人膀胱癌荷瘤鼠中shRNA沉默ΔNp63基因对肿瘤的抑制和cyclin D_1表达的影响

目的利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默ΔNp63基因的表达,研究其对人膀胱癌裸鼠皮下移植模型的抑瘤作用,同时检测ΔNp63基因被抑制后对细胞周期素D1(cyclin D1)表达的影响。方法建立人膀胱癌裸鼠皮下移植模型,构建ΔNp63基因特异性shRNA(short hairpin)表达质粒,将表达质粒转染荷瘤鼠瘤体。将符合实验条件的15只裸鼠分为3组:ΔNp63-shRNA组、Control-shRNA组与生理盐水组,每组5只。观察各组肿瘤生长情况、瘤组织超微结构的改变,检测ΔNp63基因和蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)和cyclin D1蛋白表达的变化。结果转染质粒8周后,ΔNp63-shRNA组与生理盐水组瘤体积有显著性差异(P<0.01),抑瘤率为74.44%,Control-shRNA组与生理盐水组体积无显著性差异(P>0.05)。病理结果显示ΔNp63-shRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞核分裂象减少,可见大量肿瘤细胞坏死和凋亡、炎症细胞浸润。RT-PCR结果显示ΔNp63-shRNA组ΔNp63基因表达降低。免疫组化结果显示ΔNp63、PCNA、cyc-lin D1蛋白表达均降低。结论ΔNp63特异性shRNA质粒表达载体沉默ΔNp63基因后,可显著抑制人膀胱癌裸鼠肿瘤的生长,ΔNp63可能通过抑制cyclin D的表达而抑制肿瘤的细胞增殖。

沥青烟致肺损伤细胞凋亡及突变的实验研究

目的探讨沥青烟对肺组织的损伤机制,早期发现沥青烟致肺癌的预警指标。方法建立染毒小鼠模型,进行不同剂量(55、165 mg/m3)和不同时间(30 d、60 d)染毒,光镜下观察肺组织形态改变;采用免疫组化S-P法,进行p53、p21、cyclin D1染色,观察p53、p21WAF/CIP1和cyclin D1基因蛋白表达;采用流式细胞仪进行小鼠肺组织细胞DNA含量的检测和细胞周期分析。结果随着沥青烟染毒时间和剂量增加,小鼠肺组织表现为不同程度的不典型增生;小鼠肺组织p53基因蛋白在低剂量染毒30 d组未见阳性表达,高剂量60 d组呈强阳性表达(P<0.01)。p21WAF/CIP1基因蛋白表达在低剂量染毒30 d组呈阳性表达,高剂量染毒60 d组表达明显下调(P<0.01)。cyclin D1基因蛋白表达同p53基因蛋白表达;小鼠肺组织细胞各周期指数均发生变化,G1期细胞数下降,S期阻滞,进入G2/M期的细胞减少,细胞增殖指数(PI)增加(P<0.05),异倍体指数(DI)升高(P<0.05),与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。相同染毒时间55 mg/m3剂量组和165 mg/m3剂量组的PI均高于对照组,相同染毒剂量下60 d组D1随时间的增加而升高(P<0.05)。结论沥青烟损伤肺组织影响细胞周期、S期DNA含量增加,细胞增殖能力增强,突变几率提高,可能与p53和cyclin D1基因蛋白表达增高及p21WAF/CIP1基因蛋白的转录抑制相关。