牙本质磷蛋白在犬乳恒牙替换期表达的原位杂交研究

目的 :观察牙本质磷蛋白 (DPP)mRNA在犬乳恒牙替换期的表达 ,寻找研究牙本质形成与损伤修复的良好模型。方法 :采用原位杂交的方法 ,检测犬牙替换期恒牙胚、发育中的恒牙和乳牙DPPmRNA的表达。结果 :犬恒牙胚、发育中的恒牙和乳牙均检测到DPPmRNA的表达 ,DPPmRNA存在强弱变化。结论 :DPP在犬牙存在表达 ,并具有时空特异性。

儿童乳牙牙髓干细胞顺硬度基质表面延展和向牙本质分化的潜能

背景:牙髓干细胞在适宜诱导条件下能够向牙本质分化,是牙齿组织工程的重要种子细胞。然而,以往所使用的诱导剂多为化学制剂,不利于体内应用。近来有报道称间充质干细胞能够顺材质硬度分化,这种由物理特性诱导的细胞分化研究报道较少。目的:观察人源性乳牙牙髓干细胞在硬介质表面的延展特点及向牙本质分化潜能,为牙组织工程提供参考。方法:原代分离培养和鉴定儿童自然脱落的乳牙牙髓干细胞;使用低熔点琼脂糖配制弹性模量为(9.12±0.94),(27.18±3.55),(59.37±4.05)和(86.45±5.33)k Pa4个梯度的固体凝胶基质,二维克隆形成实验和划痕实验检测第4代乳牙牙髓干细胞在上述硬基质表面的延展能力,Western blot方法检测牙本质基质蛋白1、牙本质磷蛋白、牙本质涎蛋白的表达。结果与结论:当人乳牙牙髓干细胞接种于极低和低等硬度凝胶介质表面时,乳牙牙髓干细胞几乎均以边缘整齐的细胞克隆存在,很少见细胞平铺和延展现象;但是当将其接种于中等和高等硬度凝胶介质表面时,乳牙牙髓干细胞克隆边缘则表现出明显的平铺和延展,表现为细胞胞体变大,细胞边缘外伸明显。相似的现象也经细胞划痕实验所验证。人源性乳牙牙髓干细胞在中等和高等弹性模量介质表面培养时,表达较高水平的牙本质基质蛋白1、牙本质磷蛋白、牙本质涎蛋白。结果表明,人源性乳牙牙髓干细胞随着培养基质硬度的增加其延展性及成牙本质分化能力逐渐增强,为未来牙组织工程提供方法借鉴。

氯化钠溶液对牙本质再矿化作用的影响

目的:探讨氯化钠溶液对脱矿牙本质再矿化晶体结构和Ca、P含量的影响。方法:制备20个脱矿人牙牙本质片,分成实验组和对照组,实验组用0.5 mol/L氯化钠溶液浸泡,对照组用去离子水浸泡,然后再矿化,通过X-衍射仪和X-荧光光谱仪观测比较再矿化后两组晶体结构和Ca、P含量的变化。结果:氯化钠溶液浸泡与去离子水浸泡的脱矿牙本质片相比较,再矿化后生成的晶体晶胞参数a轴缩短(P<0.01),c轴无明显变化(P>0.05),晶体结晶度增加。磨片上生成Ca、P含量显著增多(P<0.01)。结论:0.5 mol/L氯化钠溶液可以提高脱矿牙本质再矿化的效果,生成的晶体晶格更稳定。

牙本质磷蛋白基因突变和序列多态性分析

目的:检测牙本质磷蛋白基因在牙本质发育不全Ⅱ型患者中是否存在突变,并对其序列多态性进行分析。方法:采用PCR方法扩增牙本质磷蛋白基因编码区,通过DNA直接测序方法对其核苷酸序列进行分析。结果:在牙本质磷蛋白基因序列中未发现与疾病相关的特异性改变,但检测到该基因的核苷酸序列在不同个体间具有多态性,存在部分核苷酸的缺失以及广泛的单核苷酸多态现象。结论:牙本质磷蛋白基因在牙本质发育不全Ⅱ型患者中不存在突变,但牙本质磷蛋白基因序列具有多态性。

牙本质涎磷蛋白的研究进展

牙本质涎磷蛋白及其蛋白剪切产物—牙本质涎蛋白和牙本质磷蛋白是在牙本质发育、矿化中起重要作用的非胶原蛋白。关于牙本质涎磷蛋白的结构、功能、表达以及翻译后修饰等均有大量的研究,使之对牙本质涎磷蛋白的认识不断深入。本文就近年来关于牙本质涎磷蛋白的研究现状作一综述。

人牙本质磷蛋白功能片段的真核表达

目的 本研究旨在利用分子生物学技术真核表达包含功能区的人DPP片段。方法 构建了人DPP蛋白5′端基因片段的杆状病毒表达质粒pFastBacHb -hDPP -N ,经BH1 0BAC转座反应后感染昆虫细胞sf9,进行重组蛋白的表达。结果 经2～3代后,重组病毒产生明显的CPE ,人DSPP蛋白特异性多克隆抗体Westernblot鉴定,结果显示重组病毒感染3代毒sf9细胞的裂解物中在约1 7KD位置上出现了特异性的反应条带。结论 表明杆状病毒系统可表达人DPP基因片段。为进一步通过对人DPP功能片段的研究揭示DPP在牙齿发育和牙髓修复中的作用及其机制奠定基础。

小鼠牙本质磷蛋白cDNA的克隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠牙本质磷蛋白（ＤＰＰ）ｃＤＮＡ。方法：用异硫氰酸胍一步法从小鼠牙胚组织中抽提总ＲＮＡ，用ｏｌｉｇｏ（ｄｔ） 作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ，然后利用ＰＣＲ 方法，从ｃＤＮＡ 中扩增出小鼠ＤＰＰｃＤＮＡ基因片段（ 约１ ．６ｋｂ），将所得基因片段插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ 质粒载体，转化到大肠杆菌ＸＬ１ － Ｂｌｕｅ 后挑选阳性克隆，提取重组质粒ＤＮＡ，通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠ＤＰＰｃＤＮＡ 基因片段。

兔牙本质磷酸蛋白稳定性分析

目的 :探讨牙本质磷酸蛋白 (Dentinphosphoproteins,DPP)的稳定性机制。 方法 :通过钙离子沉淀法从兔切牙牙本质非胶原蛋白 (Dentinnon -collagenousproteins,NCP)中提取DPP ,并应用凝胶过滤及离子交换层析技术纯化磷酸蛋白 ,同时观察多种蛋白酶抑制剂对DPP降解的抑制作用。结果 :钙离子能够启动DPP的降解系统 ,而该作用可被巯基蛋白酶抑制剂N -顺丁烯二酰亚胺 (NEM )抑制 ,从而阻止DPP分解。结论 :提示NCPs中可能存在钙离子依赖性蛋白水解酶体系。

人牙本质磷蛋白基因全序列的亚克隆及其5’端序列的克隆和分析

目的 :本研究旨在鉴定质粒 pBlueBacHis2 -DPP上所携带的外源基因序列 ;建立带有人DPP基因的稳定克隆株 ;构建人DPP基因 5’端序列重组质粒 ,为表达纯化人DPP蛋白及其 5’端序列提供可参考的数据。方法 :用限制性内切酶分析并进行DNA序列测定质粒 pBlueBacHis2 -DPP上所携带的外源基因序列 ;以质粒pBlueBacHis2 -DPP为模板 ,构建人DPP基因 5’端序列重组质粒 ,并用蛋白序列分析软件包ANTHEPROT 4 5分析预测人DPP蛋白N端序列。结果和结论 :质粒pBlueBacHis2 -DPP上所携带的外源基因序列与基因文库上的人DPP基因序列相符合 ,建立带有人DPP基因的稳定克隆株pBV2 2 2 -DPP ;蛋白序列分析软件包分析预测人DPP蛋白N端序列氨基酸组成特点与人DPP全序列一致 ,体外即将表达的蛋白可能具有人DPP生物学功能的重组蛋白。

人牙本质磷蛋白功能片段的原核表达

目的本研究旨在利用分子生物学技术原核表达包含功能区的人DPP片段。方法首先构建带有人DPP基因5′端序列的GST融合蛋白表达质粒。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳。结果人牙本质磷蛋白基因5′端序列可在原核表达系统中进行不溶性表达,表达的融合蛋白分子量约为43KDa,进行初步纯化后,经SDS-PAGE证实,在预期位置出现了纯化蛋白条带。结论利用GST融合蛋白表达系统表达了人DPP功能片段。为进一步通过对人DPP功能片段的研究揭示DPP在牙齿发育和牙髓修复中的作用及其机制奠定基础。

兔磨牙压低过程中牙根吸收与DPP表达相关性的研究

目的建立新西兰大白兔磨牙压低致牙根吸收动物模型,检测龈沟液中牙本质磷蛋(DPP)的表达与牙根吸收的关系。方法雄性4个月大的新西兰大白兔66只,随机分成2组:不加力组、加50g力组。在左侧下颌第一磨牙根尖下前方打支抗钉作为强支抗,压低左侧下颌第一磨牙。分别在加力0d、3d、6d、9d、12d、15d、18d、21d、24d、27d、30d提取龈沟液,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测龈沟液中DPP的浓度,并制备实验牙及其牙周组织切片,行苏木精-伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色,用于观测牙根吸收陷窝面积和破牙骨质细胞数量。结果加50g力组,第0d到6d,DPP浓度逐渐升高,第6d到15d浓度处稳定水平,第15d到第21d浓度又再度升高,第21d到30d浓度降低,组间有显著差异(P <0.01)。根吸收相对面积和DPP浓度存在明显的相关性(P <0.05)。结论 DPP作为牙的特异性蛋白,参与正畸牙根吸收的发生、发展、修复,可以作为一种早期诊断正畸牙根吸收的重要指标。

矿化液对牙本质粘接系统粘结强度的影响

目的:研究矿化液在牙本质粘接中的作用,同时了解经过蛋白萃取剂处理牙本质后牙本质混和层再矿化是否受影响。方法:选择人正常双尖牙40颗去除牙合面釉质后随机分4组,制得酸蚀标本分别进行常规树脂修复+硅油浸泡(A组),常规树脂修复+人工唾液浸泡(B组),常规树脂修复+矿化液浸泡(C组)和NaC l溶液(蛋白萃取剂)+常规树脂修复+矿化液浸泡(D组)。12周后用能谱仪观察粘结界面混合层再矿化情况,同时用微拉力仪对牙本质粘结系统的粘结强度进行测试。结果:经矿化液浸泡组混合层钙磷比值显著升高(P<0.05),但0.5 mol/L NaC l溶液对混合层钙磷无影响(P>0.05),同时经矿化液浸泡组和硅油浸泡组的牙本质粘结系统微拉伸强度无统计学意义(P>0.05),但均显著高于人工唾液浸泡组(P<0.05)。结论:矿化液对牙本质粘结系统混合层的脱矿牙本质有再矿化作用,可相对提高粘结微拉伸强度;而0.5 mol/L NaC l溶液对增加牙本质粘结混合层再矿化能力无明显作用。

成牙本质细胞的基本特征及其研究进展

成牙本质细胞作为牙髓细胞的主要成分,具有在牙发育期间和成熟牙内生成牙本质的功能。目前的研究多基于牙髓细胞的二维体外培养,随着对牙髓组织研究的不断深入,牙髓细胞体外三维立体模型的建立将是未来研究的热点。作者回顾了近年来对成牙本质细胞的研究情况,主要阐述了成牙本质细胞的形态、超微结构、功能、蛋白表达的特征及其研究进展和今后的研究方向。

人牙髓细胞骨基质蛋白表达的研究进展

骨基质蛋白在骨骼和牙齿形成 ,以及损伤修复过程中起着重要作用。本文对骨涎蛋白 (BSP)、骨桥蛋白(OPN)、牙本质涎蛋白 (DSP)、牙本质磷蛋白 (DPP)、牙本质涎磷蛋白 (DSPP)的表达 ,以及在牙齿形成、损伤修复 。

氯化钠溶液对再矿化牙本质中氟含量的影响

目的:探讨氯化钠溶液对再矿化牙本质中氟含量的影响。方法:制备20个离体人牙脱矿牙本质片。分成实验组和对照组,实验组用0.5mmol/L氯化钠溶液浸泡12h,对照组用去离子水浸泡12h。两组均用含氟矿化液(CaCl21.5mmol/L、Na3PO40.9mmol/L、NaF体积分数10-5、PH值为7.0)进行再矿化。通过X-荧光光谱仪检测再矿化后两组牙本质片氟含量的变化。结果:实验组与对照组比较氟重量百分比增多。结论:0.5mol/L氟化钠溶液可以提高含氟矿化液矿化牙本质后氟的含量。

牙本质磷蛋白在大鼠牙齿发育中表达的原位杂交研究

目的 ;观察牙本质磷蛋白 (DPP)在大鼠牙齿发育各期的表达 ,探讨其在牙齿发育中的作用。方法 :采用原位杂交方法 ,检测大鼠牙齿发育各阶段DPPmRNA的表达。结果 :在分化成熟的大鼠成牙本质细胞中存在DPPmRNA表达 ,在前成釉细胞也存在DPPmRNA表达 ,在成釉细胞中可见较弱的表达 ,成牙骨质细胞和牙髓细胞呈阴性表达。结论 :DPP的表达具有明显的时空特异性 ,它不但对牙本质的形成起重要作用 。

大鼠正畸牙根吸收早期龈沟液中DPP的变化规律

目的:构建大鼠正畸牙根吸收模型,检测龈沟液中牙本质磷蛋白(DPP)的浓度变化规律。方法:雌性12周龄SD大鼠46只,其中16只取上颌第一磨牙及牙周组织,通过HE和TRAP染色观察不同时间点根吸收程度;另30只随机分为2组,持续加力28 d(CF组)和加力14 d后停止加力(IF组),收集龈沟液并通过ELISA检测DPP浓度。结果:持续加力14 d,DPP浓度逐渐升高,CF组与IF组间无显著差异(P>0.05);第14 d到28 d,CF组DPP浓度逐渐降低,而IF组DPP浓度在第21 d仍升高,组间有显著差异(P<0.01)。根吸收相对面积和DPP浓度显著相关(P<0.05)。结论:DPP作为牙的特异性蛋白,与正畸牙根吸收的修复相关,可能是早期诊断正畸牙根吸收的指标。

人牙本质磷蛋白对小型猪修复性牙本质形成作用的实验研究

目的 观察人牙本质磷蛋白 (dentinphosphoprotein ,DPP)对修复性牙本质形成的诱导作用 ,进一步研究DPP的功能。方法 用人DPP粉作盖髓剂 ,对小型猪健康恒牙进行盖髓实验 ,对照组采用氢氧化钙和空白对照 (氧化锌丁香油糊剂盖髓 ) ,通过组织病理学观察牙本质桥的形成。结果DPP盖髓术后 2周 ,穿髓孔下固有牙髓细胞分化为类造牙本质细胞 ,分布在已形成的修复性牙本质团块周围 ;术后 1个月有完整的修复性牙本质桥形成 ;术后 3个月修复性牙本质桥增厚且结构致密 ,主要是管样牙本质 ,其下方排列分化好的造牙本质细胞。氢氧化钙盖髓组 ,术后 2周界面有炎症坏死区 ,只有少量的钙质团块形成 ,1～ 3个月逐渐形成完整的修复性牙本质桥 ,但较DPP盖髓后形成修复性牙本质的速度慢且量较少。结论 人DPP对牙髓刺激性小 ,可以直接诱导牙髓细胞分化及修复性牙本质形成 ,提示DPP在牙本质发育和修复的生物矿化中起重要作用。

TGF-β_1对MDPC-23细胞DPP表达调控的体外研究

目的 :研究转化生长因子 β1(TGF -β1)对成牙本质细胞表达DPP的调控作用。方法 :给体外细胞培养的MDPC -2 3成牙本质细胞不同浓度的TGF -β1刺激 ,利用原位杂交的方法观察细胞内DPPmRNA的变化 ,所得结果进行图像分析和统计处理。结果 :TGF -β1刺激前后的成牙本质细胞均表达DPPmRNA ,但刺激后的成牙本质细胞DPPmRNA表达下降 ,不同浓度TGF -β1刺激成牙本质细胞后DPPmRNA表达程度不等。结论 :外源性TGF -β1下调成牙本质细胞表达DPP ,并有浓度差异。

Mineralization of calcium phosphate controlled by biomimetic selfassembled peptide monolayers via surface electrostatic potentials

The functions of acidic-rich domains in non-collagenous protein during biomineralization are thought to induce nucleation and control the growth of hydroxyapatite.The tripeptide Asp-Ser-Ser(DSS)repeats are the most common acidic-rich repeated unit in non-collagenous protein of dentin phosphoprotein,the functions of which have aroused extensive interests.In this study,biomimetic peptides(DSS)n(n=2 or 3)were designed and fabricated into self-assembled monolayers(SAMs)on Au(111)surface as biomimetic organic templates to regulate hydroxyapatite(HAp)mineralization in 1.5 simulated body fluid(1.5 SBF)at 37°C.The early mineralization processes and minerals deposited on the SAMs were characterized by X-ray diffraction,scanning electron microscope,and Fourier transform infrared spectroscopy analyses.The SAM-DSS9/DSS9G showed the highest capacity to induce HAp nucleation and growth,followed by SAM-DSS6/DSS6G,SAM-COOH,and SAMOH.The SAM-(DSS)n had more negative zeta potentials than SAM-COOH surface,indicating that DSS repeats contributed to the biomineralization,which not only provided strong affinity with Ca2+ions through direct electrostatic bonds,but more importantly influence surface electrostatic potentials of the assembled organic template for nucleation.