冷冻载体Cryotop降温速率的测量及系统优化

Cryotop法是玻璃化保存卵母细胞较有效的方法之一。当Cryotop载体插入液氮时,降温速度极高,几乎瞬间完成,常规的方法无法测量。实验使用数字示波器、线径25μm的T型热电偶建立起高速测温系统,测量了Cryotop法用于卵母细胞低温保存时的降温速率。通过改变载体材料、厚度、冷源温度等条件,提高Cryotop的降温速率。结果发现当使用60μm的铜质载板,使用浆状液氮作为冷源时,降温速度最高,可达到(37130±1336)K/min,较商品化的Cryotop的降温速度((11982±1936)K/min)提高了2倍。

Cryotop模型冷冻过程中对流换热系数的研究

Cryotop冷冻技术是口前卯母绌胞玻璃化保存较为有效的方法，它以操作简单、获得的冷冻速率较高而得到，“泛应用。近年来研究者们采用数值计算的方式对其传热性能进行研究，但计算中涉及的模型冷冻过程中的对流换热系数却没有有依据的取值范围。文章以_二种载板厚度的Cryotop模型为研究对象，采片超快速测温装置对水滴冷冻过程进行温度测量，同时刚模拟计算的方法得到不同对流换热系数下水滴冷冻过程的冷却速率，将两者进行比较，找出与实际测温所得结果相吻合的模拟实验中所需要的对流换热系数取值范围。结果表明：一种小同载板厚度的Cryotop模型在模拟计算中对流换热系数的取定范围为6000～8000W／（m^2·K）。

超速玻璃化冷冻载体Cryotop和Cryoloop冻存小鼠卵裂期胚胎的效果比较

目的应用冷冻薄膜(Cryotop)和冷冻环(Cryoloop)两种超速玻璃化冷冻载体,氯化胆碱替代氯化钠的低钠磷酸盐缓冲液配置的玻璃化冷冻保护剂冷冻小鼠胚胎,比较两种载体的效果差异。方法将300个小鼠胚胎随机分为3组:对照组60个、Cryotop组120个和Cryoloop组120个。比较复苏后胚胎存活率和继续发育能力。结果 Cryotop组复苏后胚胎存活率达93.3%,Cryoloop组90.4%,无显著性差异(P>0.05);继续发育率:Cryotop组和Cryoloop组比较,4细胞率分别为48.2%和29.8%(P<0.05),囊胚率分别为31.5%和16.1%(P<0.05),差异具有显著性。结论Cryotop和Cryoloop两种玻璃化冷冻载体相比,Cryotop操作更为简便,复苏后小鼠胚胎获得了更高的继续发育能力。

猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的研究

本研究旨在为猪MⅡ期卵母细胞的玻璃化冷冻选择合适的冷冻保护剂及冷冻载体,提高猪卵母细胞冷冻后的存活力。试验分别采用以40%EG、15%EG+15%DMSO+20%FBS、15%EG+15%DMSO+20%SPS作为渗透性冷冻保护剂的冷冻液,以玻璃微细管(GMP)和冷冻帽(cryotop)作为载体对猪卵母细胞进行玻璃化冷冻。结果发现,采用含有血清蛋白替代物(serum protein substitute,SPS)的冷冻液VS3冷冻后二乙酰荧光素(FDA)染色存活率(59.40%±4.93%)显著高于VS1组(42.12%±4.08%)及VS2组(37.57%±1.21%)(P<0.05);采用VS3作为冷冻液用cryotop作为载体冷冻后FDA染色存活率(83.33%±3.33%)显著高于GMP(59.40%±4.93%)(P<0.05)。由此可见,采用SPS代替胎牛血清(FBS),用cryotop作为载体可以使猪卵母细胞冻后存活率显著提高。

玻璃化冷冻人卵母细胞的临床应用及成功分娩

1病历资料 患者,女,38岁,因＂婚后同居,性生活正常,未避孕未孕1年＂于2004年1月8日来诊。患者平素月经规律,周期为28～30 d,基础内分泌正常,双侧卵巢窦卵泡数20个左右。于本院行输卵管造影检查,

超快速玻璃化冷冻人早期胚胎的临床应用价值初探

目的观察cryotop超快速玻璃化冷冻人早期胚胎的临床效果并探讨其应用价值。方法玻璃化冷冻试剂盒购自日本KITAZATO Biopharma公司,对新鲜周期胚胎移植后未妊娠患者的胚胎施行胚胎复苏,观察胚胎复苏后的存活率,胚胎分级和临床妊娠情况。结果共行胚胎复苏63个周期,201个胚胎,胚胎复苏后存活189个,胚胎复苏存活率为94.03%(189/201);移植胚胎63个周期,移植胚胎总数187个,平均每周期移植胚胎2.97个(187/63);临床妊娠30个周期,临床妊娠率为47.62%(30/63),种植率为20.32%(38/187),多胎率为23.33%(7/30),流产率为6.67%(2/30)。结论 cryotop超快速玻璃化冷冻法简便且胚胎存活率高,是一种较好的冷冻人早期胚胎的方法。

冷冻膜及冷冻环在人早期胚胎玻璃化冷冻中的应用比较

目的探讨冷冻膜和冷冻环2种载体行玻璃化冷冻对人卵裂期胚胎和囊胚的效果。方法采用回顾性队列研究分析912个解冻复苏周期,比较2种载体行玻璃化冷冻后胚胎复苏结局和临床结局的差异及其相关危险因素。结果 (1) 385枚卵裂期胚胎中,冷冻环组(n=251)和冷冻膜组(n=134)的胚胎复苏率、完整胚胎存活率、临床妊娠率、种植率、流产率、移植周期出生率、双胎出生率、早产率及出生男女比率差异均无统计学意义(P>0.05);冷冻环组新鲜周期优质胚胎率(24.78%)、平均移植周期数(1.3±0.6)、复苏后优质胚胎率(40.76%)、复苏后平均移植胚胎数[(2.1±0.4)个]及低体质量儿出生率(19.01%)均明显高于冷冻膜组[18.59%,P=0.002;1.2±0.4,P=0.001;28.13%,P=0.001;(1.9±0.4)个,P=0.000;4.08%,P=0.015]。(2) 527枚囊胚中,冷冻环组(n=287)和冷冻膜组(n=240)的平均移植周期数、胚胎复苏率、完整胚胎存活率、复苏后囊胚扩张率、流产率、双胎出生率、早产率、低体质量儿出生率及出生男女比率差异均无统计学意义(P>0.05);冷冻环组的临床妊娠率(67.94%)、种植率(49.72%)、移植周期出生率(52.96%)、新鲜周期优质胚胎率(27.0%)、平均移植胚胎数[(1.9±0.4)个]显著高于冷冻膜组[54.17%, P=0.001;39.58%,P=0.002;41.25%,P=0.047; 23.0%, P=0.002;(1.8±0.5)个,P=0.004]。Logistic回归显示,新鲜周期优质胚胎数、内膜厚度及冷冻胚胎所用载体类型与冷冻囊胚复苏移植后临床妊娠密切相关(P=0.017、P=0.049、P=0.044),而年龄、复苏后平均移植胚胎个数、复苏后囊胚扩张数、平均移植周期数及内膜分型等差异均无统计学意义(P>0.05)。结论对于卵裂期胚胎,冷冻膜和冷冻环冷冻胚胎的复苏结局和临床结局均是相当的。对于囊胚,冷冻环组的临床结局优于冷冻膜组。

玻璃化冷冻方法三种冷冻载体冻存卵裂期胚胎效果的比较

目的应用冷冻环、冷冻膜和自制麦管片三种冷冻载体,采用玻璃化冷冻方法冻存昆明小鼠卵裂期胚胎,比较三种载体的冻存效果。方法采集通过体外受精在体外培养第2天得到的4-8细胞期的昆明小鼠胚胎247个,对其中177个按载体不同随机分为冷冻环组59个,冷冻膜组59个,自制麦管片组59个;剩余的新鲜胚胎70个作为对照组,比较冻融后鼠胚的复苏率和囊胚形成率。结果冷冻环组、冷冻膜组和自制麦管片组的胚胎复苏率分别为98.3%、98.3%和94.9%,三组比较差异无统计学意义(P>0.05);冷冻环组、冷冻膜组和自制麦管片组的囊胚形成率分别是84.5%、86.2%和82.1%,三组比较无统计学差异(P>0.05);新鲜对照组囊胚形成率为94.3%,与冷冻环组、冷冻膜组分别比较无统计学差异(P均>0.05),与自制麦管片组有统计学差异(P<0.05)。结论采用玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵裂期胚胎,使用冷冻环和冷冻膜作为冷冻载体具有复苏率高、囊胚形成率高的优点,更适合应用于临床。