粉花石斛化学成分研究

粉花石斛Dendrobium loddigesii Rolfe的茎为常用中药石斛的品种之一,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功效,其化学成分未见研究报道。本文从粉花石斛鲜茎中分得3个化合物,分别鉴定为石斛宁定(shihunidine)、石斛宁(shihunine)和石斛酚(dendrophenol),其中石斛宁定为新化合物,经化学反应证明,石斛宁定是由石斛宁产生的非天然产物。石斛宁定和石斛宁具有强的抑制大鼠肾脏微粒体Na^+,K^+-ATP酶活性的作用。

切片与切段对叠鞘石斛多糖、联苄类化合物及石斛酚提取量的影响研究

目的:研究切片、切段对叠鞘石斛中多糖、联苄类化合物及石斛酚提取量的影响,比较叠鞘石斛切片、切段的优劣。方法:将叠鞘石斛燀蒸后切制成长度为10 mm的段及厚度为4mm的片,于60℃烘干,然后将叠鞘石斛片(段)煎煮60、90、120 min及温浸60、90 min;采用紫外-可见分光光度法测定其在煎煮及温浸过程中多糖、联苄类化合物提取量,采用高效液相色谱法测定叠鞘石斛片(段)中石斛酚的提取量;另计算浸出物提取率。结果:在煎煮过程中,叠鞘石斛片较石斛段多糖、联苄类化合物提取量分别增加了0.06～0.17、0.08～0.11mg/g,石斛酚提取率增高了37.5%;在温浸过程中,叠鞘石斛片较石斛段多糖、联苄类化合物提取量分别增加了0.33～0.58、0.17～0.28mg/g;叠鞘石斛片较石斛段的水溶性浸出物及醇溶性浸出物提取率分别增高了2.89%、0.98%。结论:叠鞘石斛切片优于切段,本研究可为《中国药典》中石斛切制时改段为片提供一定的参考。

铁皮石斛羟基肉桂酰基转移酶基因家族生物信息学及其表达分析

【目的】对铁皮石斛HCT(Hydroxycinnamoyl transferase)基因家族进行特征鉴定和表达模式分析,为研究铁皮石斛黄酮类化合物和石斛酚的生物合成奠定研究基础。【方法】通过NCBI在线网站获得铁皮石斛的基因数据信息,利用生物信息学方法分析铁皮石斛DoHCT基因家族成员系统进化树、DoHCTs保守基序和保守结构域,并且预测DoHCT家族成员的蛋白二级和三级结构;同时利用逆转录PCR的方法分析DoHCTs在不同胁迫条件下以及在根茎叶中的差异表达情况。【结果】铁皮石斛DoHCTs共有8个家族成员(DoHCT 1~8),保守结构域分析结果显示:DoHCT7~8属于转移酶超家族,DoHCT 1~6属于PLN02481超家族。该家族基因的表达可受到非生物胁迫不同程度的影响,其中高温条件下DoHCT家族基因均下调表达;组织表达检测结果显示除DoHCT7外,其余基因均在根茎叶中差异表达。【结论】在全基因组水平对DoHCT家族进行了系统的生物信息学分析,显示DoHCTs在不同胁迫下以及铁皮石斛根茎叶中存在差异表达,证实其在非生物胁迫应答中起到调控作用。

HPLC法测定流苏石斛精制饮片中石斛酚的含量

目的：建立流苏石斛精制饮片中的石斛酚的含量测定方法。方法：采用Hypersil–C18（200mm×4.6mm,5μm）为色谱柱,流动相为乙腈-0.05%三氟乙酸（梯度洗脱）,流速为1.0m L/min,检测波长为230nm。结果：石斛酚进样量在0.4~4.0μg范围内有良好的线性关系,r=0.9994,平均回收率99.65%,RSD为1.87%。结论：所建立方法操作简便、准确、可靠、重复性好,可用于流苏石斛精制饮片中石斛酚的含量测定。

浙产铁皮石斛不同生长期石斛酚、有机酸和黄酮类成分积累变化

目的:建立铁皮石斛中石斛酚含量测定方法,并对不同生长期浙产铁皮石斛石斛酚、有机酸和黄酮类成分进行测定分析,以期从次生代谢物角度为浙产铁皮石斛采收期确定提供参考。方法:采用ACQUITY UPLCBEH C18(2.1mm×100mm,1.8μm)色谱柱,0.1%甲酸-水溶液(A)及0.1%甲酸-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.6mL/min,柱温40℃,正离子多反应监测(MRM)模式对石斛酚进行含量测定。结果:石斛酚在检测浓度范围内呈良好线性关系(R2=0.9997),加样回收率为95.45%,RSD值为2.1%。测定结果显示在一个生长周期内各成分总体含量表现出先降低后升高再降低的趋势,在花期及花期后达到最高;各成分分别在花期、花期后或封顶期含量最高。结论:花期及花期后(6～7月份)可作为浙产铁皮石斛潜在的最佳采收期进行更深入研究。

不同生长年限霍山石斛高效液相指纹图谱研究

目的建立霍山石斛Dendrobium huoshanense的HPLC指纹图谱,同时测定不同生长年限霍山石斛中丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素含量,为霍山石斛药材质量的评价提供依据。方法采用Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长240 nm,柱温30℃;将色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1),对不同年限的霍山石斛样品进行相似度分析;峰面积导入SPSS软件进行聚类分析,从树状图上判断聚类效果。结果本方法建立的指纹图谱共有13个共有峰,指认了其中4个共有峰,分别为丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素;不同年限的栽培霍山石斛相似度结果小于0.900,不同年限的仿野生霍山石斛相似度结果大于0.900。结论HPLC指纹图谱结合化学计量学方法能够评价和鉴别不同年限的霍山石斛,为霍山石斛药材的采收、开发、评价等提供参考。