DPPA2和Cyclin H在胃癌组织中的表达及临床意义

目的检测发育多能性相关基因2(DPPA2)及细胞周期蛋白H(Cyclin H)在人胃癌组织中的表达,探讨其临床病理关系。方法收集60例胃癌患者的癌组织和癌旁组织,然后将每个组织块切成两部分,一部分组织用石蜡包埋,剩余部分组织立即装入冻存管放于超低温冰箱中冻存,采用免疫组织化学及免疫印迹方法检测两种组织内的DPPA2和Cyclin H表达水平,并结合患者资料进行临床病理相关性分析。结果通过免疫组织化学检测发现DPPA2和Cyclin H在胃癌组织中的阳性率分别为91.7%(55/60)和90.0%(54/60),而两种蛋白在对应癌旁组织中的阳性率分别为8.30%(5/60)和6.67%(4/60),DPPA2和Cyclin H在胃癌组织内的表达水平明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05),且DPPA2在胃癌组织内的含量与肿瘤分化程度、淋巴结转移及浸润深度具有关联性,Cyclin H在胃癌组织内的含量与淋巴结转移具有关联性(P<0.05)。免疫印迹检测结果显示,DPPA2和Cyclin H在胃癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论DPPA2和Cyclin H在人胃癌组织中呈现高水平表达,对胃癌的发生、发展及患者预后具有重要意义,可以作为胃癌恶性程度和预后不良的标志,在临床诊断治疗方面具有重要指导意义。

Developmental expression of Cyclin H and Cdk7 in zebrafish: the essential role of Cyclin H during early embryo development

Cyclin 依赖的 kinase (Cdk7 ) 7 是激活 metazoanCdk kinase (CAK ) 的催化子单元。Cdk7 的激活与一个规章的子单元要求它的协会， Cyclin H。尽管 Cdk7/Cyclin H 建筑群在几种在 RNA 的规定被含有，他们在斑马鱼的 orthologs 的精确功能充分没被阐明。在这研究，我们从斑马鱼胞胚胚胎孤立编码人的 Cyclin H 和 Cdk7 的 theorthologs 的二 cDNAs，并且在 zebrafishembryogenesis 检验了 Cdk7/Cyclin H 的角色。顺序分析证明斑马鱼 Cyclin H 和 Cdk7 cDNAs 与 65% 和 86% 身份编码蛋白质到各自的人的 orthologs。RT-PCR 并且在他们在建议的成年的鱼的未受精卵，胚胎和机关的表示的 situhybridization 分析整个山那 Cyclin H 和 Cdk7 消息是装载的似母亲。我们的数据也证明他们的抄本在整个开发被检测。抄本被发现在开发的早阶段期间无所不在并且变得的 Cyclin H 的分发限制了为前面的神经试管，大脑，眼睛，生到 5 天的纸巾，肝和心授精以后。Cyclin H 的 adominant 否定的形式的表示在早胚胎推迟了 zygotic 抄写的发作，导致在授精以后、导致的 5 个小时的 apoptosis 在通常展出 Cyclin H 的高水平的纸巾切断缺点表示。这些结果含有在 transcriptional 机械的规定的 Cyclin H 在中间的胞胚期间转移并且建议它是在早斑马鱼的必要基因幼虫的开发。

胃癌PCNA、CyclinD_(1)、H-ras表达与临床意义

目的 :探讨 PCNA、Cyclin D1 、H- ras在胃癌中的表达规律与临床意义。方法 :运用 SP免疫组织化学技术对 6 8例胃癌标本进行检测。结果 :胃癌 PCNA L I平均为 6 1.88± 16 .0 0 ,显著高于正常粘膜 ,良性溃疡和癌旁粘膜。 Cyclin D1 在胃癌中的阳性率为 80 .88% ,Cyclin D1 高表达与淋巴结转移呈正相关 ;H- ras在胃癌阳性表达率为73.5 3% ,与 Cyclin D1 表达相似 ,H- ras过表达与淋巴结转移呈正相关 ;H- ras与 Cyclin D1 之间显示出正相关 ,P值<0 .0 0 1;PCNA与预后关系密切 (P<0 .0 0 1) ,PCNA L I越高 ,术后生存时间越短 ,预后越差。结论 :(1) PCNA是反映细胞增殖状态的良好指标 ,PCNA L I对估计胃癌恶性程度 ,判断预后及指导临床治疗有重要价值 ;(2 ) H- ras,CyclinD1 过表达是胃癌发生的早期变化 。

斑马鱼cdk7和cyclinH基因的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

构建了两个表达斑马鱼cdk7(基因片段)和cyclinH(基因全长)的重组质粒,分别转化大肠杆菌BL21进行原核表达,所得的CDK7和cyclinH两个融合蛋白均以包涵体形式存在。经SDS-PAGE分离,切下含有目的蛋白条带的凝胶冻成干粉,分别免疫新西兰大耳兔,制备并纯化了分别抗CDK7和抗cyclinH的两个多克隆抗体。经酶联免疫吸附测定、蛋白质印迹分析检测,确定获得了两种具有较高效价的特异性多克隆抗体。免疫荧光组织化学结果显示,CDK7和cyclinH这两个蛋白质均普遍存在于斑马鱼胚胎动物极的各个细胞中。

斑节对虾cyclinH基因的原核表达和蛋白纯化

cyclin H是细胞分裂周期调控中的重要因子,研究斑节对虾cyclin H对阐明斑节对虾卵巢发育机制有重要意义。构建了斑节对虾cyclin H的重组表达质粒p ET21a/cyclin H,利用原核表达技术进行诱导表达获得目的蛋白,并用亲和层析技术进行纯化,用SDS-PAGE、Western blot和质谱联用分析诱导和纯化结果。结果表明,斑节对虾cyclin H重组蛋白获得了表达,纯化的蛋白经鉴定为cyclin H重组蛋白;在22℃和37℃培养条件下,重组蛋白在LA和YTGA两种培养基上均能被诱导表达;22℃条件下,部分融合蛋白为可溶性表达;在37℃培养条件下LA培养基获得较好的效果,且均以包涵体形式存在。

细胞周期素H在食管癌中的表达及临床意义

目的探讨细胞周期素H(CCN H)在食管癌中的表达及临床意义。方法用western blot检测8例配对的食管癌和癌旁组织中CCN H蛋白表达水平;免疫组化检测98例食管癌石蜡切片中CCN H蛋白表达情况;Kaplan-meier生存曲线分析患者的生存率;Cox模型多因素分析CCN H的表达与患者临床预后的相关性。结果 western blot结果表明,CCN H在食管癌细胞核中的表达显著高于癌旁组织(P<0.05);免疫组化结果表明,CCN H在低分化的食管癌细胞核中表达较高,且与分化程度有关(χ2=25.10,P<0.05);生存曲线分析显示,CCN H高表达与食管癌患者生存率相关(χ2=11.61,P<0.05),但CCN H不能作为独立的食管癌预后指标(P>0.05)。结论 CCN H在食管癌中表达上调,且与食管癌的发生、发展密切相关。

细胞周期素H在食管磷癌中的表达

目的:探讨食管鳞癌组织中细胞周期素H的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学SP法对39例食管鳞癌组织和9例癌旁正常食管组织检测细胞周期素H的表达;利用HPIAS-2000图像分析系统测定细胞周期素H在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率.对所获得的检测结果进行图像分析处理.结果:①经单因素方差分析,Cyclin H的表达组间有统计学差异(P<0.05).经q检验,正常食管组织与低分化食管鳞癌、中分化食管鳞癌及高分化食管鳞癌比较,Cyclin H的平均光密度及阳性面积率有统计学差异(P<0.05),低分化食管鳞癌、中分化食管鳞癌及高分化食管鳞癌间比较,Cyclin H的平均光密度及阳性面积率亦有统计学差异(P<0.05).②各年龄组、性别组和临床分期,组间Cyclin H的表达无统计学差异(P>0.05),淋巴结转移阳性与阴性组间CyclinH的表达有统计学差异(P<0.05);而与年龄、性别及临床分期无关.结论:细胞周期素H与食管鳞癌的发生和发展过程有密切关系.

小分子化合物H-131抑制胃癌细胞增殖及机制

目的研究小分子化合物H-131对人胃癌细胞SGC7901、BGC823、MKN-45增殖的抑制作用及其相关机制。方法应用不同浓度的化合物H-131处理人胃癌细胞SGC7901、BGC823和MKN-45,采用MTT法检测该化合物对细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞周期的影响,Western blot检测化合物对周期调控蛋白Cyclin D1和CDK4表达的影响。结果化合物H-131能够以剂量依赖的方式抑制人胃癌细胞SGC7901、BGC823及MKN-45的增殖,并且能够抑制上述细胞G1期向S期的转化。Western blot结果显示H-131能够以剂量依赖的方式下调胃癌细胞SGC7901中Cyclin D1和CDK4的蛋白表达水平。结论化合物H-131能够通过下调胃癌细胞中Cyclin D1和CDK4的表达水平,抑制胃癌细胞G1期向S期的转化,进而抑制胃癌细胞增殖。

拟穴青蟹Sp-cycH基因的分子克隆与表达分析

细胞周期蛋白H(cyclin H,cycH)是细胞周期蛋白依赖性激酶活化激酶(CAK)的重要组成元件,在细胞分裂过程中扮演着重要的作用.本研究从拟穴青蟹(Scylla paramamosain)性腺EST文库中筛选出cyc H基因片段,继而克隆出其全长cDNA(Sp-cyc H)序列,并利用qRT-PCR技术检测其在不同组织和性腺不同发育阶段中的差异表达.结果显示,Sp-cycH全长c DNA序列为1 523bp,其中5'UTR为152bp,3'UTR为372bp,ORF为999bp,可编码332个氨基酸,该序列包含典型的cyclin box序列,进一步比对结果显示其属于cyclinH家族.不同组织的qRT-PCR结果显示,Sp-cyc H在卵巢中的表达量最高,与其他组织具有极显著差异(P<0.01);性腺不同发育阶段的表达结果显示,Sp-cycH在O5期卵巢中的表达量显著高于精巢和卵巢的其他各发育时期(P<0.05);在O4和T2、T3时期的表达量亦显著高于O2期和T1期(P<0.05),据此推测Sp-cyc H对拟穴青蟹的性腺发育可能发挥一定作用.

三疣梭子蟹细胞周期蛋白H基因克隆及其在卵巢发育中的表达分析

Cyclin H作为细胞周期调控活动中的关键因子,通过与相应的细胞周期蛋白依赖性激酶(Cdks)结合来调控细胞周期中的各个环节,而三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)卵巢发育过程中存在旺盛细胞分裂活动的阶段,关于其卵巢发育的分子机制研究依旧较少。本实验通过SMART RACE方法,获得三疣梭子蟹cyclin H基因cDNA序列全长。并通过实时荧光定量PCR对其进行三疣梭子蟹卵巢发育相关的表达分析。结果发现,基因全长1 077bp,开放阅读框(ORF)、5’及3’非编码区(UTR)长度分别为999、31和46bp。预测编码一个包含332个氨基酸,分子量、等电点分别为38.89和6.20kDa的蛋白质,蛋白序列包含一个周期蛋白盒保守结构域。同源分析表明,三疣梭子蟹Cyclin H蛋白序列其他甲壳动物有着较高的同源性,与拟穴青蟹(Scylla paramamosain)和斑节对虾(Penaeus monodon)的同源性分别为95%和80%。表达分析后结果显示,cyclin H基因在卵巢中的表达量最高且在Ⅰ期和Ⅱ期卵巢中的表达量显著高于其他卵巢发育时期,去眼柄后该基因在卵巢中的表达量于第4天达到最大值且显著高于对照组,呈现先升高后降低的趋势(P<0.05)。研究结果为深入开展三疣梭子蟹和其他甲壳动物性腺发育调控研究提供了重要信息。

碱基错配长PCR引物法检测CCNH基因rs3093816位点的多态性

目的:细胞周期蛋白H(CCNH)基因rs3093816位点的多态性与许多癌症的发生风险升高有关,但由于此位点缺少合适的限制性内切酶位点,使聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)的使用受到限制。因此,本研究拟建立碱基错配长PCR引物法用于检测CCNH基因rs3093816位点。方法:通过创造性酶切位点PCR-RFLP方法在CCNH扩增产物中引入新的酶切位点,然后利用Cvi Q I酶区分PCR产物。本研究同时设计了碱基错配长PCR引物和碱基错配相对短PCR引物,比较分析碱基错配长PCR引物是否更简便经济。结果:与短引物法相比,长引物占扩增总片段的比例越大,酶切产物越容易区分,凝胶电泳需要的时间越短。结论:成功建立了错配长PCR引物法检测CCNH基因rs3093816位点。

细胞周期素H和细胞周期素依赖性激酶7在人乳腺癌组织中的表达及其意义

目的研究人乳腺癌组织中细胞周期素H(cyclinH)和细胞周期素依赖性激酶 7(CDK7)蛋白表达以及术前化疗对其表达的影响。方法应用固定化蛋白质印迹法检测 40例乳腺癌及相应正常乳腺组织cyclinH和CDK7蛋白表达。结果乳腺癌组织cyclinH和CDK7表达水平明显高于正常乳腺组织 (t值分别为 9 5 2 4和 2 984,P <0 0 1)。Ⅲ期乳腺癌与Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌相比 ,差异有显著性 (t值分别为 6 0 3和 4 6 9,P <0 0 5 ) ;直径大于 5cm的乳腺癌cyclinH表达水平高于直径小于 2cm者 (t=4 49,P <0 0 5 )。术前行化疗的乳腺癌cyclinH蛋白表达水平明显下降 (t =6 .5 2 ,P <0 0 5 )。结论 cyclinH和CDK7在乳腺癌中呈过度表达 。

细胞周期素H及细胞周期素依赖性激酶-7在皮肤血管瘤组织中的表达及意义

目的探讨细胞周期素H（cyclinH）、细胞周期素依赖性激酶-7（CDK-7）在人皮肤血管瘤组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学方法分别检测皮肤血管瘤组织中增生期、退化期及正常皮肤组织中cyclinH和CDK-7蛋白的表达，并结合第Ⅷ因子相关抗原的免疫组织化学染色证实表达cyclinH和CDK-7蛋白的细胞是血管内皮细胞。利用计算机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织cyclinH和CDK-7表达的平均吸光度A值和平均阳性面积。结果增生期血管瘤内皮细胞cyclinH和CDK-7的表达水平明显高于退化期及正常皮肤组织，差异有统计学意义（P〈0．01）；退化期与正常皮肤组织血管内皮细胞cyclinH和CDK-7表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CDK7和cyclinH在增生期血管瘤组织中促使内皮细胞大量增生，使血管瘤不断生长，提示CDK7和cyclinH在血管瘤的发生、发展中起了重要作用。

细胞周期素H在乳头状甲状腺癌中的表达

目的探讨乳头状甲状腺癌组织中细胞周期素H的表达及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测46例乳头状甲状腺癌组织和26例正常甲状腺组织细胞周期素H的蛋白表达;对所获得的检测结果进行图像分析处理。结果乳头状甲状腺癌组织和正常甲状腺组织之间,细胞周期素H的阳性表达差异有显著性(P<0.05);且有淋巴结转移的乳头状甲状腺癌组织和无淋巴结转移的乳头状甲状腺癌组织之间,细胞周期素H的阳性表达差异也有显著性(P<0.05)。结论细胞周期素H与乳头状甲状腺癌发生发展密切相关。