基于Caspase-3/PARP通路探究龟鹿二仙胶及拆方对IL-1β诱导的退变软骨细胞凋亡及细胞外基质的影响

目的 基于半胱氨酸蛋白酶3/多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Caspase-3/PARP)通路探究龟鹿二仙胶及拆方对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的退变软骨细胞凋亡及细胞外基质(ECM)的影响。方法 采用SD大鼠制备空白血清、龟鹿二仙胶含药血清、龟甲胶含药血清及鹿角胶含药血清,采用酶消法体外培养C57BL/6小鼠软骨细胞。将软骨细胞分为5组,空白组加入空白血清培养,模型组加入IL-1β和空白血清培养,龟鹿组加入IL-1β和龟鹿二仙胶含药血清培养,龟板组加入IL-1β和龟甲胶含药血清培养,鹿角组加入IL-1β和鹿角胶含药血清培养,干预24 h后,采用CCK-8法检测软骨细胞活性,采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况,采用免疫荧光染色法检测Caspase-3、PARP-1表达情况,分别采用Western blot和qRT-PCR法检测细胞中Caspase-3、PARP-1、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)蛋白及mRNA表达情况。结果 与空白组比较,模型组软骨细胞活性明显降低(P<0.05),软骨细胞凋亡率明显升高(P<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,龟鹿组、龟板组及鹿角组软骨细胞活性均明显升高(P均<0.05),软骨细胞凋亡率均明显降低(P均<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与龟板组、鹿角组比较,龟鹿组软骨细胞活性更高(P均<0.05),软骨细胞凋亡率更低(P均<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均更低(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均更高(P均<0.05)。与龟板组比较,鹿角组软骨细胞活性,软骨细胞凋亡率,细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度,细胞中Caspase-3、PARP-1、MMP-13、Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量高均更高(P均<0.05)。结论 龟板胶可抑制软骨细胞凋亡及ECM降解,鹿角胶可促进软骨细胞增殖和ECM合成代谢,龟鹿二仙胶作用效果优于龟板胶及鹿角胶,作用机制可能与激活Caspase-3/PARP信号通路有关。

SIRT1、FAP-α、caspase-3在结直肠癌中的表达及相关性

目的探究沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、成纤维细胞活化蛋白-α(fibroblast activation protein-α,FAP-α)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteine aspartase-3,caspase-3)在结直肠癌中的表达及相关性。方法收集2021年4月至2022年4月整理归档较为完整的45例为结直肠癌组织石蜡标本,另外选取45例为距离癌组织边缘5 cm的癌旁组织石蜡标本。采取免疫组化法检测SIRT1、FAP-α、caspase-3水平表达,分析SIRT1、FAP-α、caspase-3在结直肠癌中的表达变化及与预后的相关性。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织中SIRT1、FAP-α、caspase-3表达量均有所升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌组织中SIRT1、FAP-α、caspase-3表达与结直肠癌患者的年龄、性别、肿瘤位置、远处转移无关,与淋巴结转移、肿瘤的直径、组织学类别、浸润程度、TNM分期、脉管瘤栓、分化程度有关相关,差异有统计学意义(P<0.05)。SIRT1、FAP-α、caspase-3之间Pearson相关性分析显示,SIRT1、FAP-α之间呈正相关(r=0.534,P=0.001);FAP-α、caspase-3之间呈正相关(r=0.556,P=0.001);SIRT1、caspase-3之间呈正相关(r=0.585,P=0.001)。ROC曲线显示,三项联合对结直肠癌的诊断价值高于SIRT1、FAP-α、caspase-3单项诊断(P=0.001)。结论结直肠癌患者机体内SIRT1、FAP-α、caspase-3水平表达上升,可看出其水平变化与结直肠癌患者产生病症有密切的关联,因此三者可作为预测结直肠癌患者治疗的重要依据。

血清sST2、Caspase-3、HSP70与ACMP患者病情和迟发性脑病的关系

目的探讨血清可溶性致癌抑制因子2(sST2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、热休克蛋白70(HSP70)与急性一氧化碳中毒(ACMP)患者病情和迟发性脑病(DEACMP)的关系。方法选取2020年10月至2022年1月盘锦市中心医院收治的110例ACMP患者作为ACMP组,根据一氧化碳中毒程度分为轻度组、中度组、重度组;另选取同期52例体检健康志愿者作为对照组。随访6个月后,根据ACMP患者是否发生DEACMP分为DEACMP组和非DEACMP组。收集ACMP患者临床资料,采用酶联免疫吸附试验检测血清sST2、Caspase-3、HSP70水平。采用多因素Logistic回归分析ACMP患者发生DEACMP的影响因素,应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sST2、Caspase-3、HSP70对ACMP患者发生DEACMP的诊断效能。结果ACMP组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平均高于对照组(P<0.05)。重度组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平高于中度组、轻度组(P<0.05),中度组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平高于轻度组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄增加、高血压、意识障碍时间>48 h、血CO暴露时间延长、血碳氧血红蛋白(COHb)饱和度升高及血清sST2、Caspase-3、HSP70水平升高是ACMP患者发生DEACMP的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清sST2、Caspase-3、HSP70联合检测诊断ACMP患者发生DEACMP的AUC为0.913,大于sST2、Caspase-3、HSP70单项检测诊断ACMP患者发生DEACMP的AUC(分别为0.783、0.788、0.785),差异有统计学意义(P<0.05)。结论ACMP患者血清sST2、Caspase-3、HSP70水平升高,与中毒程度和DEACMP发生有关,血清sST2、Caspase-3、HSP70水平联合检测诊断ACMP患者发生DEACMP的价值较高。

血清NLRP3炎性小体信号通路相关因子评估急性脑梗死患者脑血栓形成及临床应用价值

目的探讨血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体信号通路相关因子评估急性脑梗死(ACI)患者脑血栓形成及临床应用价值。方法选取2022年1—12月收治的ACI 120例作为观察组,另选取同期健康体检者120例作为对照组。观察组予以机械取栓术治疗,依据是否获取血栓组织分为血栓组和非血栓组2个亚组。比较观察组和对照组血清NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平及血栓组和非血栓组临床资料,分析ACI患者脑血栓形成相关因素,探讨血清NLRP3炎性小体信号通路相关因子评估ACI脑血栓形成和临床应用价值,分析ACI脑血栓形成者临床转归情况。结果血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18水平,观察组高于对照组,血栓组高于非血栓组(P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18均为ACI患者脑血栓形成的独立危险因素(P<0.01)。血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18联合评估ACI患者脑血栓形成的曲线下面积高于单独评估,且联合评估时净获益阈值范围大于单独检测(P<0.05)。血栓组出院时mRS评分4~6分所占比例(22/92,23.91%)高于非血栓组(1/28,3.57%)(P<0.05)。结论ACI患者血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18水平升高,其联合检测对脑血栓形成具有一定评估价值,且具有更高临床净获益。

重组干扰素联合抗生素对宫颈上皮内瘤变LEEP术后HPV-DNA负荷量及Caspase-3、survivin表达的影响

目的观察重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊联合头孢拉定胶囊对宫颈上皮内瘤变(CIN)患者宫颈电环切除术(LEEP)后人乳头状瘤病毒(HPV) DNA负荷量及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 (Caspase-3)、生存素(survivin)蛋白表达的影响。方法选取2016年10月-2018年10月海南省人民医院妇科收治的CIN患者180例作为研究对象,CINⅠ级、CINⅡ级患者各90例,按照随机数字表法将CINⅠ级患者分为CINⅠA组、CINⅠB组、CINⅠC组,CINⅡ级患者分为CINⅡA组、CINⅡB组、CINⅡC组,各30例。CIN患者均接受LEEP治疗,CINⅠA组及CINⅡA组术后均口服抗生素头孢拉定胶囊,CINⅠB组及CINⅡB组术后均给予重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊阴道给药,CINⅠC组及CINⅡC组给予口服头孢拉定胶囊联合重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊阴道给药。观察各组患者临床疗效,术后6个月HPV转阴率,术前、术后6个月HPV-DNA负荷量及宫颈组织中Caspase-3蛋白、survivin蛋白阳性率。结果 CINⅠC组治愈率显著高于CINⅠA组、ⅠB组(χ2=4.216,P=0.040);CINⅡC组治愈率明显高于CINⅡA组、ⅡB组(χ2=6.585,P=0.037)。术后6个月各组患者HPV-DNA负荷量均明显少于术前(P均<0.001),且C组明显少于A组、B组(FCINⅠ=84.294,P<0.001;FCINⅡ=82.601,P<0.001)。术后6个月CINⅠC组患者HPV转阴率为93.3%,明显高于CINⅠA组的73.3%和CINⅠB组的70.0%(χ2=6.634,P=0.036),CINⅡC组为83.3%,显著高于CINⅡA组的60.0%和CINⅡB组的56.7%(χ2=6.104,P=0.047)。术后6个月各组患者Caspase-3、survivin蛋白阳性率均显著低于术前,且C组显著低于A组、B组(Caspase-3蛋白阳性率:χCINⅠ2=5.079,P=0.024;χCINⅡ2=4.286,P=0.038。survivin蛋白阳性率:χCINⅠ2=5.963,P<0.001;χCINⅡ2=4.295,P=0.040)。结论CIN患者LEEP术后联合使用重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊和头孢拉定胶囊效果明显优于单独应用,不仅可有效减少HPV-DNA负荷量,促进HPV转阴,还能明显降低Caspase-3、survivin蛋白阳性率。

电针对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的观察电针对脑心综合征(cerebral-cardiac syndrome,CCS)大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达的影响。方法从70只健康SD大鼠中随机选择10只作为假手术组,其余60只用于CCS模型复制。选取造模成功的大鼠30只,分为模型组、电针组和电针非经非穴组,每组10只。采用胶原酶加肝素联合注射大鼠尾状核方法造模,假手术组向大鼠尾状核注入等量0.9%氯化钠注射液。于造模第1天开始电针,电针组选取水沟、风府、内关和心俞穴,电针非经非穴组选取臀部非经非穴点4处,每次20min,每天1次,连续3天。假手术组和模型组仅每天抓空1次。分别采用TUNEL法和免疫组化法检测血肿周围脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达。结果假手术组偶可见TUNEL细胞,Caspase-3少量表达;模型组血肿周围组织出现较多的TUNEL阳性细胞,Caspase-3大量表达;电针组TUNEL阳性细胞和Caspase-3表达均较模型组和电针非经非穴组明显减少(P<0.01)。结论电针可以抑制CCS大鼠脑组织细胞凋亡,其机制可能与下调血肿周围脑组织Caspase-3表达有关。

拉莫三嗪对癫痫大鼠海马组织中Caspase-3和热休克蛋白70表达的影响

目的探讨不同剂量拉莫三嗪对戊四氮所致癫痫大鼠的行为学、海马组织形态学及Caspase-3和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法选取清洁级健康6周龄雄性Sprague-Dawley大鼠100只,随机分为正常对照组、模型组和拉莫三嗪低、中、高剂量组,每组20只。正常对照组大鼠腹腔注射生理盐水(3.5 m L·kg-1),其余各组大鼠均腹腔注射戊四氮(35 mg·kg-1)并观察其行为学变化。以连续出现3次Ⅳ级及其以上发作作为点燃标准。全部点燃后,模型组和拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠给予戊四氮35 mg·kg-1每日1次腹腔注射维持点燃,拉莫三嗪低、中、高剂量大鼠组分别给予拉莫三嗪20、30、60 mg·kg-1·d-1灌胃,连续2周。在末次灌胃24 h内,对各组大鼠进行心脏灌注固定取海马组织,采用免疫组织化学法检测海马CA3区Caspase-3和HSP70蛋白表达。结果除正常对照组外,其余各组大鼠均有痫性发作。正常对照组大鼠海马结构完整,其他组大鼠海马神经元体积缩小,与周围组织有脱离,细胞核深染,有核分裂及核溶解,具有凋亡特征,多数细胞质呈空泡状,海马区神经元细胞排列散乱,无层次感,尼氏体减少,部分神经元丢失,细胞密度小。与正常对照组比较,模型组大鼠海马CA3区Caspase-3和HSP70阳性细胞数增多(P<0.01);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3阳性细胞数均少于模型组,HSP70阳性细胞数均多于模型组(P<0.05);拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3阳性细胞数随着剂量的增加而减少,HSP70阳性细胞数随着剂量的增加而增加,拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3、HSP70阳性细胞数两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠海马CA3区Caspase-3及HSP70蛋白表达均增加(P<0.05)。拉莫三嗪低、中、高剂量组Caspase-3蛋白表达低于模型组(P<0.05),HSP70蛋白表达高于模型组(P<0.05)。拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3蛋白表达随着剂量的增加而降低,HSP70蛋白表达随着剂量的增加而增加,拉莫三嗪低、中、高剂量组大鼠海马CA3区Caspase-3、HSP70蛋白表达两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论拉莫三嗪对戊四氮所致癫痫大鼠的癫痫发作有保护作用,可以减轻大鼠癫痫发作的严重程度,其机制可能是通过降低海马组织中Caspase-3表达、增加HSP70表达来抑制癫痫过程中的神经元凋亡。

清心开窍方挥发油对AD大鼠大脑皮层及海马区GFAP及Caspase-3表达的影响

目的探讨清心开窍方及其挥发油对Aβ25-35杏仁核注射诱导痴呆(Alzheimer′s disease,AD)大鼠皮层及海马区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)、淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,βAPP)及Caspase-3表达的影响。方法选取32只雄性SD大鼠,采用杏仁核注射Aβ25-35诱导AD大鼠模型,造模后随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组[盐酸多奈哌齐片,1.67mg/kg]、清心开窍方组(中药组,清心开窍方煎液12.67mL/kg)和挥发油组(挥发油,3.33mL/kg),另选取8只大鼠作为正常组,正常组、模型组给予等量双蒸水灌胃,各组每天干预1次,连续2周。给药结束后进行Morris水迷宫测试,记录各组大鼠水迷宫测试期间第1～5天逃避潜伏期及跨越平台次数。免疫组织化学法检测各组大鼠大脑皮层与海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3的表达。结果与模型组比较,各用药组大鼠第3～5天逃避潜伏期均缩短,皮层与海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3表达水平降低,跨越平台次数增加,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与西药组比较,中药组皮层及海马区Aβ表达水平降低、βAPP升高,挥发油组皮层及海马区GFAP、βAPP及Caspase-3均升高,挥发油组第3～5天逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论清心开窍方能明显改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能是通过降低皮层及海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3的表达发生作用。

靶向shRNA抑制survivin基因对子宫内膜异位症裸鼠模型异位内膜caspase-3表达的影响

目的:利用慢病毒介导特异性短发夹状RNA(LV-shRNA)靶向沉默生存素基因,观察其对子宫内膜异位症裸鼠模型异位病灶中caspase-3表达的影响。方法:建立人子宫内膜裸鼠皮下种植模型,将LVshRNA、空载慢病毒及磷酸盐缓冲液分别注射至裸鼠皮下异位病灶,观察病灶生长情况。分别采用RT-PCR及免疫组化检测异位病灶中生存素、caspase-3 mRNA及蛋白的表达。结果:LV-shRNA处理组病灶体积、重量明显低于两对照组。与两对照组相比,LV-shRNA处理组生存素mRNA及蛋白的表达量明显降低,caspase-3的表达量明显升高,而生存素及caspase-3的表达在两对照组之间相比,差异均无统计学意义。结论:LVshRNA可明显抑制裸鼠异位子宫内膜病灶的生长,其机制可能与其通过下调生存素蛋白、激活下游的caspase-3诱导细胞凋亡有关。

染锰大鼠生精细胞半胱氨酸蛋白酶3的表达及锌的保护作用

目的：研究氯化锰对生精细胞半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）表达的影响，探讨锰诱发大鼠生精细胞caspase-3表达的机制及锌的拮抗作用。方法：雄性SD大鼠随机分为空白对照组，ZnCl2对照组，15mg／kg和30mg／kgMnCl2组；15mg／kg和30mg／kgMnCl2＋ZnCl2组。免疫组织化学法检测睾丸caspasc-3表达。结果：各染锰组，染锰补锌组及染锰剂量相同的6周组，染锰时间相同的30mg／kgMnCl2组caspase-3阳性细胞率均显著升高，染锰补锌组显著降低。结论：染锰15mg／kg4周可诱发大鼠生精细胞caspase-3表达，且随染锰时间和剂量的增加而增加，两者存在一定时间-效应和剂量-效应关系；摄入含锌100mg／kg的食物可拮抗锰诱发的生精细胞caspase-3表达。

白杨素通过抑制NLRP3炎性小体信号通路对围绝经期抑郁症模型大鼠产生保护作用

目的探讨白杨素(chrysin,CHR)对围绝经期抑郁症(perimenopausal depression disorder,PDD)大鼠的保护作用。方法将成功摘除双侧卵巢的大鼠随机分为空白对照组、模型组、CHR组(20、40、80 mg·kg^-1)。除假手术组外,其余各组大鼠进行每天随机接受慢性不可预见性应激刺激方式造模,持续5周。造模结束后,各组大鼠分别进行旷场实验、强迫游泳实验和糖水偏好实验,观察大鼠的行为学变化。采用HE染色观察大鼠海马神经元的变化,并采用Western blot法检测大鼠海马中caspase-1、NLRP3、ASC以及炎症因子的表达情况。结果与对照组相比,模型组大鼠单位时间内穿越格子数和站立次数均有所减少、糖水偏嗜度降低、强迫游泳不动时间延长;此外,海马神经元产生明显损伤,海马中caspase-1、NLRP3、ASC蛋白表达水平明显升高,炎症因子IL-1β、IL-18、IL-6达水平明显升高。与模型组相比,CHR药物治疗后大鼠单位时间内穿越格子数和站立次数均有所增加、糖水偏嗜度升高、强迫游泳不动时间缩短;此外,海马神经元产生损伤减少,海马中caspase-1、NLRP3、ASC蛋白表达水平降低,炎症因子IL-1β、IL-18、IL-6的表达水平明显降低。结论 CHR对PDD模型大鼠具有保护作用。

caspase3、bcl-2蛋白在乳腺癌中表达的临床病理研究

目的探讨caspase3、bcl-2蛋白在乳腺癌进展过程中表达的临床及病理意义。方法采用免疫组织化学观察caspase3和bcl-2蛋白在乳腺癌中的表达情况。结果免疫组化检测乳腺癌caspase3蛋白表达阳性率显著性低于乳腺良性病变(χ2=32.983,P=0.000);乳腺癌中caspase3蛋白表达阳性率越低,临床分期越高(χ2=9.184,P=0.010)。乳腺癌中bcl-2蛋白表达阳性率显著性高于乳腺腺病及乳腺纤维腺瘤(χ2=9.790,P=0.007),bcl-2在乳腺癌中蛋白表达阳性率越高,临床分期越高(χ2=13.894,P=0.000)。乳腺癌caspase3蛋白表达与bcl-2蛋白表达呈显著性正相关(χ2=8.302,P=0.004),两因子蛋白表达的协同作用与临床分期的关系比其中任一单因子与临床分期的关系更密切(t=15.459,P=0.0063)。结论caspase3、bcl-2蛋白检测可作为临床评价乳腺癌生物学行为及判断预后的重要参考指标。

活血熄风方对MCAO局灶性脑缺血模型大鼠脑组织Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察活血熄风方对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用,并进一步探讨其作用机制。方法:采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCAO),制备局灶性脑缺血模型,观察活血熄风方对MCAO模型大鼠脑缺血后神经功能缺损导致的行为学变化,并以免疫组化法检测对其大脑皮质细胞凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响,以此探讨活血熄风方抗细胞凋亡及对脑缺血的神经保护作用及作用机制。结果:活血熄风方能抑制MCAO模型大鼠大脑皮质Caspase-3蛋白表达。结论:活血熄风方对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其机理可能与活血熄风方影响抑制细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达有关。

肝细胞癌癌组织caspase-3和DcR3蛋白及SNHG12 mRNA水平变化及其临床意义探讨

目的研究肝细胞癌(HCC)患者癌组织半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)和诱捕受体3(DcR3)蛋白表达及小分子核仁宿主基因12(SNHG12)mRNA水平变化及其临床意义。方法2016年5月~2019年5月我院收治的68例HCC患者,行肝叶切除术治疗,取癌组织和癌旁肝组织,采用EnVision法检测caspase-3和DcR3蛋白表达,采用RT-qPCR法检测SNHG12 mRNA水平,应用Logistic多元回归分析影响HCC患者死亡的危险因素。结果HCC患者癌组织caspase-3阳性率为47.1%,显著低于癌旁组织的77.9%(P<0.05),而DcR3阳性率为61.8%,SNHG12 mRNA水平为(2.9±0.8),显著高于癌旁组织【分别为33.8%和(1.6±0.5),P<0.05】;18例有淋巴结转移的癌组织caspase-3阳性率为33.3%,显著低于50例无淋巴结转移者的62.0%(P<0.05),而DcR3蛋白阳性率为88.9%,显著高于无淋巴结转移者的50.0%,SNHG12 mRNA水平为(2.6±0.4),显著高于无淋巴结转移者【(1.5±0.3),P<0.05】,45例肿瘤直径>5 cm癌组织SNHG12 mRNA水平为(2.7±0.4),显著高于23例无淋巴结转移者【(1.4±0.3),P<0.05】;随访结束时,本组68例HCC患者生存30例(44.1%),死亡38例(55.9%);多元Logistic回归分析显示,肿瘤直径大、合并肝硬化、存在淋巴结转移、Caspase-3低表达、DcR3高表达和SNHG12高水平是HCC患者死亡的危险因素。结论HCC患者癌组织存在基因水平和蛋白表达的显著变化,了解这些变化并探讨其临床意义,将为肝癌防治提供有价值的线索。

VEGF及Caspase-3在早产儿脑室周围-脑室内出血后继发脑损伤中的作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)是否参与早产儿脑室周围-脑室内出血(PV-IVH)后的继发性脑损伤。方法采用丙三醇腹腔注射法(Georgiadis P)制作早产兔PV-IVH模型,分为PV-IVH模型组(18只)及对照组(18只)。两组于处理后24、48、72 h 3个时间段分别检测VEGF、Caspase-3阳性细胞、凋亡细胞表达。结果 PV-IVH模型组VEGF阳性细胞数在不同时相均明显多于对照组,PV-IVH模型组VEGF平均阳性细胞表达率在处理后24、48、72 h均高于对照组(P<0.05,P<0.01),组内48、72 h均低于24 h(P<0.01)、72 h低于48 h(P<0.05),对照组VEGF平均阳性细胞表达率在处理后24、48、72 h两两比较,差异无统计学意义(P>0.05);PV-IVH模型组Caspase-3阳性细胞数在不同时相均明显多于对照组,PV-IVH模型组Caspase-3平均阳性细胞表达率在处理后24、48、72 h均高于对照组(P<0.01),组内48 h高于24 h(P<0.01)、72 h低于24、48 h(P<0.01),对照组Caspase-3阳性细胞的表达率在处理后24、48、72 h两两比较,差异无统计学意义(P>0.05);PV-IVH模型组凋亡细胞数在处理后24、48 h明显多于对照组,处理后72 h凋亡细胞数与对照组比较无明显变化,PV-IVH模型组凋亡细胞平均表达率在处理后24、48 h均较高于对照组(P<0.01),处理后72 h与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),组内48 h高于24、72 h(P<0.01)、72 h低于24 h(P<0.01),对照组脑组织凋亡细胞的平均表达率在处理后24、48、72 h两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PV-IVH后,VEGF阳性细胞数目显著增加,提示VEGF参与了PV-IVH后继发性脑损伤,可能发挥了脑保护作用;Caspase-3阳性细胞、凋亡细胞数目明显增多,且Caspase-3阳性细胞与凋亡细胞表达趋势一致,提示Caspase-3参与PV-IVH后继发性脑损伤。

不同基因分型乳腺癌中Caspase-3、XIAP、Smac表达情况及与临床病理参数的关系

目的探讨天冬氨酸酶3(Caspase-3)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、第二个线粒体衍生半胱氨酸蛋白酶激动剂(Smac)在不同基因分型乳腺癌中表达情况,及其与乳腺癌临床病理参数的相关性。方法选取行手术切除治疗的73例乳腺癌患者为研究对象,其中Luminal A型30例,Luminal B型12例,HER-2过表达型9例,BLBC型22例,同期取20例癌旁正常乳腺组织作为对照组,采用免疫组织化学(SP)方法检测乳腺组织中Caspase-3、XIAP、Smac蛋白表达情况,分析三者在不同基因分型乳腺癌中表达水平及其与乳腺癌病理参数的相关性。结果乳腺癌组织中Caspase-3蛋白阳性表达率为39.73%(29/73),明显低于癌旁正常乳腺组织Caspase-3蛋白阳性表达率90.00%(18/20),差异有统计学意义(P <0.05)。乳腺癌组织中XIAP蛋白阳性表达率为86.30%(63/73),明显高于癌旁正常乳腺组织XIAP蛋白阳性表达率40.00%(8/20)(P <0.05)。乳腺癌组织中Smac蛋白阳性表达率为31.51%(23/73),明显低于癌旁正常乳腺组织Smac蛋白阳性表达率95.00%(19/20)(P <0.05)。Caspase-3、XIAP、Smac蛋白表达在Luminal A型、HER-2过表达型、BLBC型之间两两比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。Caspase-3、XIAP、Smac蛋白表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、绝经情况无关(P> 0.05),与TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P <0.05)。Spearman相关性分析结果显示,乳腺癌组织中Caspase-3与XIAP蛋白表达呈明显负相关(γ=-0.796,P <0.01),与Smac蛋白表达呈明显正相关(γ=0.803,P <0.01),XIAP与Smac蛋白表达呈明显负相关(γ=-0.712,P <0.01)。结论 Caspase-3、Smac蛋白在乳腺癌组织中明显低表达,XIAP蛋白呈明显高表达,三者与乳腺癌基因分型、发生发展密切相关。

食管鳞癌组织中HIF-lα、Caspase-3蛋白的表达变化及意义

目的探讨食管鳞癌组织中缺氧诱导因子(HIF)-1α、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白的表达变化及其与肿瘤浸润、转移的关系。方法应用免疫组化SP法检测49例食管鳞癌中HIF-1,αCaspase-3蛋白的表达。结果食管鳞癌组织中HIF-1α、Caspase-3蛋白阳性表达率分别为51.0%(25/49)、34.7%(17/49),与阴性对照组的0、100%相比,P均<0.05。HIF-1α、Caspase-3蛋白表达与食管鳞癌组织浸润深度及有无淋巴结转移有关(P均<0.05),与分化程度无关(P>0.05)。HIF-1α、Caspase-3蛋白在食管鳞癌中的表达呈负相关(P<0.05)。结论食管鳞癌组织中存在HIF-1α蛋白的高表达和Caspase-3蛋白的缺失或低表达。这一变化与食管鳞癌的浸润转移有关,其机制可能与HIF-1α蛋白下调Caspase-3蛋白的表达有关。

基于网络药理学和分子对接研究高山金莲花素对颞下颌关节骨关节炎细胞模型的作用机制

目的运用网络药理学与分子对接方法探讨高山金莲花素(alpinumisoflavone,AIF)对颞下颌关节骨关节炎(temporomandibular joint osteoarthritis,TMJOA)细胞模型的作用机制,为AIF治疗TMJOA提供研究基础。方法运用GeneCards、OMIM、DisGeNET和PharmGKB数据库获取TMJOA疾病靶点,PharmMapper和HERB获取AIF作用靶点,取化合物与疾病交集靶点上传至STRING数据库得到关键靶点后做GO和KEGG富集分析,分子对接评估相关信号通路中关键靶点。获得医院伦理委员会的审批,提取3周龄SD大鼠髁突软骨细胞。CCK8检测AIF对髁突软骨细胞的毒性。用10 ng/mL白细胞介素⁃1β(interleukin 1β,IL⁃1β)诱导髁突软骨细胞24 h构建TMJOA细胞模型。实验分为3组,其中,对照组:DMEM培养基培养髁突软骨细胞48 h;IL⁃1β组(TMJOA细胞模型):预使用DMEM培养基培养髁突软骨细胞24 h后,保留原培养基的情况下加入IL⁃1β使终浓度达10 ng/mL继续培养24 h;IL⁃1β+10μmol/L AIF组:预使用含10μmol/L AIF的DMEM培养基培养髁突软骨细胞24 h,保留原培养基情况下加入IL⁃1β使终浓度达10 ng/mL继续培养24 h,流式细胞术检测AIF对TM⁃JOA细胞模型中的髁突软骨细胞凋亡的影响。进一步,实验分为对照组、IL⁃1β组、IL⁃1β+10μmol/L AIF组和IL⁃1β+30μmol/L AIF组共4组,其中,IL⁃1β+30μmol/L AIF组:预使用含30μmol/L AIF的DMEM培养基培养24 h,保留原培养基情况下加入IL⁃1β使终浓度达10 ng/mL继续培养24 h;其余3组方法同前。以qPCR与Western blot分别检测AIF对TMJOA细胞模型中与细胞凋亡相关的B淋巴细胞瘤2(B⁃cell leukemia/lymphoma⁃2,Bcl2)、天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific protease 3,Caspase⁃3)及基质降解相关的解聚蛋白样金属蛋白酶4(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4,ADAMTS4)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP3)和基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP13)mRNA和蛋白的表达。结果PharmMapper与HERB数据库检索得到AIF化合物靶点300个,GeneCards、OMIM、DisGeNET和PharmGKB数据库检索得到TMJOA疾病靶点378个,将化合物与疾病靶点交集得33个潜在靶点,将其上传至STRING数据库得31个关键靶点,主要与细胞凋亡和细胞外基质降解相关。这一过程可能涉及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen⁃activated protein kinase,MAPK)、雌激素及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等信号通路。分子对接结果表明AIF与MAPK和雌激素信号通路中的关键靶点细胞外信号调节激酶1/2(extracellular sig⁃nal⁃regulated kinase 1/2,ERK1/2)和雌激素受体基因1/2(estrogen receptor gene 1/2,ESR1/2)具有较好的结合活性。CCK8结果表明AIF对髁突软骨细胞无明显细胞毒性。与IL⁃1β组相比,IL⁃1β+10μmol/L AIF组中AIF可抑制髁突软骨细胞凋亡;与IL⁃1β组相比,IL⁃1β+10μmol/L AIF组和IL⁃1β+30μmol/L AIF组中AIF可上调Bcl2和下调Caspase⁃3 mRNA和蛋白表达,抑制ADAMTS4、MMP3和MMP13 mRNA和蛋白表达。结论AIF可通过上调Bcl2与下调Caspase⁃3 mRNA和蛋白表达抑制TMJOA细胞模型中髁突软骨细胞凋亡,同时抑制由IL⁃1β诱导的细胞外基质降解,延缓TMJOA进展。

葡萄籽原花青素对肾缺血再灌注损伤大鼠肾组织中Caspase-3和TRAF6表达的影响

目的:研究葡萄籽原花青素对肾缺血再灌注损伤(RIRI)大鼠肾组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和肿瘤坏死因子相关受体(TRAF6)表达的影响,探讨葡萄籽原花青素对RIRI的保护机制。方法:将50只大鼠随机分为假手术组、模型组、肾复康胶囊组(阳性对照,600 mg/kg)和葡萄籽原花青素低、高剂量组(100、150 mg/kg),每组10只。每天ig给药1次,连续7 d。给药结束后,除假手术组的其余各组大鼠均复制RIRI模型。造模成功24 h后,检测各组大鼠血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平以及肾组织中Caspase-3、TRAF6蛋白表达,并测定肾小管上皮细胞凋亡率。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清中Cr、BUN水平明显升高(P<0.05),肾组织中Caspase-3、TRAF6蛋白表达明显增强(P<0.05),肾小管上皮细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组大鼠血清中Cr、BUN水平均明显降低(P<0.05),肾组织中Caspase-3、TRAF6蛋白表达均明显减弱(P<0.05),肾小管上皮细胞凋亡率均明显降低(P<0.05),且葡萄籽原花青素高剂量组作用优于葡萄籽原花青素低剂量组和肾复康胶囊组(P<0.05)。结论:葡萄籽原花青素能减轻大鼠RIRI,这可能是通过下调肾组织中Caspase-3、TRAF6蛋白的表达,从而抑制肾小管上皮细胞凋亡来实现的。

黄竹清脑颗粒对痰热腑实证脑出血大鼠急性期脑组织中Caspase-3表达的影响

目的:探讨黄竹清脑颗粒对痰热腑实证脑出血模型大鼠急性期脑组织中半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)表达的影响。方法:采用SD大鼠自体粪便灌胃配合胶原酶Ⅶ-肝素混合液立体定位注射的方法复制痰热腑实证脑出血大鼠模型,免疫组化法测定大鼠脑组织中Caspase-3表达的变化。结果:①黄竹清脑颗粒可明显减轻痰热腑实证脑出血大鼠喉中痰鸣、鼻分泌物多,粪便干结,烦躁等症状,并可改善大鼠脑出血后的神经体征;②黄竹清脑颗粒大、中剂量组明显优于清开灵颗粒组(P<0.05)。结论:黄竹清脑颗粒能降低大鼠脑出血后血肿周围神经元活化caspase-3的表达,阻止神经元的凋亡,可能是其保护脑神经细胞的作用机理之一。