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GST-P12融合蛋白的抗体制备、鉴定及免疫组化分析
被引量:
2
1
作者
邵小钧
陈伟
+3 位作者
孙沫逸
孙文斌
戴建武
张圃
《现代肿瘤医学》
CAS
2007年第4期463-465,共3页
目的:为了进一步研究p12DOC-1基因及其蛋白在口腔癌发生中的作用与调控机制,将已表达纯化好的GST-p12融合蛋白进行多克隆抗体的制备及鉴定。方法:将构建好的融合表达载体pGEX-4T-1-DOC-1转化BL21(DE3)型大肠杆菌,用IPTG诱导表达,得到GST...
目的:为了进一步研究p12DOC-1基因及其蛋白在口腔癌发生中的作用与调控机制,将已表达纯化好的GST-p12融合蛋白进行多克隆抗体的制备及鉴定。方法:将构建好的融合表达载体pGEX-4T-1-DOC-1转化BL21(DE3)型大肠杆菌,用IPTG诱导表达,得到GST-p12融合蛋白,经亲和层析柱纯化后电泳,再割胶研磨作为抗原直接免疫家兔,经Western blot及ELISA检测抗体效价及特异性并做免疫组化分析。结果:得到较高纯度的GST-p12融合蛋白,获得了兔来源的抗p12DOC-1血清,经蛋白免疫印迹杂交反应及免疫组化分析证实所得的抗体具有较高的特异性和效价。结论:成功制备了兔抗人的p12DOC-1抗血清,为进一步研究p12DOC-1在口腔癌中发生缺失的机理打下基础。
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关键词
p
1
2DOC-
1
蛋白
口腔癌缺失
融合蛋白
多克隆抗体
免疫组织化学
下载PDF
职称材料
DOC-1基因的原核表达载体构建及其重组蛋白的表达纯化
被引量:
3
2
作者
邵小钧
孙沫逸
+3 位作者
李连科
陈伟
杨耀武
李建虎
《中国美容医学》
CAS
2007年第4期447-450,共4页
目的:克隆DOC-1基因、构建原核表达载体并纯化出其重组蛋白。方法:从人胎脑组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增DOC-1的CDS序列,再通过基因重组技术将该基因片段依次克隆到pMD18-T和pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体p...
目的:克隆DOC-1基因、构建原核表达载体并纯化出其重组蛋白。方法:从人胎脑组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增DOC-1的CDS序列,再通过基因重组技术将该基因片段依次克隆到pMD18-T和pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-1-DOC-1,经酶切、测序鉴定后,用该重组质粒转化E.coliBL21,用IPTG诱导表达,GlutathioneSepharose4B柱亲和层析纯化重组蛋白。结果:电泳证实RT-PCR扩增产物与预期目的基因DOC-1长度一致,测序结果与GenBank公布的DOC-1基因序列完全一致,IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳分析表明,在相对分子质量38000左右出现新的蛋白表达条带,经亲和层析柱纯化后得到高纯度的GST-p12重组蛋白。结论:成功构建了pGEX-4T-1-DOC-1原核表达载体,表达并纯化出GST-p12重组蛋白,为进一步研究p12DOC-1蛋白打下了实验基础。
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关键词
p
1
2^DOC-
1
蛋白
口腔癌缺失
基因克隆
基因表达
下载PDF
职称材料
口腔鳞状细胞癌组织中lncRNA DLEU1的表达及其与临床病理参数和预后的关系
3
作者
朱江
董伟杰
+2 位作者
黄丹
宋冬惠
吴森斌
《中华临床医师杂志(电子版)》
CAS
北大核心
2022年第2期131-135,共5页
目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)的表达及与临床病理参数和预后的关系。方法收集2017年1月至2017年12月南通大学附属医院保存的98例OSCC组织及癌旁组织,实时荧光定量-聚合酶链...
目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)的表达及与临床病理参数和预后的关系。方法收集2017年1月至2017年12月南通大学附属医院保存的98例OSCC组织及癌旁组织,实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRTPCR)检测癌组织和癌旁组织中lncRNA DLEU1表达。分析lncRNA DLEU1表达与OSCC患者临床病理参数的关系,K-M法绘制不同lncRNA DLEU1表达OSCC患者生存曲线,多因素Cox回归分析OSCC患者预后不良影响因素。结果OSCC组织中lncRNA DLEU1表达(1.863±0.572)高于癌旁组织(1.058±0.211)(t=13.058,P<0.001)。lncRNA DLEU1表达与OSCC患者肿瘤区域淋巴结转移(TNM)分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。中位随访26个月,lncRNA DLEU1≥1.863生存率为61.22%,低于lncRNA DLEU1<1.863的79.59%(Log-rankχ^(2)=4.819,P=0.028)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期(HR=4.612,95%CI:1.482~11.352)、淋巴结转移(HR=4.370,95%CI:1.442~10.246)、lncRNA DLEU1≥1.863(HR=4.231,95%CI:1.350~10.260)是OSCC患者预后不良的独立风险因素(P<0.05)。结论OSCC组织中lncRNA DLEU1高表达,与TNM分期、淋巴结转移和预后相关,可能成为新的OSCC诊治和预后分子标志物。
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关键词
口腔鳞状细胞癌
长链非编码RNA
淋巴细胞白血病缺失基因
1
原文传递
题名
GST-P12融合蛋白的抗体制备、鉴定及免疫组化分析
被引量:
2
1
作者
邵小钧
陈伟
孙沫逸
孙文斌
戴建武
张圃
机构
第四军医大学口腔医院颌面外科
武警指挥学院医院
中国科学院遗传与发育生物学研究所
出处
《现代肿瘤医学》
CAS
2007年第4期463-465,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(项目编号:30572059)
陕西省科技攻关项目[项目编号:2006K09-G10(4)]
教育部留学人员科研启动基金(项目编号:2002HG001)
文摘
目的:为了进一步研究p12DOC-1基因及其蛋白在口腔癌发生中的作用与调控机制,将已表达纯化好的GST-p12融合蛋白进行多克隆抗体的制备及鉴定。方法:将构建好的融合表达载体pGEX-4T-1-DOC-1转化BL21(DE3)型大肠杆菌,用IPTG诱导表达,得到GST-p12融合蛋白,经亲和层析柱纯化后电泳,再割胶研磨作为抗原直接免疫家兔,经Western blot及ELISA检测抗体效价及特异性并做免疫组化分析。结果:得到较高纯度的GST-p12融合蛋白,获得了兔来源的抗p12DOC-1血清,经蛋白免疫印迹杂交反应及免疫组化分析证实所得的抗体具有较高的特异性和效价。结论:成功制备了兔抗人的p12DOC-1抗血清,为进一步研究p12DOC-1在口腔癌中发生缺失的机理打下基础。
关键词
p
1
2DOC-
1
蛋白
口腔癌缺失
融合蛋白
多克隆抗体
免疫组织化学
Keywords
p
1
2DOC-
1
protein
deleted in oral cancer- 1
fusion protein
polyclonal antibody
immunohistochemis-try
分类号
R730.3 [医药卫生—肿瘤]
下载PDF
职称材料
题名
DOC-1基因的原核表达载体构建及其重组蛋白的表达纯化
被引量:
3
2
作者
邵小钧
孙沫逸
李连科
陈伟
杨耀武
李建虎
机构
第四军医大学口腔医院颌面外科
解放军第
出处
《中国美容医学》
CAS
2007年第4期447-450,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:30572059)
陕西省科技攻关项目(编号:2006K09-G10(4))
教育部留学人员科研启动基金资助项目(编号:2002HG001)
文摘
目的:克隆DOC-1基因、构建原核表达载体并纯化出其重组蛋白。方法:从人胎脑组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增DOC-1的CDS序列,再通过基因重组技术将该基因片段依次克隆到pMD18-T和pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-1-DOC-1,经酶切、测序鉴定后,用该重组质粒转化E.coliBL21,用IPTG诱导表达,GlutathioneSepharose4B柱亲和层析纯化重组蛋白。结果:电泳证实RT-PCR扩增产物与预期目的基因DOC-1长度一致,测序结果与GenBank公布的DOC-1基因序列完全一致,IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳分析表明,在相对分子质量38000左右出现新的蛋白表达条带,经亲和层析柱纯化后得到高纯度的GST-p12重组蛋白。结论:成功构建了pGEX-4T-1-DOC-1原核表达载体,表达并纯化出GST-p12重组蛋白,为进一步研究p12DOC-1蛋白打下了实验基础。
关键词
p
1
2^DOC-
1
蛋白
口腔癌缺失
基因克隆
基因表达
Keywords
p
1
2^DOC-
1
protein
deleted
in
oral
cancer
gene cloning
gene expression
分类号
Q813.1 [生物学—生物工程]
下载PDF
职称材料
题名
口腔鳞状细胞癌组织中lncRNA DLEU1的表达及其与临床病理参数和预后的关系
3
作者
朱江
董伟杰
黄丹
宋冬惠
吴森斌
机构
南通大学附属医院口腔科
浙江省嘉兴市第一医院口腔科
出处
《中华临床医师杂志(电子版)》
CAS
北大核心
2022年第2期131-135,共5页
基金
浙江省医药卫生科研基金项目(2017KY650)
南通市市级科技计划项目(JCZ19112)。
文摘
目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)的表达及与临床病理参数和预后的关系。方法收集2017年1月至2017年12月南通大学附属医院保存的98例OSCC组织及癌旁组织,实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRTPCR)检测癌组织和癌旁组织中lncRNA DLEU1表达。分析lncRNA DLEU1表达与OSCC患者临床病理参数的关系,K-M法绘制不同lncRNA DLEU1表达OSCC患者生存曲线,多因素Cox回归分析OSCC患者预后不良影响因素。结果OSCC组织中lncRNA DLEU1表达(1.863±0.572)高于癌旁组织(1.058±0.211)(t=13.058,P<0.001)。lncRNA DLEU1表达与OSCC患者肿瘤区域淋巴结转移(TNM)分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。中位随访26个月,lncRNA DLEU1≥1.863生存率为61.22%,低于lncRNA DLEU1<1.863的79.59%(Log-rankχ^(2)=4.819,P=0.028)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期(HR=4.612,95%CI:1.482~11.352)、淋巴结转移(HR=4.370,95%CI:1.442~10.246)、lncRNA DLEU1≥1.863(HR=4.231,95%CI:1.350~10.260)是OSCC患者预后不良的独立风险因素(P<0.05)。结论OSCC组织中lncRNA DLEU1高表达,与TNM分期、淋巴结转移和预后相关,可能成为新的OSCC诊治和预后分子标志物。
关键词
口腔鳞状细胞癌
长链非编码RNA
淋巴细胞白血病缺失基因
1
Keywords
oral
squamous cell carcinoma
Long non-coding RNA
delet
ion of gene
1
in lymphocytic leukemia
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GST-P12融合蛋白的抗体制备、鉴定及免疫组化分析
邵小钧
陈伟
孙沫逸
孙文斌
戴建武
张圃
《现代肿瘤医学》
CAS
2007
2
下载PDF
职称材料
2
DOC-1基因的原核表达载体构建及其重组蛋白的表达纯化
邵小钧
孙沫逸
李连科
陈伟
杨耀武
李建虎
《中国美容医学》
CAS
2007
3
下载PDF
职称材料
3
口腔鳞状细胞癌组织中lncRNA DLEU1的表达及其与临床病理参数和预后的关系
朱江
董伟杰
黄丹
宋冬惠
吴森斌
《中华临床医师杂志(电子版)》
CAS
北大核心
2022
0
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