RNA干扰沉默VDR基因对小鼠成骨细胞Dmp1、Cbfa1及BMP-2 mRNA表达的影响

目的:利用RNA干扰技术,阻断VDR在小鼠成骨细胞株mc3t3-E1中的表达,观察VDR表达受抑后对小鼠成骨细胞Dmp1、Cbfa1及BMP-2基因mRNA表达的影响。方法:针对小鼠VDRmRNA144、594、852、3628位点设计、合成4对21核苷酸siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3、siRNA4);在阳离子脂质体介导下转染mc3t3-E1细胞,以空白及非特异性siRNA作为对照,各组于转染24h及72h后收集细胞分别抽提RNA及蛋白。采用RT-PCR法检测细胞中VDRmRNA表达水平的改变,Westernblot法检测VDR蛋白表达的变化,从而筛选有效序列。进一步应用SYBRGreen荧光实时PCR方法定量检测成骨细胞功能基因-Dmp1、Cbfa1及BMP-2基因mRNA表达情况。结果:与空白对照组相比,转染siRNA3、siRNA4的mc3t3-E1细胞VDRmRNA和蛋白表达明显下调(P<0.01),转染siRNA1、2及非特异性siRNA的mc3t3-E1细胞VDR的表达与对照组相比无显著差异(P>0.05)。荧光定量PCR结果显示,转染siRNA3、siRNA4的mc3t3-E1细胞Dmp1、Cbfa1、BMP-2mRNA表达明显下调(P<0.01)。结论:针对小鼠VDRmRNA852、3628位点设计、合成的siRNA可有效抑制小鼠成骨细胞株VDR的转录和表达;VDR表达受抑可下调mc3t3-E1细胞功能基因Dmp1、Cbfa1、BMP-2mRNA的表达;VDR在维持成骨细胞功能中起着一定的作用。