基于Caspase-3/PARP通路探究龟鹿二仙胶及拆方对IL-1β诱导的退变软骨细胞凋亡及细胞外基质的影响

目的 基于半胱氨酸蛋白酶3/多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Caspase-3/PARP)通路探究龟鹿二仙胶及拆方对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的退变软骨细胞凋亡及细胞外基质(ECM)的影响。方法 采用SD大鼠制备空白血清、龟鹿二仙胶含药血清、龟甲胶含药血清及鹿角胶含药血清,采用酶消法体外培养C57BL/6小鼠软骨细胞。将软骨细胞分为5组,空白组加入空白血清培养,模型组加入IL-1β和空白血清培养,龟鹿组加入IL-1β和龟鹿二仙胶含药血清培养,龟板组加入IL-1β和龟甲胶含药血清培养,鹿角组加入IL-1β和鹿角胶含药血清培养,干预24 h后,采用CCK-8法检测软骨细胞活性,采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况,采用免疫荧光染色法检测Caspase-3、PARP-1表达情况,分别采用Western blot和qRT-PCR法检测细胞中Caspase-3、PARP-1、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)蛋白及mRNA表达情况。结果 与空白组比较,模型组软骨细胞活性明显降低(P<0.05),软骨细胞凋亡率明显升高(P<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,龟鹿组、龟板组及鹿角组软骨细胞活性均明显升高(P均<0.05),软骨细胞凋亡率均明显降低(P均<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与龟板组、鹿角组比较,龟鹿组软骨细胞活性更高(P均<0.05),软骨细胞凋亡率更低(P均<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均更低(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均更高(P均<0.05)。与龟板组比较,鹿角组软骨细胞活性,软骨细胞凋亡率,细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度,细胞中Caspase-3、PARP-1、MMP-13、Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量高均更高(P均<0.05)。结论 龟板胶可抑制软骨细胞凋亡及ECM降解,鹿角胶可促进软骨细胞增殖和ECM合成代谢,龟鹿二仙胶作用效果优于龟板胶及鹿角胶,作用机制可能与激活Caspase-3/PARP信号通路有关。

Capase-12、Capase-3、DAPK1对重症脓毒症患者感染性休克的预测价值分析

目的探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Capase-12)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Capase-3)、死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)对重症脓毒症患者感染性休克的预测价值。方法选取2020年4月—2023年4月本院收治的90例重症脓毒症患者设为观察组,同期本院90例体检健康者设为对照组。比较两组血清Capase-12、Capase-3、DAPK1水平,观察组患者根据是否发生感染性休克将其分为感染性休克组(n=23)、非感染性休克组(n=67),比较两组血清Capase-12、Capase-3、DAPK1水平,绘制受试者工作曲线(ROC),计算曲线下面积(AUC),分析血清Capase-12、Capase-3、DAPK1对感染性休克的预测效能。单因素、多因素Logistic回归分析感染性休克发生的危险因素。结果观察组血清Capase-12、Capase-3、DAPK1水平均高于对照组(P<0.05)。感染性休克组血清Capase-12、Capase-3、DAPK1水平均高于非感染性休克组(P<0.05)。血清Capase-12、Capase-3、DAPK1联合检测诊断感染性休克的AUC是0.863,95%CI 0.768~0.952,灵敏度(95.28%)、特异度(90.76%)均高于单一检测(78.19%、72.82%)、(75.12%、70.34%)、(72.67%、68.19%)(P<0.05)。Logistic回归分析显示,血清Capase-12、Capase-3、DAPK1、器官衰竭数量、低蛋白血症、血容量不足、血清PCT是诱发感染性休克的危险因素(P<0.05)。结论血清Capase-12、Capase-3、DAPK1水平异常高表达与重症脓毒症患者感染性休克的发生有着极为密切的联系,联合检测可提高对感染性休克的预测效能,感染性休克的发生与多种因素有关,应当引起临床重视与关注。

参附注射液辅助治疗对急性心肌梗死大鼠NOD样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1介导的细胞焦亡信号通路以及炎性因子水平的影响

目的探讨参附注射液辅助治疗对急性心肌梗死(AMI)大鼠NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)介导的细胞焦亡信号通路以及炎性因子水平的影响。方法40只大鼠随机分为假手术组、模型组、倍他乐克组(0.9 mg/kg)和联合组(倍他乐克0.9 mg/kg联合参附注射液6 mL/kg),每组10只,连续灌胃3周。检测造模前、造模后和治疗3周时大鼠血清肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。造模后和治疗3周时,比较各组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)等心脏彩超参数以及心肌梗死面积。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)及Western blot检测心肌梗死面积NLRP3、Caspase-1的mRNA及其蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组造模后和治疗3周时cTnI、CK-MB、IL-6、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,倍他乐克组和联合组治疗3周时cTnI、CK-MB、IL-6、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达量均降低,且联合组上述指标均低于倍他乐克组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参附注射液辅助治疗AMI能够进一步减轻心肌细胞损伤,缩小梗死面积,抑制炎症反应和细胞焦亡活性。

SIRT1、FAP-α、caspase-3在结直肠癌中的表达及相关性

目的探究沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、成纤维细胞活化蛋白-α(fibroblast activation protein-α,FAP-α)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteine aspartase-3,caspase-3)在结直肠癌中的表达及相关性。方法收集2021年4月至2022年4月整理归档较为完整的45例为结直肠癌组织石蜡标本,另外选取45例为距离癌组织边缘5 cm的癌旁组织石蜡标本。采取免疫组化法检测SIRT1、FAP-α、caspase-3水平表达,分析SIRT1、FAP-α、caspase-3在结直肠癌中的表达变化及与预后的相关性。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织中SIRT1、FAP-α、caspase-3表达量均有所升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌组织中SIRT1、FAP-α、caspase-3表达与结直肠癌患者的年龄、性别、肿瘤位置、远处转移无关,与淋巴结转移、肿瘤的直径、组织学类别、浸润程度、TNM分期、脉管瘤栓、分化程度有关相关,差异有统计学意义(P<0.05)。SIRT1、FAP-α、caspase-3之间Pearson相关性分析显示,SIRT1、FAP-α之间呈正相关(r=0.534,P=0.001);FAP-α、caspase-3之间呈正相关(r=0.556,P=0.001);SIRT1、caspase-3之间呈正相关(r=0.585,P=0.001)。ROC曲线显示,三项联合对结直肠癌的诊断价值高于SIRT1、FAP-α、caspase-3单项诊断(P=0.001)。结论结直肠癌患者机体内SIRT1、FAP-α、caspase-3水平表达上升,可看出其水平变化与结直肠癌患者产生病症有密切的关联,因此三者可作为预测结直肠癌患者治疗的重要依据。

血清sST2、Caspase-3、HSP70与ACMP患者病情和迟发性脑病的关系

目的探讨血清可溶性致癌抑制因子2(sST2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、热休克蛋白70(HSP70)与急性一氧化碳中毒(ACMP)患者病情和迟发性脑病(DEACMP)的关系。方法选取2020年10月至2022年1月盘锦市中心医院收治的110例ACMP患者作为ACMP组,根据一氧化碳中毒程度分为轻度组、中度组、重度组;另选取同期52例体检健康志愿者作为对照组。随访6个月后,根据ACMP患者是否发生DEACMP分为DEACMP组和非DEACMP组。收集ACMP患者临床资料,采用酶联免疫吸附试验检测血清sST2、Caspase-3、HSP70水平。采用多因素Logistic回归分析ACMP患者发生DEACMP的影响因素,应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sST2、Caspase-3、HSP70对ACMP患者发生DEACMP的诊断效能。结果ACMP组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平均高于对照组(P<0.05)。重度组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平高于中度组、轻度组(P<0.05),中度组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平高于轻度组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄增加、高血压、意识障碍时间>48 h、血CO暴露时间延长、血碳氧血红蛋白(COHb)饱和度升高及血清sST2、Caspase-3、HSP70水平升高是ACMP患者发生DEACMP的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清sST2、Caspase-3、HSP70联合检测诊断ACMP患者发生DEACMP的AUC为0.913,大于sST2、Caspase-3、HSP70单项检测诊断ACMP患者发生DEACMP的AUC(分别为0.783、0.788、0.785),差异有统计学意义(P<0.05)。结论ACMP患者血清sST2、Caspase-3、HSP70水平升高,与中毒程度和DEACMP发生有关,血清sST2、Caspase-3、HSP70水平联合检测诊断ACMP患者发生DEACMP的价值较高。

血清NLRP3炎性小体信号通路相关因子评估急性脑梗死患者脑血栓形成及临床应用价值

目的探讨血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体信号通路相关因子评估急性脑梗死(ACI)患者脑血栓形成及临床应用价值。方法选取2022年1—12月收治的ACI 120例作为观察组,另选取同期健康体检者120例作为对照组。观察组予以机械取栓术治疗,依据是否获取血栓组织分为血栓组和非血栓组2个亚组。比较观察组和对照组血清NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平及血栓组和非血栓组临床资料,分析ACI患者脑血栓形成相关因素,探讨血清NLRP3炎性小体信号通路相关因子评估ACI脑血栓形成和临床应用价值,分析ACI脑血栓形成者临床转归情况。结果血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18水平,观察组高于对照组,血栓组高于非血栓组(P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18均为ACI患者脑血栓形成的独立危险因素(P<0.01)。血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18联合评估ACI患者脑血栓形成的曲线下面积高于单独评估,且联合评估时净获益阈值范围大于单独检测(P<0.05)。血栓组出院时mRS评分4~6分所占比例(22/92,23.91%)高于非血栓组(1/28,3.57%)(P<0.05)。结论ACI患者血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18水平升高,其联合检测对脑血栓形成具有一定评估价值,且具有更高临床净获益。

重组干扰素联合抗生素对宫颈上皮内瘤变LEEP术后HPV-DNA负荷量及Caspase-3、survivin表达的影响

目的观察重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊联合头孢拉定胶囊对宫颈上皮内瘤变(CIN)患者宫颈电环切除术(LEEP)后人乳头状瘤病毒(HPV) DNA负荷量及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 (Caspase-3)、生存素(survivin)蛋白表达的影响。方法选取2016年10月-2018年10月海南省人民医院妇科收治的CIN患者180例作为研究对象,CINⅠ级、CINⅡ级患者各90例,按照随机数字表法将CINⅠ级患者分为CINⅠA组、CINⅠB组、CINⅠC组,CINⅡ级患者分为CINⅡA组、CINⅡB组、CINⅡC组,各30例。CIN患者均接受LEEP治疗,CINⅠA组及CINⅡA组术后均口服抗生素头孢拉定胶囊,CINⅠB组及CINⅡB组术后均给予重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊阴道给药,CINⅠC组及CINⅡC组给予口服头孢拉定胶囊联合重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊阴道给药。观察各组患者临床疗效,术后6个月HPV转阴率,术前、术后6个月HPV-DNA负荷量及宫颈组织中Caspase-3蛋白、survivin蛋白阳性率。结果 CINⅠC组治愈率显著高于CINⅠA组、ⅠB组(χ2=4.216,P=0.040);CINⅡC组治愈率明显高于CINⅡA组、ⅡB组(χ2=6.585,P=0.037)。术后6个月各组患者HPV-DNA负荷量均明显少于术前(P均<0.001),且C组明显少于A组、B组(FCINⅠ=84.294,P<0.001;FCINⅡ=82.601,P<0.001)。术后6个月CINⅠC组患者HPV转阴率为93.3%,明显高于CINⅠA组的73.3%和CINⅠB组的70.0%(χ2=6.634,P=0.036),CINⅡC组为83.3%,显著高于CINⅡA组的60.0%和CINⅡB组的56.7%(χ2=6.104,P=0.047)。术后6个月各组患者Caspase-3、survivin蛋白阳性率均显著低于术前,且C组显著低于A组、B组(Caspase-3蛋白阳性率:χCINⅠ2=5.079,P=0.024;χCINⅡ2=4.286,P=0.038。survivin蛋白阳性率:χCINⅠ2=5.963,P<0.001;χCINⅡ2=4.295,P=0.040)。结论CIN患者LEEP术后联合使用重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊和头孢拉定胶囊效果明显优于单独应用,不仅可有效减少HPV-DNA负荷量,促进HPV转阴,还能明显降低Caspase-3、survivin蛋白阳性率。

电针对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的观察电针对脑心综合征(cerebral-cardiac syndrome,CCS)大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达的影响。方法从70只健康SD大鼠中随机选择10只作为假手术组,其余60只用于CCS模型复制。选取造模成功的大鼠30只,分为模型组、电针组和电针非经非穴组,每组10只。采用胶原酶加肝素联合注射大鼠尾状核方法造模,假手术组向大鼠尾状核注入等量0.9%氯化钠注射液。于造模第1天开始电针,电针组选取水沟、风府、内关和心俞穴,电针非经非穴组选取臀部非经非穴点4处,每次20min,每天1次,连续3天。假手术组和模型组仅每天抓空1次。分别采用TUNEL法和免疫组化法检测血肿周围脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达。结果假手术组偶可见TUNEL细胞,Caspase-3少量表达;模型组血肿周围组织出现较多的TUNEL阳性细胞,Caspase-3大量表达;电针组TUNEL阳性细胞和Caspase-3表达均较模型组和电针非经非穴组明显减少(P<0.01)。结论电针可以抑制CCS大鼠脑组织细胞凋亡,其机制可能与下调血肿周围脑组织Caspase-3表达有关。

拉莫三嗪对癫痫大鼠海马组织中Caspase-3和热休克蛋白70表达的影响

目的探讨不同剂量拉莫三嗪对戊四氮所致癫痫大鼠的行为学、海马组织形态学及Caspase-3和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法选取清洁级健康6周龄雄性Sprague-Dawley大鼠100只,随机分为正常对照组、模型组和拉莫三嗪低、中、高剂量组,每组20只。正常对照组大鼠腹腔注射生理盐水(3.5 m L·kg-1),其余各组大鼠均腹腔注射戊四氮(35 mg·kg-1)并观察其行为学变化。以连续出现3次Ⅳ级及其以上发作作为点燃标准。全部点燃后,模型组和拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠给予戊四氮35 mg·kg-1每日1次腹腔注射维持点燃,拉莫三嗪低、中、高剂量大鼠组分别给予拉莫三嗪20、30、60 mg·kg-1·d-1灌胃,连续2周。在末次灌胃24 h内,对各组大鼠进行心脏灌注固定取海马组织,采用免疫组织化学法检测海马CA3区Caspase-3和HSP70蛋白表达。结果除正常对照组外,其余各组大鼠均有痫性发作。正常对照组大鼠海马结构完整,其他组大鼠海马神经元体积缩小,与周围组织有脱离,细胞核深染,有核分裂及核溶解,具有凋亡特征,多数细胞质呈空泡状,海马区神经元细胞排列散乱,无层次感,尼氏体减少,部分神经元丢失,细胞密度小。与正常对照组比较,模型组大鼠海马CA3区Caspase-3和HSP70阳性细胞数增多(P<0.01);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3阳性细胞数均少于模型组,HSP70阳性细胞数均多于模型组(P<0.05);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3阳性细胞数随着剂量的增加而减少,HSP70阳性细胞数随着剂量的增加而增加,拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3、HSP70阳性细胞数两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠海马CA3区Caspase-3及HSP70蛋白表达均增加(P<0.05)。拉莫三嗪低、中、高剂量组Caspase-3蛋白表达低于模型组(P<0.05),HSP70蛋白表达高于模型组(P<0.05)。拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3蛋白表达随着剂量的增加而降低,HSP70蛋白表达随着剂量的增加而增加,拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3、HSP70蛋白表达两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论拉莫三嗪对戊四氮所致癫痫大鼠的癫痫发作有保护作用,可以减轻大鼠癫痫发作的严重程度,其机制可能是通过降低海马组织中Caspase-3表达、增加HSP70表达来抑制癫痫过程中的神经元凋亡。

血清可溶性细胞间黏附分子1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3水平对颅内破裂动脉瘤术后脑血管痉挛的预测价值

目的探讨血清可溶性细胞间黏附分子1(SICAM-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)水平在颅内破裂动脉瘤术后脑血管痉挛(CVS)的预测价值。方法选取2016年1月—2019年12月山东省枣庄市立医院收治的203例颅内动脉瘤破裂蛛网膜下腔出血(SAH)患者,均接受开颅夹闭或介入栓塞治疗,术后4 d行数字减影血管造影,根据术后不同程度CVS将其分为重度CVS组(19例)、中度CVS组(44例)、轻度CVS组(23例)、无CVS组(117例)。检测术前和术后3、7 d血清Caspase-3、SICAM-1水平。比较四组颅内破裂动脉瘤术前后血清SICAM-1、Caspase-3水平,Pearson相关系数分析颅内破裂动脉瘤术后血清SICAM-1与Caspase-3水平的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,判断术后3 d血清SICAM-1、Caspase-3对颅内破裂动脉瘤术后CVS的预测价值。结果四组术后3、7 d血清SICAM-1、Caspase-3水平均高于术前,术后7 d血清SICAM-1、Caspase-3水平均低于术后3 d(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,颅内破裂动脉瘤术后3、7 d血清SICAM-1与Caspase-3水平呈正相关(r=0.493、0.585,P<0.05)。ROC曲线显示,术后3 d血清SICAM-1+Caspase-3诊断颅内破裂动脉瘤术后CVS的曲线下面积、敏感度、特异性均高于SICAM-1和Caspase-3单独检测。结论颅内破裂动脉瘤术后CVS患者血清SICAM-1、Caspase-3水平明显提升,联合检测可有效预测CVS发生。

清心开窍方挥发油对AD大鼠大脑皮层及海马区GFAP及Caspase-3表达的影响

目的探讨清心开窍方及其挥发油对Aβ25-35杏仁核注射诱导痴呆(Alzheimer′s disease,AD)大鼠皮层及海马区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)、淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,βAPP)及Caspase-3表达的影响。方法选取32只雄性SD大鼠,采用杏仁核注射Aβ25-35诱导AD大鼠模型,造模后随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组[盐酸多奈哌齐片,1.67mg/kg]、清心开窍方组(中药组,清心开窍方煎液12.67mL/kg)和挥发油组(挥发油,3.33mL/kg),另选取8只大鼠作为正常组,正常组、模型组给予等量双蒸水灌胃,各组每天干预1次,连续2周。给药结束后进行Morris水迷宫测试,记录各组大鼠水迷宫测试期间第1～5天逃避潜伏期及跨越平台次数。免疫组织化学法检测各组大鼠大脑皮层与海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3的表达。结果与模型组比较,各用药组大鼠第3～5天逃避潜伏期均缩短,皮层与海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3表达水平降低,跨越平台次数增加,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与西药组比较,中药组皮层及海马区Aβ表达水平降低、βAPP升高,挥发油组皮层及海马区GFAP、βAPP及Caspase-3均升高,挥发油组第3～5天逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论清心开窍方能明显改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能是通过降低皮层及海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3的表达发生作用。

白杨素通过抑制NLRP3炎性小体信号通路对围绝经期抑郁症模型大鼠产生保护作用

目的探讨白杨素(chrysin,CHR)对围绝经期抑郁症(perimenopausal depression disorder,PDD)大鼠的保护作用。方法将成功摘除双侧卵巢的大鼠随机分为空白对照组、模型组、CHR组(20、40、80 mg·kg^-1)。除假手术组外,其余各组大鼠进行每天随机接受慢性不可预见性应激刺激方式造模,持续5周。造模结束后,各组大鼠分别进行旷场实验、强迫游泳实验和糖水偏好实验,观察大鼠的行为学变化。采用HE染色观察大鼠海马神经元的变化,并采用Western blot法检测大鼠海马中caspase-1、NLRP3、ASC以及炎症因子的表达情况。结果与对照组相比,模型组大鼠单位时间内穿越格子数和站立次数均有所减少、糖水偏嗜度降低、强迫游泳不动时间延长;此外,海马神经元产生明显损伤,海马中caspase-1、NLRP3、ASC蛋白表达水平明显升高,炎症因子IL-1β、IL-18、IL-6达水平明显升高。与模型组相比,CHR药物治疗后大鼠单位时间内穿越格子数和站立次数均有所增加、糖水偏嗜度升高、强迫游泳不动时间缩短;此外,海马神经元产生损伤减少,海马中caspase-1、NLRP3、ASC蛋白表达水平降低,炎症因子IL-1β、IL-18、IL-6的表达水平明显降低。结论 CHR对PDD模型大鼠具有保护作用。

靶向shRNA抑制survivin基因对子宫内膜异位症裸鼠模型异位内膜caspase-3表达的影响

目的:利用慢病毒介导特异性短发夹状RNA(LV-shRNA)靶向沉默生存素基因,观察其对子宫内膜异位症裸鼠模型异位病灶中caspase-3表达的影响。方法:建立人子宫内膜裸鼠皮下种植模型,将LVshRNA、空载慢病毒及磷酸盐缓冲液分别注射至裸鼠皮下异位病灶,观察病灶生长情况。分别采用RT-PCR及免疫组化检测异位病灶中生存素、caspase-3 mRNA及蛋白的表达。结果:LV-shRNA处理组病灶体积、重量明显低于两对照组。与两对照组相比,LV-shRNA处理组生存素mRNA及蛋白的表达量明显降低,caspase-3的表达量明显升高,而生存素及caspase-3的表达在两对照组之间相比,差异均无统计学意义。结论:LVshRNA可明显抑制裸鼠异位子宫内膜病灶的生长,其机制可能与其通过下调生存素蛋白、激活下游的caspase-3诱导细胞凋亡有关。

脑缺血时半乳糖凝集素-3对大鼠脑皮质中bcl-2、BAX及caspase-3表达的影响

目的通过脑缺血/再灌注损伤模型,测定脑缺血时半乳糖凝集素-3(Gal-3)对B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)表达的影响,从而为脑缺血的发病机制提供一定的实验依据。方法雄性SD大鼠18只,建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血1.5 h,再灌注至24 h。采用随机分组法分为假手术组(sham)、缺血/再灌注组(I/R)和Gal-3 RNA干扰组(siRNA)。采用real-time PCR及western blot检测大鼠脑皮质中Gal-3、bcl-2、BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达变化。结果大鼠脑缺血/再灌注损伤后,脑皮质中Gal-3及bcl-2 mRNA及蛋白表达明显下调,分别为0.38、0.47和1.310、1.299;BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达明显上调,分别为1.41、1.55及1.076、1.155。而Gal-3 RNA干扰后,Gal-3及bcl-2 mRNA及蛋白表达明显下调,分别为0.24、0.14及1.014、1.058;BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达明显上调,分别为1.76、1.88及1.480、1.515。结论 Gal-3可能通过上调bcl-2、下调caspase-3及BAX mRNA及蛋白的表达,参与脑缺血/再灌注损伤的病理过程。

脓毒症所致脑功能障碍患者血清caspase-1、NLRP3变化及临床意义

目的探讨脓毒症所致脑功能障碍(SIBD)患者血清半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(caspase-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平变化及临床意义。方法选择2018年1月—2021年1月重庆大学附属涪陵医院神经外科收治SIBD患者60例为SIBD组,未合并脑功能障碍脓毒症患者72例为对照组。检测患者血清caspase-1、NLRP3水平,分析血清caspase-1、NLRP3与SIBD发病的关系及其诊断SIBD的价值。结果SIBD组患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平均高于对照组(第1 d:t/P=4.233/<0.001、2.292/0.024;第3 d:t/P=9.473/<0.001、15.634/<0.001);脓毒症休克患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平高于脓毒症患者(第1 d:t/P=8.631/<0.001、2.993/0.003;第3 d:t/P=23.134/<0.001、37.564/<0.001);高SOFA评分、高TNF-α、入住ICU第3 d高caspase-1、入住ICU第3 d高NLRP3是SIBD发病的危险因素[OR(95%CI)=1.385(1.132~1.695)、1.422(1.126~1.795)、1.303(1.078~1.576)、1.365(1.109~1.680)];入住ICU第3 d血清caspase-1、NLRP3及二者联合诊断SIBD的曲线下面积为0.693、0.755、0.884,二者联合高于单独检测(Z/P=3.642/<0.001、2.586/0.010)。结论SIBD患者血清caspase-1、NLRP3水平均明显升高,高水平caspase-1、NLRP3与SIBD发病有关,可作为SIBD诊断的辅助指标。

VEGF及Caspase-3在早产儿脑室周围-脑室内出血后继发脑损伤中的作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)是否参与早产儿脑室周围-脑室内出血(PV-IVH)后的继发性脑损伤。方法采用丙三醇腹腔注射法(Georgiadis P)制作早产兔PV-IVH模型,分为PV-IVH模型组(18只)及对照组(18只)。两组于处理后24、48、72 h 3个时间段分别检测VEGF、Caspase-3阳性细胞、凋亡细胞表达。结果 PV-IVH模型组VEGF阳性细胞数在不同时相均明显多于对照组,PV-IVH模型组VEGF平均阳性细胞表达率在处理后24、48、72 h均高于对照组(P<0.05,P<0.01),组内48、72 h均低于24 h(P<0.01)、72 h低于48 h(P<0.05),对照组VEGF平均阳性细胞表达率在处理后24、48、72 h两两比较,差异无统计学意义(P>0.05);PV-IVH模型组Caspase-3阳性细胞数在不同时相均明显多于对照组,PV-IVH模型组Caspase-3平均阳性细胞表达率在处理后24、48、72 h均高于对照组(P<0.01),组内48 h高于24 h(P<0.01)、72 h低于24、48 h(P<0.01),对照组Caspase-3阳性细胞的表达率在处理后24、48、72 h两两比较,差异无统计学意义(P>0.05);PV-IVH模型组凋亡细胞数在处理后24、48 h明显多于对照组,处理后72 h凋亡细胞数与对照组比较无明显变化,PV-IVH模型组凋亡细胞平均表达率在处理后24、48 h均较高于对照组(P<0.01),处理后72 h与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),组内48 h高于24、72 h(P<0.01)、72 h低于24 h(P<0.01),对照组脑组织凋亡细胞的平均表达率在处理后24、48、72 h两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PV-IVH后,VEGF阳性细胞数目显著增加,提示VEGF参与了PV-IVH后继发性脑损伤,可能发挥了脑保护作用;Caspase-3阳性细胞、凋亡细胞数目明显增多,且Caspase-3阳性细胞与凋亡细胞表达趋势一致,提示Caspase-3参与PV-IVH后继发性脑损伤。

不同基因分型乳腺癌中Caspase-3、XIAP、Smac表达情况及与临床病理参数的关系

目的探讨天冬氨酸酶3(Caspase-3)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、第二个线粒体衍生半胱氨酸蛋白酶激动剂(Smac)在不同基因分型乳腺癌中表达情况,及其与乳腺癌临床病理参数的相关性。方法选取行手术切除治疗的73例乳腺癌患者为研究对象,其中Luminal A型30例,Luminal B型12例,HER-2过表达型9例,BLBC型22例,同期取20例癌旁正常乳腺组织作为对照组,采用免疫组织化学(SP)方法检测乳腺组织中Caspase-3、XIAP、Smac蛋白表达情况,分析三者在不同基因分型乳腺癌中表达水平及其与乳腺癌病理参数的相关性。结果乳腺癌组织中Caspase-3蛋白阳性表达率为39.73%(29/73),明显低于癌旁正常乳腺组织Caspase-3蛋白阳性表达率90.00%(18/20),差异有统计学意义(P <0.05)。乳腺癌组织中XIAP蛋白阳性表达率为86.30%(63/73),明显高于癌旁正常乳腺组织XIAP蛋白阳性表达率40.00%(8/20)(P <0.05)。乳腺癌组织中Smac蛋白阳性表达率为31.51%(23/73),明显低于癌旁正常乳腺组织Smac蛋白阳性表达率95.00%(19/20)(P <0.05)。Caspase-3、XIAP、Smac蛋白表达在Luminal A型、HER-2过表达型、BLBC型之间两两比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。Caspase-3、XIAP、Smac蛋白表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、绝经情况无关(P> 0.05),与TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P <0.05)。Spearman相关性分析结果显示,乳腺癌组织中Caspase-3与XIAP蛋白表达呈明显负相关(γ=-0.796,P <0.01),与Smac蛋白表达呈明显正相关(γ=0.803,P <0.01),XIAP与Smac蛋白表达呈明显负相关(γ=-0.712,P <0.01)。结论 Caspase-3、Smac蛋白在乳腺癌组织中明显低表达,XIAP蛋白呈明显高表达,三者与乳腺癌基因分型、发生发展密切相关。

沉默GATA4对多囊卵巢综合征大鼠模型卵巢颗粒细胞的影响

目的:探讨沉默GATA结合蛋白4(GATA-binding protein 4,GATA4)表达对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型卵巢颗粒细胞增殖与凋亡、分泌功能及炎症反应的影响及相关机制。方法:制备PCOS模型,分离培养PCOS模型大鼠卵巢颗粒细胞并将其分为对照组(Ctrl组)、siRNA-NC组、siRNA-GATA4组,检测转染后三组卵巢颗粒细胞细胞中GATA4表达和细胞增殖与凋亡情况,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中激素和炎症因子含量,Western Blotting法检测细胞中活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-serine threonine kinase,p-AKT)蛋白表达。结果:siRNA-GATA4组卵巢颗粒细胞增殖率、GATA4、PI3K、p-AKT蛋白表达量较Ctrl组明显减少,细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达量、细胞上清液中雌二醇(estradiol,E2)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平较Ctrl组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),siRNA-NC组与Ctrl组卵巢颗粒细胞增殖率、细胞凋亡率、GATA4、cleaved caspase-3、E2、LH、T、IL-6、IL-1β、TNF-α、PI3K及p-AKT比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:沉默PCOS大鼠模型中GATA4表达,可抑制卵巢颗粒细胞增殖,促进其凋亡,加剧激素分泌异常和炎症反应,其机制可能与下调PI3K/AKT信号通路有关。

铁超载对禽肝脏细胞内GRP78/Bip与Caspase-3分子表达影响的研究

为了研究铁超载对禽肝脏细胞损伤的影响,试验用不同剂量Fe SO4饲喂试验鸡群,分别在试验开始后第7,14,21,28,35,42天从每组中随机选取8只鸡宰杀,取肝脏,用4%多聚甲醛固定,制作组织切片,用免疫组织化学技术检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78/Bip)与半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)分子表达。结果表明:低剂量组试验鸡群肝脏细胞GRP78/Bip与Caspase-3分子表达阳性细胞率均从第5周开始极显著高于对照组(P<0.01),高剂量组试验鸡群肝脏细胞GRP78/Bip与Caspase-3分子表达阳性细胞率均从第2周开始极显著高于对照组(P<0.01)。说明铁超载能显著影响禽肝脏细胞内GRP78/Bip与Caspase-3分子表达,细胞损伤与凋亡显著增加。

TNF-α、Caspase-3在大鼠酒精性肝病细胞凋亡中的表达

目的:观察大鼠酒精性肝病组织病理形态学改变,探讨细胞凋亡与TNF-α、Caspase-3的表达及意义。方法:采用灌胃法制备大鼠酒精性肝病(ALD)模型,模型组用40%酒精8g/(kg.d)分2次灌胃,共12周,对照组灌等量的生理盐水,实验第8、12周末分批处死动物。用HE染色观察肝脏病理学改变,用TUNEL法检测肝细胞的凋亡,用免疫组化法检测TNF-α、Caspase-3的表达。结果:模型组肝细胞凋亡明显增多,主要分布在中央静脉周围,点状、灶状坏死区;TNF-α、Caspase-3主要分布在中央静脉及肝细胞坏死灶周围细胞的胞质中,模型组TNF-α、Caspase-3表达强度明显高于对照组(P<0.05),且TNF-α的表达与Caspase-3的表达呈正相关(r=0.648,P<0.01)。结论:大鼠酒精性肝病的发生、发展过程中TNF-α、Caspase-3参与肝细胞凋亡;TNF-α通过其受体介导Caspase-3活化参与酒精性肝病的肝细胞凋亡。