CASP 8基因-6526NI/D多态性与2型糖尿病易感性的关系

目的：分析半胱氨酸蛋白酶8（CASP8）基因-6526NI／D多态性与2型糖尿痛（T2DM）易感性的关系。方法：采用PCR—RFLP技术结合DNA测序检测414例正常人和410例2型糖尿患者CASP8基因-6526NI／D的多态性。结果：对照组和糖尿病组I／I、I／D和D／D的基因型频率分别为56．5％、38．9％、4．6％和58．0％、32．9％、9．0％．差异有统计学意义（P〈0．05）。D／D基因型发生T2DM的风险为I／I基因型的1．916倍（95％CI=1．199-3．054，P〈0．05）。D／D基因型的空腹血糖高于I／D和I／I基因型（P〈0．05）。结论：CASP8基因-6526NI／D多态性与2型糖尿病的发生相关。

FGF-1对TGF-β_1诱导的H9c2心肌细胞凋亡与Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9表达的关系研究

目的观察酸性成纤维细胞生长因子(FGF-1)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用及对半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,并探讨可能机制。方法体外培养H9c2细胞,随机分为5组:模型组,肝素(Heparin)组、FGF-1组、FGF-1/Heparin组和正常对照组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色分析检测H9c2细胞的存活率,TUNEL染色检测H9c2细胞凋亡指数和Western blot分析检测H9c2细胞Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9的表达。结果模型组H9c2细胞存活率与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),模型组降低;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞存活率与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组均升高。模型组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),模型组升高;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组降低。结论FGF-1对TGF-β_1诱导的H9c2心肌细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达有关。

半胱氨酸蛋白酶8基因-652 6N I/D多态性与高脂血症的相关性

目的分析半胱氨酸蛋白酶8（CASP8）基因-652 6N I/D多态性与高脂血症的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术结合DNA测序的方法对四川地区350例正常人和357例高脂血症患者进行CASP8基因-652 6N I/D基因型检测。结果正常对照组和高脂血症组I/I、I/D和D/D的基因频率分别为54.3%、41.4%、4.3%和55.2%、36.1%、8.7%,两组基因型频率差异有统计学意义（P=0.038）;但两组等位基因I和D的频率差异无统计学意义。与I/I基因型或合并I/I与I/D基因型相比,D/D基因型发生高脂血症的风险增加,OR值分别为1.993（95%CI为1.043~3.810,P=0.034）和2.124（95%CI为1.125~4.008,P=0.018）,且高脂血症患者中D/D基因型者血清甘油三酯水平高于I/D和I/I基因型者。结论 CASP8基因-652 6N I/D多态性与四川地区高脂血症的发生相关。

参附注射液辅助治疗对急性心肌梗死大鼠NOD样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1介导的细胞焦亡信号通路以及炎性因子水平的影响

目的探讨参附注射液辅助治疗对急性心肌梗死(AMI)大鼠NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)介导的细胞焦亡信号通路以及炎性因子水平的影响。方法40只大鼠随机分为假手术组、模型组、倍他乐克组(0.9 mg/kg)和联合组(倍他乐克0.9 mg/kg联合参附注射液6 mL/kg),每组10只,连续灌胃3周。检测造模前、造模后和治疗3周时大鼠血清肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。造模后和治疗3周时,比较各组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)等心脏彩超参数以及心肌梗死面积。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)及Western blot检测心肌梗死面积NLRP3、Caspase-1的mRNA及其蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组造模后和治疗3周时cTnI、CK-MB、IL-6、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,倍他乐克组和联合组治疗3周时cTnI、CK-MB、IL-6、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达量均降低,且联合组上述指标均低于倍他乐克组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参附注射液辅助治疗AMI能够进一步减轻心肌细胞损伤,缩小梗死面积,抑制炎症反应和细胞焦亡活性。

原发性胆汁性胆管炎患者PBMC中Caspase-1与IL-18水平观察

目的研究原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)与白细胞介素-18(IL-18)的水平变化。方法选取安徽医科大学附属宿州医院2018年4月至2019年4月收治的54例PBC患者纳入研究对象,设为观察组,另外选取我院同期体检健康的志愿者54名纳入研究对象,设为健康组。患者(治疗前)与志愿者入院后抽取EDTA-K2抗凝全血,分离PBMC后行定量PCR扩增,检查Caspase-1、IL-18的mRNA水平。对比两组及不同肝硬化分级患者Caspase-1、IL-18水平差异,随后通过Spearman系数分析Caspase-1、IL-18水平与肝硬化分级的相关性。结果观察组Caspase-1、IL-18水平高于健康组(P<0.05)。不同患者Caspase-1、IL-18水平观察,C级>B级>A级,差异均有P<0.05。Caspase-1、IL-18水平与肝硬化分级呈正相关(均P<0.05)。结论PBC患者PBMC内Caspase-1、IL-18水平明显增高,且Caspase-1、IL-18水平表达与肝硬化分级呈正相关,Caspase-1、IL-18可能参与疾病的发生、发展过程。

caspase-3和caspase-8在铅中毒大鼠心肌细胞中的表达特点研究

目的构建铅中毒大鼠模型,观察心脏中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(cysteinyl aspartate specific proteinase-8,caspase-8)蛋白及mRNA的表达特点。方法 40只SD(Sprague Dawley)大鼠在适应性喂养2周后采用数字表法随机分为正常组(无铅水)、低剂量铅中毒组(0.5g/L醋酸铅水溶液)、中剂量铅中毒组(1g/L醋酸铅水溶液)和高剂量铅中毒组(2g/L醋酸铅水溶液),中毒1个月后处死,收集血液和心脏,检测血铅、心铅、心功能指标[肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)]、血清炎性指标[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和白介素-8(interleukin-8,IL-8)]和心肌caspase-3和caspase-8蛋白及mRNA的表达特点。结果心肌组织病理学显示,正常组心肌纤维排列整齐,低剂量铅中毒和中剂量铅中毒组有一定紊乱,高剂量铅中毒组则明显排列无序,细胞界限不清晰;与正常组比较,低剂量、中剂量和高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8明显升高(P<0.05),与低剂量铅中毒组比较,中剂量和高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8明显升高(P<0.05),此外高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8也明显高于中剂量铅中毒组(P<0.05);与正常组比较,低剂量和中剂量铅中毒组CK、CK-MB、LDH、caspase-3与caspase-8蛋白和mRNA表达差异无统计学意义,高剂量铅中毒组明显升高(P<0.05),此外高剂量铅中毒组明显高于低剂量和中剂量铅中毒组(P<0.05)。结论 2g/L醋酸铅水溶液中毒大鼠可引起其心肌中caspase-3和caspase-8表达异常,诱发血液炎性介质TNF-α、IL-6和IL-8的升高,最终造成心肌损伤。

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8、2和Caspase-8在乳腺肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨乳腺肿瘤组织中肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(TNFAIP8)、肿瘤坏死因子α诱导蛋白2(TNFAIP2)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶8(Caspase-8)的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测45例乳腺癌及35例乳腺腺瘤组织中TNFAIP8、TNFAIP2、Caspase-8的表达并分析其相互关系和临床意义。结果 TNFAIP8、TNFAIP2在乳腺癌组织中的阳性表达率均高于乳腺腺瘤组织(P<0.05),Caspase-8在乳腺癌组织中的阳性表达率低于乳腺腺瘤组织(P<0.05)。乳腺肿瘤组织中TNFAIP8的表达与Caspase-8的表达呈负相关(r=-0.612,P<0.05),TNFAIP2的表达与Caspase-8的表达呈负相关(r=-0.647,P<0.05)。TNFAIP8、TNFAIP2、Caspase-8的表达水平与年龄、部位无关(P>0.05),与癌细胞浸润、淋巴结转移相关(P<0.05)。结论乳腺癌的发生发展可能与TNFAIP8、TNFAIP2的高表达及Caspase-8的低表达有关。

象皮生肌膏对肛瘘术后模型大鼠创面修复及细胞凋亡的影响

目的探讨象皮生肌膏对肛瘘术后模型大鼠创面凋亡因子胱天蛋白酶(cysteine aspartic acid specific protease,Caspase)的影响。方法36只SD大鼠建立肛瘘模型后,随机选取27只肛瘘大鼠构建肛瘘术后创面模型,随机分为象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组、模型组,每组9只,剩余9只肛瘘大鼠为假手术组。象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组使用生理盐水冲洗创面后外敷相应药物,模型组仅使用生理盐水冲洗创面,假手术组无特殊处理,每日1次,连续干预10 d。造模后3、5、7、10 d,观察创面愈合情况,计算创面愈合率。药物干预10 d后,从各组取创面组织,HE染色观察创面组织病理学变化,TUNEL法检测创面组织中细胞凋亡数目,免疫组织化学法检测创面组织中Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9、Caspase-12蛋白的表达。结果与模型组相比,象皮生肌膏组在干预后3、5、7、10 d时创面愈合率均显著升高(P<0.05,P<0.01),湿润烧伤膏组在干预后5、7、10 d时创面愈合率均显著升高(P<0.05,P<0.01),而象皮生肌膏组创面愈合率在干预后7、10 d均明显高于湿润烧伤膏组(P<0.01)。与假手术组比较,象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组、模型组细胞凋亡率均显著升高(P<0.01),创面组织中Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9、Caspase-12蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组细胞凋亡率均显著降低(P<0.01),Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9、Caspase-12蛋白表达水平均显著下降(P<0.01);与湿润烧伤膏组比较,象皮生肌膏组细胞凋亡率均显著降低(P<0.01),Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9、Caspase-12蛋白表达水平均显著下降(P<0.01)。结论象皮生肌膏能通过抑制肛瘘术后创面组织细胞凋亡,抑制凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9、Caspase-12的表达,促进创面愈合。

达格列净通过Caspase-1介导的细胞焦亡对糖尿病肾病小鼠肾损伤的影响

目的基于胱天蛋白酶-1(Caspase-1)通路介导的细胞焦亡作用,探究达格列净(DAP)对糖尿病肾病(DN)小鼠肾损伤的影响。方法取30只SPF级C57BL/6雄性小鼠,8周龄,体重17~25 g,根据随机数字表法将其分为对照组、模型组、DAP组,每组10只。模型组、DAP组建立DN模型,对照组给予普通饲料。DAP组灌胃给予1 mg/(kg·d)DAP,对照组及模型组均灌胃给予等量生理盐水,连续给药4周。药物干预后比较各组小鼠的一般情况,血肌酐、24 h尿蛋白、血清白细胞介素-18(IL-18)水平;观察肾脏病理学变化;比较小鼠肾组织Caspase-1通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组精神萎靡,活动减少,偶有颤抖,尿量显著增多,体型较瘦;与模型组比较,DAP组有多饮多食现象,尿量增多不明显,活动正常。与对照组比较,模型组24 h尿蛋白、血肌酐、血清IL-18水平及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、Caspase-1、GSDMD、IL-18蛋白水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,DAP组小鼠24 h尿蛋白、血肌酐、血清IL-18水平及NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18蛋白水平均显著降低(P<0.05)。结论DAP可能通过抑制NLRP3/Caspase-1信号通路活化抑制细胞焦亡,保护肾脏。

姜黄素对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜IL-1β表达的影响

目的 观察姜黄素(CUR)对视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)大鼠视网膜白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响,从Toll样受体4/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(TLR4/Caspase-8)通路探讨其机制,为CUR治疗RIRI的临床应用提供科学的理论依据。方法 SPF级健康无眼疾雄性SD大鼠102只,随机分为Sham组(n=10)、RIRI组(n=35)、RIRI+TLR4抑制剂(TAK-242)组(n=11)、RIRI+CUR组(n=35)及RIRI+CUR+TAK-242组(n=11),其中,Sham组、RIRI组及RIRI+CUR组根据建模后时间不同分为建模后6 h、12 h、24 h、72 h及7 d组。采用前房高眼压灌注法建立RIRI模型为RIRI组,Sham组不做特殊处理,RIRI+TAK-242组、RIRI+CUR组、RIRI+CUR+TAK-242组分别于建模前腹腔注射相应药物。免疫组织化学染色检测建模后各时间点各组大鼠视网膜中IL-1β^(+)、TLR4^(+)Caspase-8^(+)细胞数;建模后12 h, Western blot检测各组大鼠视网膜TLR4、Caspase-8及IL-1β蛋白的表达,HE染色观察各组大鼠视网膜形态学变化。结果 免疫组织化学染色结果显示,建模后6 h、12 h、24 h、72 h及7 d,与Sham组相比,RIRI+CUR组IL-1β^(+)、TLR4^(+)细胞数均显著增加;与RIRI组相比,RIRI+CUR组各时间点IL-1β^(+)、TLR4^(+)细胞数均显著降低;与Sham组相比,RIRI组各时间点IL-1β^(+)、TLR4^(+)细胞数均显著增加;以上差异均统计学意义(均为P<0.05)。建模后12 h:与Sham组相比,RIRI组、RIRI+TAK-242组、RIRI+CUR组、RIRI+CUR+TAK-242组IL-1β^(+)、TLR4^(+)、Caspase-8^(+)细胞数以及IL-1β、TLR4及Caspase-8蛋白均显著增加;与RIRI组相比,RIRI+TAK-242组、RIRI+CUR组、RIRI+CUR+TAK-242组IL-1β^(+)、TLR4^(+)、Caspase-8^(+)细胞数以及IL-1β、TLR4、Caspase-8蛋白均显著降低;与RIRI+CUR+TAK-242组相比,RIRI+TAK-242组、RIRI+CUR组IL-1β^(+)、TLR4^(+)、Caspase-8^(+)细胞数以及IL-1β、TLR4、Caspase-8蛋白均显著增加;以上差异均有统计学意义(均为P<0.05)。建模后12 h, RIRI+TAK-242组与RIRI+CUR组IL-1β^(+)、TLR4^(+)、Caspase-8^(+)细胞数以及IL-1β、TLR4、Caspase-8蛋白比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。建模后12 h:与Sham组相比,RIRI组、RIRI+TAK-242组、RIRI+CUR组、RIRI+CUR+TAK-242组大鼠视网膜内层细胞水肿,视网膜内层厚度增加,视网膜神经节细胞(RGCs)数显著减少;与RIRI组相比,RIRI+TAK-242组、RIRI+CUR组、RIRI+CUR+TAK-242组大鼠视网膜细胞形态排列较整齐,视网膜内层厚度变薄,RGCs数减少;与RIRI+CUR及RIRI+TAK-242组相比,RIRI+CUR+TAK-242组大鼠视网膜水肿减轻,视网膜内层厚度显著变薄,RGCs数量减少;以上差异均有统计学意义(均为P<0.05)。RIRI+TAK-242组与RIRI+CUR组大鼠视网膜内层厚度及RGCs数比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 CUR可下调RIRI大鼠视网膜IL-1β的表达,进而减轻大鼠RIRI,发挥神经保护作用,其机制可能与CUR调控TLR4/Caspase-8信号通路有关。

推拿㨰法介导机械敏感性离子通道Piezo1对骨骼肌损伤模型大鼠细胞凋亡的影响

目的观察推拿㨰法对骨骼肌损伤模型大鼠的机械敏感性离子通道Piezo1及细胞凋亡的影响,探讨推拿㨰法治疗骨骼肌损伤的作用机制。方法32只SD大鼠随机分成正常组、模型组、㨰法组、㨰法+抑制剂组,每组8只。采用肌内注射200μL虎蛇毒素(notexin,NTX)(10μg/mL)制备大鼠腓肠肌损伤模型。造模24 h后,㨰法组使用实验动物㨰法器模拟㨰法治疗,滚动频率为140次/min,每天2次,每次3 min,连续治疗3 d;㨰法+抑制剂组在实施㨰法治疗前,给予腹腔注射Piezo1抑制剂GsMTx4(270μg/kg),每天1次,连续注射3 d;正常组和模型组腹腔注射等体积生理盐水。采用平衡木测试进行行为学评估,HE染色观察腓肠肌组织显微结构变化,TUNEL染色计算腓肠肌组织细胞凋亡率,Western blot法检测大鼠腓肠肌组织Piezo1、B淋巴细胞瘤-2(B-lymphoma-2,Bcl-2)、B淋巴细胞瘤2相关X蛋白质(B-lymphoma-2 related X protein,Bax)、胱天蛋白酶-3(cysteine aspartic acid specific protease-3,Caspase-3)表达。结果与正常组比较,模型组和㨰法+抑制剂组平衡木行走时间延长(P<0.01),滑爪次数增加(P<0.01),腓肠肌细胞凋亡率升高(P<0.01),腓肠肌组织Piezo1、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05),肌细胞破裂、坏死、大小不一,排列稀疏、无规律,周围有大量中性粒细胞和淋巴细胞浸润。与模型组比较,㨰法组平衡木行走时间缩短(P<0.01),滑爪次数减少(P<0.01),腓肠肌细胞凋亡率降低(P<0.01),腓肠肌组织Piezo1、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05),肌细胞病理情况好转,有少量细胞破裂、萎缩、坏死,细胞间隔缩小,轻度局灶性炎性细胞浸润。与㨰法组比较,㨰法+抑制剂组平衡木行走时间延长(P<0.01),滑爪次数增多(P<0.01),腓肠肌细胞凋亡率增高(P<0.01),腓肠肌组织Piezo1蛋白表达降低(P<0.05),Caspase-3蛋白表达升高(P<0.01),见较多肌细胞萎缩、坏死、大小不一,排列间隔较大,周围仍有一定数量中性粒细胞和淋巴细胞浸润。结论推拿㨰法可促进骨骼肌运动功能恢复,缓解骨骼肌损伤,其作用机制可能与激活Piezo1,抑制细胞凋亡有关。

清心开窍方挥发油对AD大鼠大脑皮层及海马区GFAP及Caspase-3表达的影响

目的探讨清心开窍方及其挥发油对Aβ25-35杏仁核注射诱导痴呆(Alzheimer′s disease,AD)大鼠皮层及海马区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)、淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,βAPP)及Caspase-3表达的影响。方法选取32只雄性SD大鼠,采用杏仁核注射Aβ25-35诱导AD大鼠模型,造模后随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组[盐酸多奈哌齐片,1.67mg/kg]、清心开窍方组(中药组,清心开窍方煎液12.67mL/kg)和挥发油组(挥发油,3.33mL/kg),另选取8只大鼠作为正常组,正常组、模型组给予等量双蒸水灌胃,各组每天干预1次,连续2周。给药结束后进行Morris水迷宫测试,记录各组大鼠水迷宫测试期间第1～5天逃避潜伏期及跨越平台次数。免疫组织化学法检测各组大鼠大脑皮层与海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3的表达。结果与模型组比较,各用药组大鼠第3～5天逃避潜伏期均缩短,皮层与海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3表达水平降低,跨越平台次数增加,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与西药组比较,中药组皮层及海马区Aβ表达水平降低、βAPP升高,挥发油组皮层及海马区GFAP、βAPP及Caspase-3均升高,挥发油组第3～5天逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论清心开窍方能明显改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能是通过降低皮层及海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3的表达发生作用。

中药复方PRD对OLETF大鼠视网膜细胞凋亡的干预作用

目的:探讨中药复方菩人丹(PRD)对OLETF大鼠视网膜中自杀相关因子(fas)和半胱天冬酶-8(caspase-8)表达的干预作用。方法:将24只成模的OLETF大鼠随机分为PRD治疗组、糖尿病模型组,每组均为12只,同周龄12只雄性LETO大鼠为正常对照组,PRD治疗组大鼠连续灌胃PRD,1.8 g/kg,1次/d,2个月。HE染色观察大鼠视网膜的形态结构改变;TUNEL法检测OLETF大鼠视网膜神经细胞的凋亡情况;免疫组化法和Western Blot方法检测OLETF大鼠视网膜fas和caspase-8表达的蛋白;RT-PCR方法检测各组大鼠视网膜中fas和caspase-8 mRNA的表达情况。结果:与正常对照组LETO大鼠相比,OLETF模型组的大鼠视网膜出现了明显的病理变化,神经细胞的凋亡指数、fas、caspase-8的蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.01)。与模型组大鼠相比,PRD治疗组大鼠视网膜的病理变化明显减轻,神经细胞的凋亡指数、fas、caspase-8蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论:PRD可通过抑制fas、caspase-8的表达,减少糖尿病大鼠视网膜神经细胞的凋亡,从而起到保护糖尿病视网膜神经组织的作用。

X连锁凋亡抑制蛋白通路在金黄色葡萄球菌α-毒素诱导人外周血单核细胞凋亡过程中的作用

目的研究金黄色葡萄球菌的主要毒力因子α-毒素感染人外周血单核细胞后细胞的凋亡率及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、凋亡抑制蛋白1/2(cIAP1/2)、Survivin、Bcl-2、Bax和半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)等的表达。方法以Annexin V异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染流式细胞仪检测人外周血单核细胞的凋亡率,Western blot法检测XIAP、cIAP1/2、Survivin、Bcl-2、Bax和caspase-3等的表达,采用荧光比色法测定细胞内caspase-3蛋白酶活性。结果α-毒素能够以时间依赖的方式诱导人外周血单核细胞凋亡,α-毒素感染30、60和90 min凋亡率与感染0 min比较,其差异有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。随着作用时间的延长,XIAP、cIAP1/2、Survivin和Bcl-2表达逐渐下降,而Bax和caspase-3表达逐渐增加。结论α-毒素可诱导人外周血单核细胞凋亡,XIAP信号通路在金黄色葡萄球菌的致病过程中起重要作用。

黄竹清脑颗粒对痰热腑实证脑出血大鼠急性期脑组织中Caspase-3表达的影响

目的:探讨黄竹清脑颗粒对痰热腑实证脑出血模型大鼠急性期脑组织中半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)表达的影响。方法:采用SD大鼠自体粪便灌胃配合胶原酶Ⅶ-肝素混合液立体定位注射的方法复制痰热腑实证脑出血大鼠模型,免疫组化法测定大鼠脑组织中Caspase-3表达的变化。结果:①黄竹清脑颗粒可明显减轻痰热腑实证脑出血大鼠喉中痰鸣、鼻分泌物多,粪便干结,烦躁等症状,并可改善大鼠脑出血后的神经体征;②黄竹清脑颗粒大、中剂量组明显优于清开灵颗粒组(P<0.05)。结论:黄竹清脑颗粒能降低大鼠脑出血后血肿周围神经元活化caspase-3的表达,阻止神经元的凋亡,可能是其保护脑神经细胞的作用机理之一。

环境高温促进猪睾丸Apaf-1和Caspase-9的表达

高温热应激条件下,凋亡蛋白表达量升高,生殖细胞凋亡增加。凋亡蛋白酶活化因子1（apoptosis protease activating factor 1,Apaf-1）和凋亡蛋白酶活化起始者含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9,（cysteine aspartic acid specific protease 9,Caspase-9）是细胞凋亡内源途径中的重要调节蛋白,热应激条件下猪睾丸Apaf-1和Caspase-9的表达未见报道。本研究发现,夏季畜舍高温使Apaf-1和Caspase-9表达量升高。qRT-PCR和Western印迹结果显示,与对照组（正常舍温20℃）相比,短时热应激组（40-42℃,1 h/d,7 d）和长时热应激组（40-42℃,1 h/d,42 d）,Apaf-1和Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量均显著升高。免疫组织化学研究发现,Apaf-1在猪睾丸组织中免疫反应阳性物定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞。热应激处理导致精母细胞和精子细胞Apaf-1表达量升高。在各实验猪睾丸组织中,Caspase-9定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞的胞质中。与对照组相比,热应激处理导致减数分裂以后的生精细胞和支持细胞Caspase-9表达量升高。上述结果表明,高温热应激促进Apaf-1和Caspase-9的表达,提示Apaf-1和Caspase-9表达的变化可能与猪舍高温导致的猪精液品质下降存在关联。

硫化氢对尿源性脓毒血症肾细胞凋亡的影响及其机制

目的硫化氢(H2S)具有广泛的生物学作用,对肾有一定的保护作用。文中旨在探索H2S对尿源性脓毒血症肾组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达及细胞凋亡的影响,研究尿源性脓毒血症肾损伤的机制。方法将40只新西兰兔随机数字表法分为5组:对照组(给予饲料以及纯净水喂养)、假手术组(游离输尿管上段后关闭腹腔)、脓毒血症组(向输尿管近端注入大肠埃希菌菌液,制作脓毒血症模型)、NaHS组(制作脓毒血症模型后,注射NaHS溶液,促进H2S产生)、D-L炔丙基甘氨酸组(DL-Propargylglycine,PAG)组(制作脓毒血症模型后,经腹腔注射PAG溶液,抑制H2S产生),每组8只。分别记录5组术前、术后24、48、72 h时间点的生命体征、血白细胞计数、中性粒细胞计数和肾功能(肌酐、尿素氮)。术后72 h取左肾组织行HE染色,观察肾组织的细胞形态及结构变化;Tunel法标记肾组织凋亡细胞;ELISA法检测肾组织中p38MAPK和Caspase3的表达量。结果NaHS组凋亡指数[(16.93±2.03)%]明显小于脓毒血症组[(25.26±2.70)%]、PAG组[(33.09±3.70)%],差异有统计学意义(P<0.05);而脓毒血症组明显高于对照组与假手术组[(5.65±0.24)%、(5.57±0.27)%],低于PAG组(P<0.05)。脓毒血症组、PAG组肾组织中p38MAPK、Caspase3蛋白的表达量较对照组、假手术组、NaHS组明显升高(P<0.05);PAG组较脓毒血症组明显升高(P<0.05)。结论H2S对尿源性脓毒血症兔的肾功能具有一定的保护作用,其机制可能与H2S抑制尿源性脓毒血症肾组织中p38MAPK、Caspase3的表达,从而减少肾细胞凋亡有关。

基于Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路探究参红通络方对心肌缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的:探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠细胞凋亡的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型(MI/RI模型),造模成功后第1天起,空白组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、参红通络方剂低、中、高剂量组(1.031、2.063、4.126 g·kg^(-1)参红通络方标准浓缩液)和辛伐他汀组(辛伐他汀0.71 mg·kg^(-1)),定时灌胃给药,每日1次,连续2周。苏木素-伊红(HE)染色法观察心肌细胞病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法检测大鼠心肌细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平。结果:与空白组比较,模型组HE染色可见心肌细胞排列紊乱,纤维不完整,心肌细胞小灶性坏死,并伴有炎性细胞浸润;血清CK-MB、IL-6和TNF-α水平明显上升(P<0.05);心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达水平则明显升高,Bcl-2明显下降(P<0.05);与模型组比较,参红通络方剂加减低、中、高剂量组可明显降低CK-MB、IL-6和TNF-α水平(P<0.05);明显下调心肌细胞凋亡率(P<0.05);Bax、Caspase-3蛋白显著降低,Bcl-2表达水平明显增加(P<0.05)。参红通络方剂加减组中Bax、Caspase-3蛋白随参红通络方给药剂量的增加而明显降低,Bcl-2表达水平随参红通络方给药剂量的增加而明显升高(P<0.05)。结论:参红通络方加减可通过减轻心肌组织病理损伤并降低心肌细胞凋亡,可能与抑制Caspase-3、Bax表达、促进Bcl-2水平表达有关。

电针对帕金森病小鼠Nrf2/NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡的影响

目的:观察电针对帕金森病(PD)小鼠黑质中核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路的影响,探讨其神经保护机制。方法:将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、假电针组、电针组,每组10只。采用鱼藤酮灌胃4周建立PD小鼠模型。电针组于“风府”和双侧“太冲”“足三里”给予电针刺激,每日1次,连续2周;假电针组于同样穴位浅刺至皮下,连接电针仪后不通电,其余操作均同电针组。采用敞箱实验观察各组小鼠的行为学变化,酶联免疫吸附法检测小鼠血清中白细胞介素(IL)-1β和IL-18含量,免疫组织化学法检测小鼠黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性表达,实时荧光定量PCR法检测小鼠黑质中Nrf2、NLRP3、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1β和IL-18mRNA表达水平,Western blot法检测小鼠黑质中Nrf2、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠行为学评分升高(P<0.01),自主运动的总时间缩短、总路程减少、平均速度降低(P<0.01),血清IL-1β和IL-18含量增加(P<0.01),黑质中TH阳性表达减少(P<0.01),Nrf2mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平及IL-1β、IL-18mRNA表达水平均升高(P<0.01)。与模型组、假电针组比较,电针组小鼠行为学评分降低(P<0.01),自主运动的总时间延长、总路程增加、平均速度升高(P<0.01),血清IL-1β和IL-18含量减少(P<0.01,P<0.05),黑质中TH阳性表达增加(P<0.01),Nrf2 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01,P<0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平及IL-1β、IL-18 mRNA表达水平均降低(P<0.01)。与模型组比较,假电针组小鼠上述各项指标差异均无统计学意义。结论:电针“风府”“太冲”和“足三里”可改善PD小鼠运动障碍,减少黑质多巴胺神经元的丢失,抑制神经炎性反应,其作用机制可能与调控Nrf2/NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡相关。

热疗对喉鳞癌患者细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨热疗对喉鳞癌细胞凋亡和胱天蛋白酶3(Caspase-3)及磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)表达的影响。方法对2021年10月至2022年10月于郑州大学第一附属医院就诊的30例喉鳞癌患者进行前瞻性研究, 行3次热疗, 每次间隔24 h。采集30例患者热疗前后的肿瘤组织标本, 分为热疗前组(A组)和热疗后组(B组), 采用自身对照研究进行对比分析, 以TUNEL法检测细胞凋亡情况, 免疫组化检测组织中Caspase-3及p-AKT的表达水平, 分别记录阳性细胞比率及组织化学评分, 两组间的比较采用配对t检验。凋亡程度与Caspase-3及p-AKT分子变化的关联性分析采用Pearson相关分析。结果 30例患者热疗后均无明显不良反应。A组喉鳞癌细胞的凋亡指数为2.37%±1.33%, B组为4.27%±3.93%(P=0.006)。A组肿瘤组织中Caspase-3的阳性细胞比率为62.31%±19.49%, B组为80.79%±17.15%(P=0.001);A组p-AKT阳性细胞比率为31.26%±19.30%, B组为26.26%±15.86%(P=0.023)。凋亡程度的变化与Caspase-3分子的变化之间存在正相关关系(r=0.544, P=0.002), 而与p-AKT分子的变化呈负相关关系(r=-0.434, P=0.017)。结论热疗可以促进喉鳞癌肿瘤组织的细胞凋亡, 可能与Caspase-3依赖性凋亡有关, 而AKT磷酸化受抑制也参与了这一过程。