两种pH值条件下CNBr活化Sepharose 4B偶联DSA方法的比较研究

目的研究碱性、中性两种条件下CNBr活化Sepharose 4B偶联欧蔓陀罗凝集素(DSA)的效果。方法在两种偶联条件下,通过改变CNBr用量、活化时间以及温度等条件,观察DSA的偶联率指标。结果碱性条件下,活化15 min即使增加CNBr用量至300 mg/ml凝胶,固定化凝集素偶联率没有提高,DSA偶联率较低,在29.1%~50.9%之间;中性条件下,CNBr用量仅为碱性条件下的20%,活化温度控制在-10^-20℃可能获得较好的活化效果,DSA偶联率在78.8%~80.9%之间。结论中性条件下CNBr活化Sepharose 4B偶联DSA,实验易于控制,DSA偶联率比较稳定,实验重复性好于碱性条件下的结果,且可获较高偶联率的DSA-Sepharose 4B。

血清碱性磷酸酶的凝集素亲和层析在肝脏疾病鉴别诊断中的应用

血清碱性磷酸酶（ＡＬＰ）通过ＷＧＡ亲和层析柱后，可分成不结合的峰Ⅰ和结合的峰Ⅱ两个活力峰，峰Ⅰ为肝型（Ｌ－ＡＬＰ），而峰Ⅱ为骨型（Ｂ－ＡＬＰ）。Ｌ－ＡＬＰ在急性肝炎时明显增高；慢性肝炎或肝癌时轻度上升，而肝硬化时变化不大。如将Ｌ－ＡＬＰ再通过欧蔓陀罗凝集素（ＤＳＡ）亲和层析柱，则正常血清Ｌ－ＡＬＰ完全不被ＤＳＡ结合；急性肝炎的血清Ｌ－ＡＬＰ有部分为弱结合；慢性肝炎和肝硬化除弱结合组分外，出现较多的中度结合组分；而原发性肝癌则出现中度结合组分及特有的强结合组分。这些结果说明肝病越发展成慢性或恶习性或恶性，血清Ｌ－ＡＬＰ和ＤＳＡ的结合力越强。这可应用于临床上鉴别各类不同肝的。肝病血清Ｌ－ＡＬＰ结合于ＤＳＡ增多的原因主要是Ｎ－连接型糖链的无线数增加，后者尚可从天线末端唾液酸增多以及强结合组分不被ＣｏｎＡ结合而获得证明。