敲低dachshund同源物1(DACH1)促进Capan-1胰腺癌细胞凋亡并抑制其侵袭和迁移

目的探讨抑制dachshund同源物1(DACH1)的表达对Capan-1胰腺癌细胞周期、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法设计合成针对人DACH1基因的4条小干扰RNA(si RNA),退火形成双链短发夹RNA(shRNA),插入p Genesil-1载体中,构建成重组质粒,进行酶切及测序鉴定,通过脂质体介导转染入Capan-1细胞,利用荧光显微镜、反转录PCR和Western blot法检测其转染表达效率。藻红蛋白标记的膜联蛋白Ⅴ和7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7AAD)双标记结合流式细胞术检测Capan-1细胞凋亡和流式细胞术检测细胞周期,TranswellTM侵袭、迁移实验检测Capan-1细胞侵袭迁移能力。结果成功构建并筛选出干扰质粒pshRNA-DACH1,将其转染Capan-1胰腺癌细胞后,成功下调Capan-1细胞DACH1水平,同时细胞凋亡明显增加,而对细胞周期无明显影响。下调DACH1表达后细胞侵袭和迁移能力均降低。结论敲低DACH1基因表达能显著促进胰腺癌细胞Capan-1凋亡,抑制其侵袭及迁移。

食管癌组织中DACH1基因的甲基化状态及其与患者的临床病理特征及预后的相关性

目的检测食管癌组织中细胞命运决定因子(DACH1)基因的甲基化状态,分析其与患者临床病理特征及预后的关系。方法收集104例食管癌患者的肿瘤组织、癌旁组织和正常食管黏膜组织标本,用甲基化特异性PCR检测DACH1基因的甲基化状态。采用单因素分析和多因素Logistic回归模型分析其与患者临床病理特征的相关性;用Kaplan-Meier生存曲线分析食管癌患者DACH1甲基化状态与预后生存期的关系。结果食管癌肿瘤组织中DACH1基因的甲基化率为30.77%(32/104),高于癌旁组织的1.92%(2/104)和正常食管黏膜组织的0%(0/104)(P<0.05)。食管癌组织中DACH1甲基化状态与患者的年龄、性别、病理类型无关(P>0.05),而与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。肿瘤的分化程度、TNM分期、淋巴结转移是DACH1基因甲基化状态的独立风险因素且均与DACH1基因甲基化状态相关。截止至2020年3月,104例食管癌患者中共死亡89例。其中DACH1基因甲基化的食管癌患者中位生存时间为22个月,低于DACH1基因未甲基化者的34个月(P<0.05)。结论食管癌中存在的DACH1甲基化过程可能参与食管癌的发生发展。患者的肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移是DACH1基因甲基化状态的独立风险因素。DACH1基因未甲基化的患者具有更长的预后生存期。