术在新生小鼠视网膜中的应用,通过新生小鼠视网膜下注射的方法,经几次高电压的脉冲,将高浓度的绿色荧光蛋白表达质粒导入新生小鼠视网膜细胞内。通过冰冻切片观察绿色荧光蛋白在视网膜中的表达。结果表明绿色荧光蛋白在视网膜外核层高表达,证实了活体电转化技术可以将外源基因高效、快捷的导入视网膜,从而为研究视网膜发育及功能提供一种有效的手段。

蝴蝶兰花器官冰冻切片技术探讨

通过对蝴蝶兰的子房、花瓣、唇瓣和合蕊柱进行切片,建立了蔗糖保护-液氮冷冻的冰冻切片技术体系。将蝴蝶兰花器官经过蔗糖磷酸缓冲液保护液处理后抽真空,再经过液氮速冻、固定、包埋、切片、展片观察、染色以及拍照,制作出蝴蝶兰花器官较完整的显微结构切片。研究结果表明,蝴蝶兰花器官冰冻切片最适条件为:(1)蔗糖磷酸缓冲液处理的最适质量分数为子房4%,花瓣8%,唇瓣4%,合蕊柱16%;(2)最适切片厚度为子房15μm,花瓣10μm,唇瓣20μm,合蕊柱10μm;(3)子房、花瓣和唇瓣最适染色方法均为番红单染色法,合蕊柱最适染色方法为番红-固绿双染色法,4种花器官均不适合单独使用固绿染色。

卡特兰冰冻切片技术的探讨

实验采用一种适合植物器官的冰冻切片技术,即蔗糖保护-液氮速冻冰冻切片法来观察卡特兰根、茎、叶的显微结构。实验结果表明,适合卡特兰根、茎、叶的最适条件:根的最适条件为蔗糖浓度4%、切片厚度20μm、番红染色20min;茎的最适条件为蔗糖浓度16%、切片厚度20μm、番红-固绿染色25min;叶的最适条件为蔗糖浓度8%、切片厚度15μm、固绿染色5min。实验结果表明基于蔗糖保护-液氮速冻的冰冻切片技术比传统的石蜡切片技术简单有效,在1d内便可获得高质量的图片。

小麦条锈菌冬孢子发生的组织学和超微结构研究

采用冷冻切片技术、光学显微镜和电子显微镜技术,系统研究了小麦条锈菌冬孢子的个体发生过程和超微结构特征。结果表明,小麦条锈菌冬孢子由排列在冬孢子堆基部的双核产孢细胞产生。在发育初期,产孢细胞一端产生突起形成冬孢子芽,随后冬孢子芽经延伸并形成隔膜,依次分化形成冬孢子原基、柄细胞和冬孢子原体。冬孢子原体经有丝分裂后产生隔膜发育形成双核双细胞冬孢子。成熟的冬孢子表面光滑,具有明显加厚的细胞壁,双核融合,原生质密度增加,富含脂肪粒和糖原类物质。在部分冬孢子堆周围还可观察到莲花状包被结构。

植物冰冻切片条件的优化及其与石蜡切片在组织化学应用中的比较

冰冻切片是植物组织学研究中一项重要的实验技术,冷冻温度和冷冻时间是决定切片质量的关键因素。通过比较15种冰冻切片条件,得出植物组织直接冰冻切片较适宜的冷箱温度、冷台温度和冷冻时间。同时,通过对5种植物的不同组织进行组织化学染色,比较了新鲜材料直接冰冻切片与常规石蜡切片在不同化学成分鉴定上的异同及各自的适用范围。结果表明,对于多糖、蛋白质和角质,两种切片方法的鉴定结果比较一致,但对于脂肪只能采用冰冻切片技术。研究结果对植物组织学实验和研究方法的改进具有一定的参考价值。