基于ITS2序列及二级结构的维吾尔族药材孜然及其混伪品鉴别

目的:应用DNA条形码技术,建立维吾尔族药材孜然及其混伪品小茴香、芫荽子的分子鉴别方法。方法:提取38批孜然及其混伪品的基因组总DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增内转录间隔区2 (ITS2)序列并双向测序,测序结果经CodonCode Aligner软件进行序列拼接,利用MEGA软件分析序列特征,计算种内、属间遗传距离,构建邻接(neighbor-joining,NJ)系统聚类树,预测其ITS2二级结构。结果:孜然药材ITS2序列中主体单倍型为A1,序列长度均为226 bp,鸟嘌呤(G)+胞嘧啶(C)占比为47.79%~48.23%;小茴香ITS2序列中,主体单倍型为B1,序列长度均为224~227 bp,G+C占比为53.30%~55.36%;芫荽子ITS2序列中,主体单倍型为C1,序列长度均为220~227 bp,G+C占比为56.82%~56.83%。孜然的种内遗传距离明显小于属间遗传距离。二级结构表明,孜然及其混伪品螺旋区的茎环大小、数目、位置及螺旋角度均有明显差异。结论:ITS2序列作为DNA条形码能稳定、准确地鉴别孜然及其混伪品药材,为保障孜然临床安全用药提供了有效技术手段。

孜然枯茗醛对实验性胃溃疡大鼠胃黏膜的保护作用

目的采用乙醇损伤构建大鼠的胃溃疡模型,探究孜然果实中枯茗醛(cuminaldehyde,CUM)对胃溃疡的作用与保护机制。方法选择36只雄性的SD大鼠,分为6组:对照组、模型组、奥美拉唑阳性对照组以及CUM低、中、高剂量组,每组6只。连续灌胃7 d后,采用无水乙醇法对大鼠进行急性胃溃疡实验。检测各组大鼠的胃溃疡面积、抑制率、胃组织抗氧化能力、血清炎症因子与胃黏膜保护因子的表达。结果CUM组可明显降低胃黏膜溃疡面积,提高胃溃疡抑制率,CUM高剂量组抑制率最高可达74.65%,此外,CUM 4的大鼠胃组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)的活性明显升高,胃黏膜保护因子血清前列腺素E_(2)(PGE_(2))和胃组织NO的含量也明显增加,降低了丙二醛(MDA)的含量。与模型组比较,CUM降低了大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,髓过氧化物酶(MPO)的活性明显降低。结论CUM具有良好的抗氧化应激能力和抗炎活性,可提高保护因子的表达,增强胃黏膜的防御能力,对大鼠急性胃溃疡产生明显的保护作用。

气相色谱-离子迁移谱法分析5种外观易混淆香辛料挥发性成分差异

目的比较5种外观易混淆香辛料挥发性成分差异。方法采用气相色谱-离子迁移谱法(gas chromatography-ion mobility spectroscopy,GC-IMS)分析孜然、小茴香、莳萝籽、百里香和千里香5种外观易混淆香辛料的挥发性成分,并通过指纹图谱和主成分分析法(principal component analysis,PCA)进行差异比较。结果5种香辛料样品中共鉴定出80种挥发性成分,且不同样品间挥发性成分种类及相对含量差异明显。枯茗醛、β-蒎烯等为孜然中特征挥发性成分,赋予其辛辣草药香、孜然香特征香气;香芹酮、柠檬烯等为莳萝籽中特征挥发性成分,赋予其辛香甘甜、温和而不刺激的特征香气;β-石竹烯、香茅醇等为千里香中特征挥发性成分,能够增强其特征香气的通透性;草蒿脑、罗勒烯、1,8-桉叶素、γ-松油烯、α-蒎烯、水芹烯、月桂烯等烯类,二丁基硫醚及乙酸芳香酯等酯类为小茴香中特征挥发性成分,共同赋予其强烈而偏甜润的特征香气;百里香酚、2-茨醇、正丁醇、芳樟醇、糠醛和2-乙酰基呋喃等为百里香中特征香气,共同赋予其清甜的药草香气。结论根据挥发性成分差异,可将5种外观易混淆香辛料进行有效区分。该研究为GC-IMS技术应用于香辛料的快速鉴别提供了理论参考。

气相色谱-质谱法测定孜然芹挥发油的化学成分

采用水蒸气蒸馏法从孜然芹中提取挥发性成分,并用气相色谱 质谱法(GC MS)联机分析,共分离出60余峰,鉴定出了49种物质,用面积归一法确定了相对含量。在所分离出的化合物中,碳氢化合物16种,烃类含氧衍生物32种。主要成分为枯茗醛和藏花醛,它们分别占测得组分的32 26%和26 49%。另有9种含量在1%以上的物质,主要是萜类中的单萜、倍半萜和芳香族醛、酮醚类物质。低含量组分主要为萜烯类的醇、醛、酮、酯和部分芳香族化合物。在气相色谱分析中,选择了合适的色谱条件,采用中等极性的DB 210柱,对孜然芹挥发油中的中等极性和非极性成分有较好的分离效果。

孜然种子提取物枯茗醛和枯茗酸抑菌作用研究

以番茄早疫病菌、棉花黄萎病菌、小麦纹枯病菌、烟草赤星病菌、小麦全蚀病菌、油菜菌核病菌、辣椒疫霉病菌、水稻纹枯病菌、小麦白粉病菌和番茄灰霉病菌等为供试菌种,采用离体与活体相结合的方法系统地测定了枯茗醛和枯茗酸的抑菌活性。离体抑菌活性测定结果表明,枯茗醛和枯茗酸对多种病原菌具有一定的抑制效果,其中对油菜菌核病菌菌丝生长的抑制效果高于其它供试病原菌,有效中浓(EC50)分别为2.1和7.3 mg/L;枯茗醛和枯茗酸对小麦白粉病的防治实验结果表明,供试浓度为1000 mg/L时,两种药剂的保护防效均高于50%;相同处理浓度下,枯茗酸对油菜菌核病的保护防效与速克灵处理相当,达到57.52%。

气相色谱质谱法测定孜然挥发油中枯茗醛含量的方法研究

本研究利用水蒸气蒸馏法提取孜然挥发油中枯茗醛,并采用GC-MS法进行含量测定。采用岛津DB-5柱(30m×0.32mm,0.25μm),进样口温度220℃,色谱升温条件为起始温度40℃,升温速率8℃/min,终点温度220℃,氦气流量1.2ml/min,分流比100:1,进样量0.5μl。结果表明枯茗醛浓度在7.75～69.75mg/ml呈良好线性关系,线性方程Y=3.34×108X-3.373×106(r=0.9989),平均回收率96.5%,重复性RSD为1.8%(n=3)。此法简便、准确且重复性好,可为孜然质量标准的制定提供科学的方法依据。

孜然种子中杀菌活性成分分离及结构鉴定

以小麦白粉病菌Blumer graminis、黄瓜霜霉病菌Pseudoperonispora cubensis、杨树溃疡病菌Dothiorella gregaria、棉花枯萎病菌Fusarium oxysporumf.sp.vasinfectum、白菜黑斑病菌Alternariaoleracea和稻瘟病菌Pyricularia grisea6种病原菌为指示菌种,对孜然种子中的杀菌活性成分进行了跟踪分离及活性测定。采用柱层析分离技术,从孜然种子乙醇浸膏石油醚萃取液中分离得到两个具有杀菌活性的化合物,其结构经质谱、核磁共振氢谱及碳谱等分析确定其分别为枯茗酸(对异丙基苯甲酸,p-isopropyl benzoic acid)和枯茗醛(对异丙基苯甲醛,p-isopropyl benzaldehyde)。采用菌丝生长速率法测定了两化合物对油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum和辣椒疫霉Phytophthoracapsici的毒力,其中枯茗醛对两种病原菌的EC50值分别为2.093和15.40mg/L,枯茗酸的EC50值分别为7.298和19.66mg/L。

维药孜然不同提取物抑菌作用的研究

本文对孜然挥发油、孜然醇提物、孜然水提物、孜然醇后水提物,用Bauer-Kirby法实验探讨了各提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等7种细菌和酵母菌的抑菌效果。结果表明,这几种提取物表现出不同的抑菌能力。采用琼脂稀释法探得出孜然挥发油和孜然醇提物的最低抑菌浓度(MIC)。孜然挥发油对细菌和酵母菌的MIC为2%～1%,孜然醇提物对细菌和酵母菌的MIC多数为100mg/ml。

不同产地孜然风味物质和黄酮等成分分析

对8个不同产地孜然的一些化学成分含量进行分析,精油、粗脂肪和总黄酮含量范围分别为2.608%～4.062%、14.87%～23.25%和4.147%～5.746%。巴依阿瓦提乡孜然品质较好,其精油含量4.062%位居第一,粗脂肪22.84%、总黄酮含量5.372%二者都位居第二,经对其氨基酸的组分分析,其总氨基酸含量为17.54%,氨基酸种类有17种,含必需氨基酸7种,谷氨酸和天门冬氨酸这两种呈味氨基酸含量特别高,占了总氨基酸的34%,说明孜然是非常好的增鲜辛香调味料。

微波加热吹气吸附法提取/气-质联机分析孜然芹挥发油

采用微波加热吹气吸附法从孜然芹籽中提取孜然芹精油,萃取率4.45%。对采用气-质联机对所得精油的挥发性成分进行分析,共鉴定出34种物质,总相对含量为95.14%,主要成分为枯茗醛(27.05%)、枯茗醇(25.14%)、β-水芹烯(13.34%)、γ-松油烯(12.45%)、对伞花烃(12.27%)等。

孜然精油的提取及其清除DPPH自由基能力研究

在光、热以及氧气存在下，物质化学键断裂，生成高反应活性的自由基或者过氧化物，导致食品变质，商品变性，质量下降。为了保证食品质量与安全，保证产品不变质，添加抗氧化剂是常用的方法。随着人们环保意识的提高，越来越倾向于用天然抗氧化剂取代合成抗氧化剂。当使用天然抗氧化剂，

孜然精油成分以及对亚硝酸钠的消除作用研究

以水蒸汽蒸馏法提取孜然,获得2.6%的精油,用GC-MS对精油进行了成分分析,检测出28个成分,解析鉴定了占精油99.801%的26个成分。主要成分枯茗醛占总精油含晕的39.511%。其次为2-蒈烯-10-醛(17.707%)和3.蒈烯.10.醛(17.542%)。对NaNO_2的消除作用研究结果显示,孜然精油具有明显的消除NaNO_2作用,最大消除率为92.5%。水蒸汽蒸馏后残渣丙酮、甲醇、乙醇萃取物也显示了消除NaNO_2活性,最大消除率分别为:71.1%、58.7%、45.5%。

光照、温度和土壤水分对孜然芹种子萌发和幼苗生长的影响

连续光照和连续黑暗条件下,孜然芹种子萌发最适宜温度为25℃;16h光照/8h黑暗的条件下,萌发最适温度为20℃和25/16℃的日夜变温。种子萌发最适宜土壤含水量为15%。

超声雾化在线提取气相色谱法测定孜然中挥发性成分

建立了在线超声雾化提取气相色谱法测定孜然中枯茗醇的方法。利用超声雾化提取法的优势,使样品中的挥发性化合物直接进入提取瓶的顶空气相,再由载气载带入气相色谱仪进行检测。将提取与检测有效地结合起来,减少了提取过程中挥发性成分的损失和基质干扰并简化了实验步骤。实验的最优条件为10mL乙醇提取5min;管路温度80℃;载气流速270mL/min,静置1min后进样10s。测定了3种不同产地孜然中的枯茗醇,其含量在13.3～17.7mg/g之间,回收率为95.0%～115.5%。

新疆孜然地方品种的农艺性状分析

对新疆孜然地方品种主要农艺性状的平均值进行性状比较、相关分析和聚类分析。结果表明,以变异系数为依据进行分析,7个农艺性状的变异系数为4.2%-38.8%,表现为二级分枝数〉单株伞形花序数〉一级分枝数〉株高〉主角果粒数〉千粒重〉生育期,表明这些性状品种间差异较大,可用于杂交和育种选择。简单相关分析中,有5对性状相关显著,其中株高与单株伞形花序数、二级分枝数、主角果数呈显著正相关,千粒重与生育期、株高、二级分枝数、单株伞形花序数、主角果粒数均呈正相关。供试材料在遗传距离0.67水平上可聚为4个大类,可区分为矮秆生育期长千粒重较高、矮秆一级分枝数多、高秆单株伞形花序数多、二级分枝数和主角果数多千粒重高4种类型。

孜然芹产量构成因素的研究

通过对孜然芹的7个产量构成因素进行相关分析、通径分析和回归分析。相关分析的结果表明,单株产量与复伞形花序数、小伞形花序数、分枝数、有效分枝数、株粒数及千粒重具极显著正相关,相关系数依次为0.9040**,0.8860**,0.8409**,0.8336**,0.8659**,0.3925**。回归分析和通径分析结果表明,株高、分枝数、株粒数和千粒重是影响孜然芹单株产量的关键因素,其中株粒数、千粒重对单株产量的直接作用较大。

新疆孜然种质资源的ISSR标记分析

应用ISSR标记对24份孜然种质资源进行DNA多态性分析。从38条引物中筛选出12条多态性引物，共扩增出118条带，其中39条多态性带；引物等位位点数在6～16个，平均每个引物扩增出9．83条带，引物等位位点多态性信息含量（PIC）变幅为11．11％-62．50％，平均35．14％。24个品种间的Nel’s遗传相似系数变化范围为0．33～0．90，平均为0．73。聚类结果表明各类群与地域来源联系不明显，说明孜然种质资源在新疆范围内有比较频繁的交流。

新疆和田产孜然挥发油成分和生物活性研究

[目的]对新疆和田产孜然挥发油进行成分分析和生物活性研究。[方法]利用水蒸气蒸馏法提取新疆和田产孜然种子中的挥发油,采用气相色谱-质谱法(GC-MS)联用技术结合标准谱库对挥发油成分进行鉴定。[结果]共检测出48个峰,鉴定出38种化合物,占总挥发油的98.55%,主要成分为枯茗醛(39.03%)、1-甲基-2-枯烯(12.85%)、3-蒈烯-10-醛(9.15%)和4-乙基-3-壬烯-5-炔(8.28%)。孜然挥发油有较好的抑菌、杀菌和抗氧化作用,其中对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度均达到1.25μl/ml。[结论]该研究为进一步开发新疆和田产孜然提供了科学依据。

孜然芹子叶愈伤组织诱导及继代培养研究

探讨孜然芹种子表面消毒的适宜方法,以孜然芹无菌苗子叶为外植体,研究最适宜愈伤组织诱导及继代培养的激素种类及浓度。结果表明:孜然芹种子经7 0%酒精1 0 s+0.1%升汞5 0 s,2 0 d萌发率可达97.70%,污染率11.11%;子叶切段在光照时间16 h/d,MS+2,4-D 2 mg/L的愈伤组织诱导启动培养基中,30d愈伤诱导率达100%,继代培养在MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.2 mg/L培养基中光照16 h/d培养20 d,愈伤组织增殖率达67%,愈伤组织在同种继代培养基中暗培养20 d,增殖率达80%。

孜然香气与精油成分比较研究

采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法萃取和分析孜然粉末香气,共检测出19种成分,解析鉴定出占总挥发性成分99.695%的18种成分,主成分是两种蒈烯醛异构体(33.174%)、γ-松油烯(17.858%)、枯茗醛(17.280%)、β-蒎烯(13.940%)和对伞花烃(6.541%)。以水蒸汽蒸馏法提取孜然,精油的得率为2.6%,用GC-MS联机对精油进行了成分分析,检测出28个成分,解析鉴定了占精油99.801%的26个成分。主要成分为枯茗醛(39.511%)和两种蒈烯醛异构体(35.249%),其次为γ-松油烯(7.096%)、α-7-松油烯醇(5.315%)、β-蒎烯(5.242%)和对伞花烃(3.000%)。