12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯对K562细胞增殖的抑制作用

目的:观察12-去氧佛波醇13-棕榈酸酯(12-Deoxyphorbol-13-Palmitate,12D-13P)对慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞株K562细胞增殖的抑制作用。方法:不同浓度的12D-13P处理的K562细胞,光镜下观察细胞形态学变化,MTT法检测药物对K562细胞增殖的抑制作用,甲基纤维素克隆形成实验分析细胞克隆能力。结果:MTT法和甲基纤维素克隆形成实验均显示12D-13P对K562细胞增殖具有较明显的抑制作用。结论:12D-13P能抑制体外培养的K562细胞的增殖,且呈一定的量效和时效关系。

狼毒大戟地上部分化学成分研究

利用硅胶柱色谱对新鲜狼毒大戟地上部分提取物的化学成分进行分离,从中得到7个化合物,通过波谱数据及理化性质鉴定它们的结构为:12-去氧佛波醇-13-十六酸酯(1),没食子酸乙酯(2),槲皮素(3),没食子酸(4),东莨菪内酯(5),七叶内酯(6),β-谷甾醇(7)。全部化合物均为首次从狼毒大戟地上部分得到,其中化合物3,5为首次从该植物中得到。

狼毒大戟中二萜类化合物DP抗白血病的作用机制研究

目的探究狼毒大戟中二萜类化合物12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯(DP)能否通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路发挥抗白血病的作用,为将其开发成抗白血病新药提供实验依据。方法以LY294002(PI3K特异性抑制剂)为工具药,采用MTT、AnnexinⅤ-FITC/PI、AO-EB染色法观察并测定DP作用24 h后对人原髓细胞白血病细胞HL60增殖、凋亡的影响;采用ELISA法测定DP作用24 h后细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量及细胞中胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9的活性。采用实时荧光定量-PCR法检测DP作用24 h后细胞中caspase-3、caspase-9、叉头框O3a(FoxO3a)、B细胞淋巴瘤2细胞死亡的相互作用介质(Bim)的mRNA转录水平;采用Western blot法检测细胞中磷酸化FoxO3a(p-FoxO3a)、磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达水平,并采用免疫染色法在激光共聚焦显微镜下观察细胞中FoxO3a蛋白核转位情况。结果10μmol/L DP和10μmol/L DP+LY294002对HL60细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用(P<0.01);5、10、20μmol/L DP作用后的细胞均呈典型的凋亡形态学特征,细胞培养液中LDH释放量和细胞中caspase-3、caspase-9活性均显著升高(P<0.05或P<0.01),其作用具有一定的浓度依赖性趋势;10μmol/L DP和10μmol/L DP+LY294002作用后细胞中caspase-3、caspase-9和Bim mRNA转录水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),FoxO3a mRNA转录水平和p-FoxO3a、p-Akt蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);10μmol/L DP+LY294002组细胞可见FoxO3a蛋白的核转位变化,且该变化较LY294002组明显。结论DP可通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制人白血病HL60细胞增殖并诱导其凋亡。

脱氧佛波醇乙酸酯联合阿糖胞苷对急性髓系白血病细胞分化的影响

目的研究脱氧佛波醇乙酸酯(12-deoxyphorbol 13-acetate,DPA)联合化疗药阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)对人急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、NB4和U937细胞分化的影响,并初步探讨其相关作用机制。方法用DPA 250 nmol/l和Ara-C 100 nmol/L单独及联合处理HL-60细胞72 h,姬姆萨染色观察细胞形态学改变;不同剂量DPA和Ara-C单独及联合处理HL-60、NB4和U937细胞,将蛋白激酶C抑制剂bisindolymaleimide I(GFX)和丝裂原活化蛋白激酶激酶抑制剂U0126分别预先加入DPA和Ara-C联合处理的HL-60细胞,流式细胞仪检测细胞CD11b表达;DPA和Ara-C单独及联合处理HL-60细胞24 h后,Western印迹法检测C/EBPα、C/EBPβ和c-Myc蛋白表达的改变。结果 DPA 250 nmol/L与Ara-C 100 nmol/L联合处理HL-60细胞,可引起细胞体积增大、细胞浆增多及细胞核/浆比例减小等细胞分化的典型形态变化。流式检测结果表明,与Ara-C单独给药组相比,DPA和Ara-C联合处理HL-60细胞72 h后,细胞CD11b表达明显增加(P<0.01);DPA 250nmol/L联合Ara-C 50 nmol/L处理NB4和U937细胞48 h后,细胞CD11b表达明显增强(P<0.01)。GFX或U0126分别预处理HL-60细胞能够完全阻断DPA联合Ara-C诱导的细胞分化。与空白对照组相比,DPA与Ara-C共处理明显降低HL-60细胞的c-Myc蛋白表达水平(P<0.01)。结论 DPA可增强Ara-C诱导的AML细胞分化,其作用机制可能与PKC/ERK通路激活和c-Myc表达降低相关。

12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯对HL60细胞增殖抑制及诱导凋亡的研究

目的探讨12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯(12-deoxyphorbol-13-palmitate,DP)对人急性髓系白血病细胞株HL60细胞增殖的抑制及诱导凋亡的作用。方法不同浓度DP作用HL60细胞,光镜下观察细胞形态学变化,CCK-8法检测DP对HL60细胞增殖的抑制作用,甲基纤维素克隆形成实验分析DP对HL60细胞克隆能力的影响,DP作用的HL60细胞凋亡情况通过DNA琼脂糖凝胶电泳法检测,逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测与凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。结果 CCK-8法和甲基纤维素克隆形成实验结果均表明DP对HL60细胞增殖有一定的抑制作用(P<0.05,P<0.01);显微镜下可见典型的细胞凋亡特征;琼脂糖凝胶电泳结果可见明显的细胞凋亡DNA"梯形"条带;RT-PCR结果显示,DP能够下调细胞凋亡基因Bcl-2的表达,并上调促细胞凋亡基因Bax的表达,与空白组(0 mg·L^(-1))比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 DP能抑制体外培养的HL60细胞的增殖并诱导其凋亡,且呈一定的量效关系;其作用机制可能与下调Bcl-2基因、上调Bax基因及升高Bax/Bcl-2的比值有关。

12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯对人乳腺癌MCF-7细胞VEGF表达的影响及其相关机制

目的：观察狼毒大戟根部提取物12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯（12-deoxyphorbol 13-palmitate,DP）对MCF-7细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响,及其是否通过Von Hippel-Lindau蛋白（VHL）/低氧诱导因子（HIr-1α）信号通路进行调节.方法：实验分为常氧空白组、常氧实验组（10,20,40 μmol·L^-1DP）、乏氧空白组和乏氧实验组（10,20,40 μmol·L^-1DP）,其中乏氧空白组和乏氧实验组用150 μmol·L^-1CoCl2预处理细胞.当细胞密度达70％ ～80％时进行药物处理;MTT法检测DP对MCF-7细胞在6,12,24 h细胞存活率的影响;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测DP对MCF-7细胞分泌VEGF的影响;实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测DP对VEGF mRNA表达的影响;Western blot检测DP对MCF-7细胞中VEGF,HIF-1α和VHL蛋白表达;细胞免疫荧光法（IF）检测DP对HIF-1α表达及其在细胞中分布的影响.结果：MTT法结果显示,乏氧状态下细胞存活率在12,24 h且DP浓度为20,40 μmol·L^-1时与对照组相比有显著性差异（P＜0.05）;乏氧条件下,VEGF和HIF-1α的表达较常氧条件下升高,与乏氧组相比,DP能降低VEGF（P ＜0.05）和HIF-1α（P＜0.05）的表达;乏氧条件下VHL表达较常氧条件下降低,当药物处理后,相较于乏氧组,VHL浓度明显上升（P＜0.05）.结论：DP可能通过调节VHL/HIF-1α信号通路从而下调MCF-7细胞VEGF表达.

巴豆油中佛波醇类成分的HPLC指纹图谱

目的:建立巴豆油中佛波醇类的HPLC指纹图谱,为巴豆油的质量评价提供依据。方法:采用RP-HPLC,测定了10批巴豆样品。色谱条件为Thermo Hypersil Gold C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相水-乙腈梯度洗脱,流速1.0m L·min^(-1),柱温30℃,检测波长235 nm。结果:在建立的巴豆油中佛波醇类指纹图谱中,10批样品HPLC指纹图谱相似度在0.884~0.991,确立了12个共有峰的共有模式。结论:该方法简便、准确、重复性好,为评价巴豆油定性鉴别及内在质量提供了科学依据。

脱氧佛波醇乙酸酯通过激活PKC/ERK通路诱导急性髓系白血病细胞分化

目的研究脱氧佛波醇乙酸酯(12-deoxyphorbol 13-acetate,Prostratin,DPA)对人急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、NB4和U937细胞分化的影响,并证明其通过激活蛋白激酶C/胞外信号调节激酶(PKC/ERK)通路诱导细胞分化。方法 1μmol/L DPA作用HL-60细胞3 d后观察细胞形态的改变;不同剂量的DPA作用HL-60、NB4、U937细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞分化表面标志变化;Western印迹检测ERK蛋白磷酸化的改变;流式细胞仪检测丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)抑制剂和PKC抑制剂对细胞分化表面标志的影响;Western印迹检测MEK抑制剂和PKC抑制剂对ERK蛋白磷酸化的影响。结果 DPA可诱导HL-60细胞出现白血病细胞分化的形态。DPA剂量依赖性地诱导AML细胞CD11b表达。DPA在诱导分化剂量范围内可剂量依赖性地引起ERK磷酸化。MEK化学小分子抑制剂U0126可完全抑制DPA引起的ERK磷酸化和CD11b表达;PKC非选择性抑制剂GFX可完全抑制DPA引起的ERK磷酸化和CD11b表达。结论 DPA其通过激活PKC/ERK通路能够明显诱导白血病细胞分化。