Development of a Total Flavonoids Extract of Artemisia Rupestris L.via Nanotechnology and Its Antiviral Effect In Vitro

Objective:We aimed to develop a novel Artemisia rupestris L.flavonoid nano-encapsulation(AFN)preparation and evaulate its anti-hepatitis B virus(HBV)activityin vitro.Methods:First,the AFN was prepared using polylactic-co-glycolic acid(PLGA).Then,after verification of the AFN,in vitro anti-virus assays were conducted by:(1)assessing the inhibitory effect of AFN on the secretion of hepatitis B surface antigens(HBsAg),hepatitis B e-antigens(HBeAg),and the replication of HBV DNAin HepG2.2.15 cells;(2)analyzing the influence of AFN on the activation rate of NF-κB positive cells;and(3)evaluating the effect of AFN on the function of glutathione peroxidase(GSH-PX)enzymes located onthe HepG2.2.15 cell membrane.Results:Compared to the original total flavonoids extract of Artemisia rupestris L.(withoutnano-encapsulation),AFN preparation under the maximum nontoxic concentration effectively inhibited the secretion of HBsAg,HBeAg,and HBV DNA from HepG2.2.15 cells.At the same time,AFN preparation promoted not only the activation rate of NF-κB positive cells,but also antiviral GSH-PX enzyme function.In conclusion,nano-encapsulation of the flavonoids extract of Artemisia rupestris L.showed an enhanced anti-HBV effect in vitro compared to the original total flavonoids extract(without nanoencapsulation);therefore,nano-encapsulation has great potential for the development of a novel antiviral herbal medicine preparation with improved efficacy.

新疆一枝蒿不同部位水提物的体外抗炎效果

为了探究新疆一枝蒿不同部位水提物的体外抗炎效果,本试验在体外用脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬白血病细胞(RAW264.7)构建炎症模型,采用水提法对新疆一枝蒿不同部位(叶、茎、花)进行提取,运用噻唑蓝(MTT)法检测新疆一枝蒿不同部位水提物对细胞活力度的影响,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其对炎症相关基因TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达的影响,Western blot检测其对TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白表达的影响。结果显示,新疆一枝蒿叶、茎、花水提物分别在0.078~1.250、0.078~5.000和0.078~1.250 mg/mL的浓度范围内对RAW264.7细胞活力度无显著抑制作用。与LPS模型组相比,新疆一枝蒿叶、茎、花水提物浓度范围在0.313~1.250、0.625~2.500和0.625~1.250 mg/mL时,细胞活力度分别提高了23.12%~28.14%(P<0.01)、10.88%~18.62%(P<0.01)和16.13%~16.76%(P<0.05)。浓度为1.250 mg/mL的叶水提物可以极显著降低TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白表达(P<0.01);浓度为0.625和1.250 mg/mL的茎水提物可以极显著降低IL-1β的mRNA和蛋白表达(P<0.01),以及IL-6和TNF-α的mRNA表达(P<0.01);浓度为0.625 mg/mL的花水提物可以极显著降低IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结果表明,新疆一枝蒿不同部位(叶、茎、花)水提物均有抗炎效果,本试验结果可为新疆一枝蒿的兽医临床应用提供参考依据。

pH-时滞型新疆一枝蒿结肠定位片的制备及体外释放评价

目的:制备pH-时滞型新疆一枝蒿结肠定位片并对其体外释放性能进行评价。方法:采用压制包衣、喷雾包衣的方法制备结肠定位片,以总黄酮累积释放度为指标,分别考察压制包衣时滞材料处方比例、包衣用量、上下层填料比例,pH控释层处方比例与包衣增重。结果:经过考察,最优工艺处方为EC-PEG 6 000(4∶1),压制包衣0.1 g,压制包衣上下层填料(1.5∶1),Eudragit FS 30 D-Eudragit L30 D-55(2∶1),p H控释层包衣增重为7%时,制得结肠定位制剂在0.1 mol/L HCl溶液中2 h内不释药,在pH 6.8磷酸盐缓冲液中4 h累积释放度<10%,在p H 7.5磷酸盐缓冲液中6 h累积释放度>80%。结论:经过筛选后的结肠定位片能够实现结肠定位释放的目的且体外释放稳定。

新疆一枝蒿药材双波长HPLC指纹图谱的研究

建立新疆一枝蒿药材双波长HPLC指纹图谱的测定方法,为药材质量标准提升提供科学依据。采用HPLC法,Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温32℃;流动相:甲醇-0.2%甲酸水梯度洗脱;流速1.0 mL/min;检测器:DAD检测波长245和325 nm;进样量20μL。建立了新疆一枝蒿的HPLC指纹图谱,分别在245和325 nm处确定了7个和8个共有峰,并确证了槲皮素、绿原酸、木犀草素、芹菜素、蔓荆子素5个色谱峰,9批次新疆一枝蒿药材与生成对照指纹图谱的相似度大于0.9。首次建立了新疆一枝蒿药材双波长HPLC指纹图谱,所建立的指纹图谱测定方法精密度、稳定性和重复性良好,可用于新疆一枝蒿药材的鉴别和质量控制。

栽培一枝蒿粗多糖混合口蹄疫疫苗乳化方法及稳定性分析

旨在探究栽培一枝蒿粗多糖(cultivated Artemisia rupestris L.crude polysaccharides,CARCP)协同ISA-206油乳剂通过比较不同乳化方法与口蹄疫灭活抗原(inactivated foot-and-mouth disease viral antigen,FMD-Ag)制备FMD疫苗的效果异同,并观察不同储存条件对FMD疫苗稳定性的影响。通过搅拌和超声乳化分别制备不同疫苗组合,皮下免疫ICR小鼠后检测FMD特异性抗体及T细胞亚群比例。将搅拌乳化的不同疫苗组合在4、25℃条件下放置30、180 d后免疫ICR小鼠,检测体液和细胞免疫水平分析其稳定性。结果显示:与商品化FMD疫苗相比,搅拌和超声乳化制备的CARCP单独或协同ISA-206油乳剂的FMD疫苗组的特异性IgG水平和CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)T细胞比例无显著性影响(P>0.05)。4℃放置30、180 d后,与商品化FMD疫苗相比,CARCP单独或协同ISA-206油乳剂的FMD疫苗组的IgG水平和CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)CD44^(+)、CD8^(+)CD44^(+)T细胞比例无显著性差异(P>0.05)。25℃放置30、180 d后,与商品化FMD疫苗相比,免疫动物后FMD-Ag+ISA-206抗体水平及T细胞亚群比例显著降低(P<0.05),而FMD-Ag+ISA-206+CARCP抗体水平及T细胞亚群比例无显著性差异(P>0.05)。搅拌和超声乳化制备的不同FMD疫苗组合的抗体水平和T细胞水平的免疫效果没有差异;不同储存条件下,CARCP能够增强FMD疫苗的稳定性,这些研究结果为CARCP多糖佐剂的研究提供试验依据。

层次分析法结合响应面法优化新疆一枝蒿的提取工艺

目的采用层次分析法和响应面法优化新疆一枝蒿的提取工艺。方法在单因素优选的基础上结合响应面法对提取次数、溶剂倍数、提取时间3个主要因素进行考察,以木犀草素、芹菜素、一枝蒿酮酸的含量及出膏率为考察指标,层次分析法计算权重系数,通过综合评分优选新疆一枝蒿的提取工艺。结果新疆一枝蒿的提取工艺为:用10倍量60%乙醇加热回流提取3次,每次1 h。结论优化的工艺提取条件简便,重现性良好,适用于新疆一枝蒿药材的提取。

新疆一枝蒿化学成分的研究

目的研究新疆一枝蒿Artemisia rupestris全草的化学成分。方法采用硅胶、聚酰胺和Sephadex LH-20等方法进行分离纯化,采用光谱分析和理化常数对照等方法对所得化合物进行结构鉴定。结果从新疆一枝蒿的醋酸乙酯部分分离得到6个化合物,分别是:6-去甲氧基-4′-O-甲基茵陈色原酮-7-O-[6″-乙酰氧基)-β-D-葡萄糖苷(6-demethoxy-4′-O-methylcapillarisin-7-O-(6″-acetoxy)-β-D-glucopyranoside,]、6-去甲氧基-4′-O-甲基茵陈色原酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(6-demethoxy-4′-O-methylcapillarisin-7-O-β-D-glucopyranoside,)、刺槐素-7-O-β-D-葡萄糖苷(acacetin-7-O-β-D-glucopyranoside,)、对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid,)、一枝蒿酮酸(rupestonic acid,)、胡萝卜苷(daucosterol,)。结论其中化合物为新化合物,命名为一枝蒿苷A(rupestriside A),化合物～为首次从该植物中分离得到。

新疆野生及栽培一枝蒿多糖对树突状细胞免疫功能的影响

研究和比较新疆野生与栽培一枝蒿多糖对骨髓来源树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟和功能的影响。超声法制备野生及栽培一枝蒿粗多糖;Sevage法除蛋白;蒽酮-硫酸法测定多糖含量;流式细胞术检测DCs的成熟;ELISA法检测IL-12和TNF-α的表达水平。结果显示,野生及栽培一枝蒿多糖含量分别为26.18%和22.14%,去除蛋白质后多糖含量分别为30.94%和27.06%;野生及栽培一枝蒿多糖均可以显著增强小鼠骨髓来源CD11c+DCs表面分子CD40,CD86及CD80的表达(P<0.05);显著促进IL-12和TNF-α的表达(P<0.05);显著降低DCs吞噬FITC-Dextran的能力;且相同剂量对DCs的免疫活性无显著性差异(P>0.05);除蛋白和不除蛋白的野生及栽培一枝蒿多糖的免疫活性均无显著差异(P>0.05)。新疆野生和栽培一枝蒿多糖含量差异较小,并均可以促进小鼠骨髓来源DCs的成熟和功能,且差异不大。

响应面法优化新疆一枝蒿总黄酮提取工艺

从新疆一枝蒿中提取总黄酮并对其提取工艺进行优化。采用超声波法提取新疆一枝蒿总黄酮,通过响应面法分析,得到提取新疆一枝蒿总黄酮的最佳工艺条件:乙醇体积分数76%,料液比1:11(g/mL),超声时间32min。在最佳工艺条件下,新疆一枝蒿总黄酮得率为4.50%,比优化前提高了34%。

高效液相制备色谱制备一枝蒿酮酸对照品

目的研究高效液相色谱制备一枝蒿酮酸对照品的方法.方法原料用95%乙醇提取,浓缩成浸膏后用醋酸乙酯萃取.醋酸乙酯部位用100～200目硅胶柱色谱分离,用石油醚-醋酸乙酯(3:1)梯度洗脱,收集样品进行HPLC分离制备.结果该法所得产品用HPLC归一化法定量,质量分数大于98%.结论本方法简便,产品质量高,一枝蒿酮酸产品可用做分析方法的对照品.

高效液相色谱法测定新疆一枝蒿中一枝蒿酮酸的含量

目的建立新疆一枝蒿中一枝蒿酮酸含量测定的方法。方法采用高效液相色谱法（HPLC）,SupelcosilTMLC18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液（50∶50）;流速0.8 ml.min-1,柱温30℃,检测波长243nm。结果一枝蒿酮酸和其他组分可达基线分离,线性范围0.042 4-0.212 0μg（r=0.999 6）,平均回收率为96.4%,方法精密度RSD=2.5%（n=3）。结论该法操作简便快速、准确灵敏,分离效果好,可为新疆一枝蒿质量控制提供方法依据。

新疆一枝蒿化学成分的研究

目的:研究新疆一枝蒿的化学成分。 方法 :采用色谱法分离一枝蒿中的化合物 ,并采用波谱法和化学方法鉴定化合物的结构。结果 :从新疆一枝蒿中分离得到 5种化合物 :一枝蒿酮酸、紫花牡荆素、木犀草素、β-谷甾醇与胡萝卜苷。 结论:木犀草素及紫花牡荆素为新疆一枝蒿中首次分离得到并详细报道的化合物。

新疆野生一枝蒿粗多糖对流感疫苗小鼠免疫增强效果的分析

用新疆野生一枝蒿粗多糖(wild Artemisia rupestris L.crude polysaccharides,WARCP)通过肌肉注射免疫小鼠,研究其作为流感病毒疫苗(influenza virus vaccine,IVV)的佐剂效果和节约流感疫苗抗原用量的作用。WARCP与不同剂量(0.05、0.1、0.5μg)的IVV配伍,肌肉注射免疫小鼠,观察小鼠的生长状态,通过ELISA法检测血清中抗体IgG及IgG1、IgG2a的水平;MTT法检测脾淋巴细胞的增殖;流式细胞术检测细胞因子CD4^+ IL-4和CD8^+ IFN-γ以及CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞的表达水平。结果表明WARCP对小鼠的生长状态没有显著的影响(P>0.05);WARCP能够显著提高不同剂量IVV特异性IgG及其IgG_1、IgG_(2a)的抗体水平(P<0.05);增强淋巴细胞的增殖(P<0.05);显著提高IL-4和IFN-γ的分泌水平(P<0.05);降低Treg细胞的表达水平(P<0.05);尤其可以提高低剂量IVV的体液和细胞免疫反应,至少减少抗原用量91%。因此,WARCP作为IVV的佐剂通过降低Treg细胞的水平,显著增强了IVV的免疫效果,尤其是Th1型的免疫反应,能够很好地节约抗原用量,具有良好的安全性。

新疆一枝蒿抗炎作用研究

目的采用不同类型的炎症动物模型评价一枝蒿(AR)提取物的抗炎作用。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验,角叉菜胶致大鼠足跖肿胀实验、小鼠气囊肿实验、棉球肉芽肿实验等。结果一枝蒿提取物对急性、慢性炎症及炎性渗出均有明显的抑制作用,抑制炎症介质PGE2的产生,并抑制白细胞游走。结论AR提取物具有明显抗炎作用,其作用与抑制炎症介质PGE2产生有关。

黄花蒿高产优质栽培技术研究进展

黄花蒿是我国的传统中药,具有抗疟疾、消炎杀菌、抗癌等作用,被广泛应用于临床医学,在世界范围内具有极大的市场。随着市场对青蒿素类药品需求量的日益增多及野生黄花蒿的逐渐匮乏,如何获得优质高产的黄花蒿品种、提高人工栽培黄花蒿的生物量及青蒿素含量成为了研究热点。对黄花蒿的生物学特征、影响其生物产量和青蒿素含量的因素、高产优质栽培技术及最新进展等进行综述,为黄花蒿的人工种植提供一定的理论依据。

一枝蒿提取物对小鼠胃肠运动的影响

目的观察一枝蒿水提物对小鼠胃肠运动的影响,探讨其作用机制。方法将小鼠随机分为正常对照组、多潘立酮组及一枝蒿水提物高、中、低剂量组。灌胃给药5 d后,以葡聚糖蓝2000为标记物,观察色素在5组小鼠胃内的残留比,以及幽门括约肌至色素最前端及至盲肠的距离比。结果一枝蒿高剂量组及多潘立酮组的胃残留率、肠推进率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),2组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论一枝蒿水提物能有效改善小鼠的胃肠动力。

新疆一枝蒿不同溶剂提取物治疗Ⅰ型过敏的药效学比较研究

目的探讨新疆一枝蒿治疗Ⅰ型过敏的药效物质基础。方法建立RBL-2H3细胞脱颗粒模型,检测新疆一枝蒿对RBL-2H3分泌IL-4、TNF-α的影响,研究比较新疆一枝蒿总醇提物Q1、醋酸乙酯萃取物Q2、水溶部位Q3和正丁醇萃取物Q4的Ⅰ型过敏治疗作用。结果正丁醇提取物Q4的抗I型过敏作用最佳,其次为水溶部位Q3。结论水溶性成分群(Q3、Q4)可能是新疆一枝蒿治疗Ⅰ型过敏的活性部位。

黄花蒿高产栽培技术

黄花蒿是我国传统中药,其青蒿素提取液有较高的药用价值。文章简述其形态特征、生态分布及生物学特性,并对其高产栽培技术进行了阐述。

不同栽培措施对黄花蒿产量和青蒿素含量的影响

用黄花蒿类型９３００４号作材料，进行播种量、种植密度、营养条件、采收期及留种技术的田间试验，结果表明：黄花蒿施用鸡粪或混合肥作基肥，以种子繁殖，于３月上旬撒播，每公倾播种量为９００ｇ～１５００ｇ，留苗密度为１５ｃｍ×１５ｃｍ，在苗期和生长盛期各追肥１次（尿素或过磷酸钙）可提高黄花蒿产量和青蒿素产量；黄花蒿以初蕾期采收最为适宜，其产量和青蒿素产量均较高；黄花蒿留种的种植密度以条距２５ｃｍ最好，植株长势强，开花结实多，种子产量高。

一枝蒿黄酮类提取物体内抗乙肝病毒活性及化学成分研究

目的研究一枝蒿黄酮类提取物抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)作用及化学成分。方法一枝蒿药材经50%乙醇提取,采用聚酰胺柱进行分离纯化,得到一枝蒿30%、50%乙醇洗脱物。采用1日龄北京鸭,人工感染鸭乙型肝炎病毒模型,将阳性鸭随机分为30%乙醇洗脱物组、50%乙醇洗脱物组、阿德福韦酯组、病毒对照组,各组分别于给药前、给药期间不同时间(5d和10d)和停药后3d取血,分离血清;停药后第3天杀剖,取肝脏,以血清DHBV-抗原、血清DHBV-DNA、肝脏DHBV-DNA作为药效评价指标,研究其体内抗乙肝病毒的作用。采用LCHRMS/MS法对有效部位化学成分进行分析。结果 50%乙醇洗脱物在200mg/kg剂量下能显著抑制鸭乙肝病毒血清和肝脏中DNA复制,30%乙醇洗脱物的抑制作用较弱。从50%乙醇洗脱物中推测出5种主要化合物,分别为6-去甲氧基-4′-O-甲基茵陈色原酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、紫花牡荆素、异山奈甲黄素、洋艾素、山柰素-3,3′,4′-三甲醚。结论 50%乙醇洗脱物有抗HBV的作用,50%乙醇洗脱物中推测出的5种主要化合物可能在抗HBV中起到重要的作用。