关节软骨细胞体外培养不同时间去分化现象发生过程及规律

目的研究软骨细胞体外培养不同时间去分化现象发生过程及规律。方法倒置显微镜观察体外培养软骨细胞形态变化;根据每代每日细胞计数结果,绘制生长曲线,检测细胞增殖能力;采用免疫组织化学方法检测软骨细胞分泌II型胶原的变化规律。结果随着培养时间的延长,软骨细胞形态发生明显的改变;细胞增殖能力及分泌细胞外基质II型胶原的能力逐渐减低。结论兔关节软骨细胞体外培养时第3代开始出现去分化现象,至第5代(8周)时去分化现象明显。

白藜芦醇对软骨细胞去分化现象的作用机制

该实验观察白藜芦醇(Resveratrol,Resv)对兔关节软骨细胞去分化现象的作用并探讨其可能的机制。首先,在无菌条件下取4周龄兔关节软骨细胞,行软骨细胞鉴定后将细胞随机分成5组:空白组、0μmol/L Resv组、2.5μmol/L Resv组、5μmol/L Resv组和10μmol/L Resv,体外单层培养传代至第5代。分别取P1、P3、P5代细胞在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,倒置相差显微镜下观察到各组P1代软骨细胞形态基本一致,P3、P5代2.5μmol/L Resv组细胞形态变化不大,其余各组细胞出现胞体变大,胞浆变淡,镜下胞核不明显等衰老的形态变化;Alcian Blue染色检测蛋白聚糖(Aggrecan)含量和β-半乳糖苷酶染色检测衰老软骨细胞,各组P1代细胞Alcian Blue染色和β-半乳糖苷酶染色无明显差别,P3、P5代2.5μmol/L白藜芦醇组较其他组明显深染、衰老软骨细胞数明显减少;RT-PCR检测蛋白多糖(Aggrecan),沉默信息调节因子1(SIRT1),抑癌基因p53、p21以及P16的表达,2.5μmol/L Resv组的Aggrecan和SIRT1基因表达明显上调,P53、P21及P16基因表达显著下调。综上所述:低浓度白藜芦醇(2.5μmol/L)可能通过上调SIRT1,下调P53、P21、P16基因的表达抑制软骨细胞去分化的现象。