特异切割DEN-2基因的核酶基因的合成与克隆

为探索有效的登革热治疗方法 ,根据DEN - 2基因结构的特点 ,按照锤头状核酶的结构模型和作用模式 ,设计、合成了针对 172～ 174GUC位点的核酶基因 ;其末端分别加上SacI和SalI接头 ,定向插入质粒pGEM - 3zf (+ )的SacI和SalI位点之间 ;其引导序列中的PvuII位点 ,提供了快速简便的核酶克隆的鉴定方法。PvuII酶切鉴定的核酶基因克隆经序列分析 ,结果与预期完全一致。证明得到了特异切割DEN - 2基因的核酶基因克隆 ,为进一步核酶抗DEN -

抗DEN-2基因核酶的克隆及其体外切割活性的研究

目的 探索核酶抗登革病毒活性。方法 根据DEN 2基因结构的特点 ,按照锤头状核酶的结构模型和作用模式 ,设计、合成针对 172～ 174GUC位点的核酶基因 ;定向插入质粒pGEM 3Zf(+)的SacⅠ和SalⅠ位点之间 ;核酶基因克隆和DEN 2靶基因克隆分别进行体外转录 ,生成核酶和靶RNA ,体外进行切割反应。结果 核酶与登革病毒靶序列体外产物电泳见预期切割条带。结论 该核酶具有切割相应靶RNA的活性 。

DEN-2分离株E基因部分序列原核蛋白表达

目的通过构建登革2型病毒(DEN-2)临床分离株(B株)E基因区1-476bp的原核表达载体,进行原核表达,为DEN-2E蛋白功能的研究提供基础依据。方法将DEN-2B株E基因区部分序列克隆入原核表达载体pET28a(+),命名为pET28a(+)-Eb;经酶切、PCR及测序鉴定后转化BL21(DE3)菌株,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白印迹(Western blot)鉴定表达蛋白;对表达蛋白进行纯化,并滴定对C6/36细胞的细胞半数致死量(TCID50)。结果成功构建了pET28a(+)-Eb原核表达重组质粒;SDS-PAGE分析表明,E基因区部分序列获得高效表达,其相对分子量约为23kDa,表达量约占菌体总蛋白的29%;Western blot表明,该目的蛋白可与DEN-2鼠单克隆抗体结合。用Ni柱亲和层析法纯化原核表达蛋白,纯度达90%。DEN-2B株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞的TCID50为10-5.31。结论pET28a(+)-Eb可在BL21(DE3)菌株中高效表达;DEN-2B株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞有明显的细胞毒作用。

几种纳米载体的应用研究进展

纳米载体是近年来药剂学的研究热点领域之一,本文对固体脂质纳米粒、多聚体纳米粒、聚合物胶束、纳米乳及树枝状大分子等几种纳米载体及其在近几年的应用进展进行了详细的概述,重点对纳米载体在提高药物的生物利用度、缓控释药物、靶向性给药、降低药物的毒副作用、基因治疗等方面的应用及前景等进行了综述。