乙型肝炎病毒C区变异与拉米夫定治疗后HBVDNA反弹关系的研究

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)C区变异及变异位点与拉米夫定抗病毒治疗后HBVDNA反弹的关系。方法:应用PCR-序列分析法,多引物对巢式PCR法,检测10例用拉米夫定治疗的乙型肝炎患者(治疗组),以及10例从未用过抗病毒治疗患者(对照组)的C区的突变位点及HBV基因型。结果:治疗组10例病人中4例检出有C区变异,变异位点分别为:I134V、P164Q、I126L+E142D+P159T及L84I+I88V+I126L+P159A+P164;对照组10例病人中有5例检出有C区变异,变异位点分别为:A83G、A83G+P164QI、126L+P164Q、I126L+P159T;其中I134V、E142D、L84II、88V位点的变异仅出现在拉米夫定治疗后HBVDNA反弹的3例病人中,而且感染的HBV均为C基因型。结论:C区I134V、E142D、L84II、88V位点变异可能与拉米夫定的耐药有关;感染C基因型的病人比B基因型的病人更易出现与拉米夫定耐药相关的C区变异。

定量微板核酸杂交检测乙型肝炎患者血清中HBVDNA及其临床意义

采用定量微板核酸杂交技术检测448例肝病患者血清中HBVDNA含量.结果显示:其阳性率和病毒含量HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)组>HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)组>抗-HBs(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)组(P<0.05,P<0.01).血清HBVDNA含量与黄疸程度及转氨酶的高低无关.血清HBVDNA含量高低,阳性率大小与临床型的严重程度呈一定的相关性,从而指导临床诊断和治疗.

68例HBsAg阳性产妇初乳中HBVDNA定量检测的临床意义

目的 探讨HBsAg阳性产妇能否进行母乳喂养。 方法 选择住院分娩的HBsAg阳性产妇 6 8例 ,收集其产后 2～ 5d母体静脉血及初乳 ,检测母血乙肝病毒标志物 (HBV M)和HBVDNA以及初乳HBVDNA。结果 母血清HBeAg阳性、HB VDNA阳性者母乳中HBVDNA检测阳性率高 ,而HBeAg阴性、HBVDNA阴性者初乳中排毒率低 ,两组比较差异有高度显著性 (P <0 .0 1)。结论 母血HBeAg、HBVDNA阳性组母乳中排毒率高 ,不宜母乳喂养。而HBeAg及HBVDNA阴性组母乳中排毒低 ,可以哺乳 ,但应给予正确的哺乳指导。

慢性乙型肝炎HBVDNA载量与PD-1/PD-L1表达相关性研究

目的探讨慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者HBVDNA病毒载量与细胞毒性T细胞PD-1/PD-L1相关性。方法收集CHB患者21例,乙肝表面抗原携带者10例,其中HBVDNA≥104 copy/mL 12例为治疗组(A组),HBVDNA<104 copy/mL 9例(B组)和HBVDNA≤500copy/mL 10例(C组)分别为对照组。仅A组予恩替卡韦抗病毒治疗。取患者外周血清,分别用PCR法检测HBVDNA载量和ELISA法检测PD-1和PD-L1表达水平。结果治疗前PD-1/PD-L1 3组间比较有显著变化(F=100.606和198.745,P值均<0.05),其中,二者在A组表达水平均高于B和C组(P<0.05),B和C组比较无显著变化(P=0.777和0.912)。A组患者在恩替卡韦抗病毒治疗3个月后PD-1/PD-L1表达水平均明显下降,治疗前后比较有显著变化(t=7.149和4.307,P值均<0.05);PD-1/PD-L1表达随HBVDNA下降而下降(rs=0.673和0.735),PD-1和PD-L1表达水平也呈正相关(rs=0.594)。结论 PD-1/PD-L1表达可能与CHB患者免疫调控有关。

检测HBVDNAPCR技术关键因素的探索

本文通过实验比较，选用优化方案，建立了适合基层临床实验室简便稳定的检测ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ方法。在ＤＮＡ模板的制备中采用合适的螯合剂除去样品中干扰扩增的物质、保护模板免受高温降解，从而提高模板扩增量；采用含有Ｔａｑ酶的ｍａｓｔｅｒｍｉｘ使该法操作简化，具有良好的重复性和稳定性，确立最适反应条件解决ＰＣＲ实验中一些常见问题。并将自制试剂盒作了临床初步应用。

乙肝病毒外膜大蛋白检测对于判定HBV DNA复制的意义

目的:通过检测患者血清乙肝病毒外膜大蛋白(HBV-LP)、HBV DNA以及乙肝病毒标志物(HBV M),探讨HBV-LP对于反映体内乙肝病毒复制的意义．方法:采用荧光定量PCR方法对254份HBV 感染血清的HBV DNA进行检测,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法对HBV-LP、 Pre-S1蛋白及HBV M进行检测．结果:大蛋白的检出结果与HBV DNA的检出结果无明显差异．不同HBV M模式的HBV DNA与HBV-LP的检出结果均无显著性差异． HBV DNA拷贝数的对数值与HBV-LP表达具有相关关系(r=0．945,P<0．001),HBV DNA拷贝数的对数值变化的89%可以用HBV-LP A值为解释变量的线性回归模型来解释．结论:HBV-LP能够反应HBV的复制情况,血清中HBV-LP的含量与HBV DNA的拷贝数具有较好的相关性．

荧光定量PCR检测HBV DNA

目的 :探讨血清 HBV DNA水平与 HBV标志物 (HBV M)表现模式的关系。方法 :对 12 0 7例慢性乙型肝炎患者进行血清 HBV DNA荧光定量 PCR分析 ,HBV M检测采用 EL ISA法。结果 :血清 HBV DNA水平与 HBVM表现模式有关 ,HBs Ag与 HBe Ag的存在影响 HBV DNA水平变化。结论 :HBe Ag和 HBV DNA有明显的相关 ,抗 - HBe、抗 HBc阳性者病毒未完全停止复制 ,只是复制水平降低。

IgA肾病患者肾组织中HBV DNA表达状况的研究

为了探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染在IgA肾病发病中的作用,采用免疫组化技术检测12例IgA肾病患者肾组织中HBV抗原,同时应用Southem印迹杂交和原位分子杂交技术检测肾组织中.HBV DNA的存在状态及定位情况。结果表明12例IgA肾病患者血清HBV感染标志至少一项阳性;肾组织中HBV抗原均阳性,其中HBcAg在肾小管和肾小球中阳性分别为8例和5例,HBsAg阳性分别为4例和6例;10例中有8例用Southem印迹杂交技术证实存在整合型HBV DNA;原位杂交技术证实12例患者肾组织HBV DNA均阳性,定位于肾小管上皮细胞核内,其中9例在肾小球系膜细胞核、上皮细胞核和基质中同时阳性。提示除了HBV抗原抗体复合物所致体液免疫损伤机制外,亦应考虑肾组织感染HBV导致的细胞免疫机制参与了IgA肾病的发病。

ALT正常的HBV慢性携带者肝组织病理结果分析

了解ALT正常的HBV慢性携带者(ASC)的肝组织病理改变状况,探讨其临床意义及其与HBVDNA、HBeAg的关系。对32例ALT正常的HBV慢性携带者行快速经皮肝穿刺术取肝组织,研究肝组织炎症活动度及纤维化程度分级分期;ELISA法检测血清HBVM,PCR法检测血清HBVDNA。结果没有真正的健康ASC(病理状态为G0S0),32例ASC中,G1S0有15例,G1S1有13例,G2S1有4例;肝组织学的炎症活动及纤维化改变程度HBVDNA阳性组明显重于HBVDNA阴性组,男、女之间、HBeAg定性检测及HBVDNA水平的比较,无明显差异。

乙型肝炎免疫球蛋白阻断HBV宫内感染的临床研究

目的 :研究乙型肝炎免疫球蛋白 (HBIg)阻断HBsAg阳性孕妇HBV宫内感染的疗效并探讨其适应症。 方法 :86例HBsAg阳性孕妇随机分为治疗组 (n =40 )和对照组 (n =46) ,均在妊娠 2 8周时抽取静脉血检测HBsAg、HBeAg和HBVD NA。治疗组自 2 8周开始每 4周肌注一次HBIg(2 0 0IU)直至分娩。对照组不给予上述药物。新生儿出生后即取静脉血检测HBsAg。结果 :治疗组新生儿HBsAg阳性率明显低于对照组。HBeAg阳性和阴性孕妇均可发生宫内感染 ,但HBeAg阳性孕妇所生新生儿HBsAg阳性率明显高于HBeAg阴性者。而两组中HBVDNA阴性孕妇均未发生宫内感染。 结论 :HBIg能有效降低HBsAg阳性孕妇的宫内感染发生率 ,HBVDNA检测可以作为是否应用HBIg的指针。

慢性乙型肝炎患者血清IFN-γ、TNF-α与HBV DNA关系研究

目的通过慢性乙型肝炎(CHB)患者不同临床过程中γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)与丙氨酸转移酶(ALT)和HBV DNA水平相关性研究,探讨IFN-γ和TNF-α对乙型肝炎病毒(HBV)复制影响。方法选取慢性乙型肝炎急性发作患者30例(急性发作组)、慢性乙型肝炎需要抗病毒治疗患者30例(慢性乙型肝炎组)、慢性乙型肝炎免疫耐受患者20例(免疫耐受组),急性发作组和慢性乙型肝炎组接受恩替卡韦或替诺福韦酯治疗。采集基线时血清肝功能、HBV DNA、HBe Ag、抗-HBe、肌酐、肌酸激酶、IFN-γ、TNF-α水平和肝脏超声检查,并在临床观察第12、24周进行随访评估。结果急性发作组基线ALT、天冬氨酸转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、TNF-α、IFN-γ水平较高(P <0. 001),免疫耐受组基线HBV DNA水平较高(P <0. 05)。急性发作组ALT、HBV DNA、TNF-α、IFN-γ水平经核苷类似物(NAs)治疗后明显下降(P <0. 05);慢性乙型肝炎组ALT、HBV DNA、TNF-α水平经NAs治疗后明显下降(P <0. 05),IFN-γ水平经NAs治疗后变化差异无统计学意义(P> 0. 05);免疫耐受组ALT、HBV DNA、IFN-γ、TNF-α水平在观察期间变化差异无统计学意义(P>0. 05)。急性发作组TNF-α、IFN-γ水平与ALT水平具有正相关性(P <0. 001),TNF-α、IFN-γ水平与HBV DNA水平具有正相关性(P <0. 001)。结论慢性乙型肝炎急性发作患者TNF-α、IFN-γ与HBV DNA水平具有正相关性,TNF-α、IFN-γ与HBV复制关系密切。

A novel phenotypic assay of hepatitis B virus polymerase with extensive site-specific mutagenesis

Dear Editor,A common reason for drug failure during long-term treatment of chronic hepatitis B with nucleot(s)ide analogues(NUCs)is the emergence of drug resistance(Das et al.,2001).Most primary NUCs-resistant mutations identified in clinical samples have been limited to a minority of amino acids(usually less

急慢性丙型肝炎患者进行乙型肝炎病毒标志物检测的临床意义

采用 EIA、PCR技术对急、慢性丙肝患者血清标本进行乙型肝炎病毒标志物、丙型肝炎不同功能区抗体和 HBVDNA、HCVRNA检测。结果 :排除甲、戊型肝炎的急、慢性丙肝的乙肝感染率为74 .67%和 59.0 9%均以 HBc Ab和 HBs Ab为主 ,其他标志物很少出现 ,有乙肝感染的丙肝 AL T值较高。HBVDNA检出率较低 ,且与 HCVRNA极少同时检出 ;急、慢性丙肝 HCVRNA检出率有乙肝感染时明显偏低。有乙肝感染时急性丙肝中 E、NS4— 5区抗体检出率明显低于慢性丙肝和无乙肝感染的急性丙肝。认为急性丙肝易受乙肝感染 ,受乙肝感染的急性丙肝 HCV抗 E、NS4— 5区抗体的产生受到抑制 ,乙、丙肝病毒之间有相互抑制现象 ,二者重叠感染可加重肝损害 ;有

慢性乙肝病毒感染者外周血单个核细胞染色体遭受病毒损害的见证

用Ｓｏｕｔｈｅｍ ｂｌｏｔ分子杂交技术，检测９９例ＨＢＶＭ阳性的慢性ＨＢＶ感染者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）内ＨＢＶＤＮＡ的存在状态，其中７１例同时用ＢｒｄＵ标记法检测细胞中姊妹染色体交换（ＳＣＥ）率，观察ＨＢＶ对宿主单个核细胞染色体的损害情况。结果发现４２例被检者（４２．４２％）的ＰＢＭＣｓ中存在ＨＢＶＤＮＡ（游离型或整合型，有的还见到游离的复制中间体），正常对照组则无１例检出ＨＢＶＤＮＡ。被检者ＰＢＭＣｓ的平均ＳＣＥ率明显高于对照组，其中ＨＢＶＤＮＡ（＋）组又显著高于ＨＢＶＤＮＡ（－）组。证明ＨＢＶ的入侵与ＳＣＥ率升高之间有密切关系，提示ＨＢＶ对单个核细胞染色体形成了损害。这一现象可能是慢性乙肝病毒感染者免疫功能紊乱和ＨＢＶ长期不能清除等系列表现的原因之一。

PCR与ELISA在检测乙型肝炎病毒标志物中的应用比较

目的：观察PCR与ELISA法在检测乙肝病毒标志物中的差异。方法：用PCR和ELISA法对803例疑似乙肝者做了HBVDNA和乙肝五项指标检查，并进行比较。结果：在HBsAg（＋）的736例中HBVDNA阳性率58．77％。HBeAg（＋）的353例中HBDNA阳性率为96．3％。HBeAg（－）的408例中HBVDNA阳性率为23．0％。HBsAg和HBeAg均（－）的25例中HBVDNA阳性率为8．0％。结论：不能单靠HBeAg阳性判断HBV复制，对HBeAg（－）者有必要再进行PCR检测HBVDNA。

258例原发性肝癌患者乙型肝炎病毒标志物模式

目的了解长春地区PHC与乙型肝炎病毒标志物感染模式和HBVDNA载量的关系。方法 2009年1月-2012年12月就诊的258例PHC患者,酶联免疫法检测HBV血清标志物,实时聚合酶链反应法检测血清HBVDNA载量。结果 258例PHC患者,男性209例,占81.00%;女性49例,占19.00%;年龄最小年龄31岁,最大年龄74岁,平均年龄(52.08±9.348)岁;HBsAg阳性者239例(92.63%),HBeAg阳性者42例(16.28%),HBVDNA阳性者157例(60.85%);HBsAg、HBeAb和HBcAb均为阳性者133例(51.55%),其中HBVDNA阳性者80例(60.15%);HBsAg、HBeAg和HBcAb均为阳性者35例(13.57%),其中HBVDNA阳性者35例(100.00%);HBsAg和HBcAb均为阳性者58例(22.48%),其中HBVDNA阳性者27例(46.55%)。结论本研究中PHC患者HBV感染以"小三阳"为主,HBVDNA载量为低水平复制状态,临床上应结合HBV-M和HBVDNA定量检测结果评价患者体内的HBV复制情况。

血清载脂蛋白A1对慢性乙肝病毒感染者临床价值

目的探讨在慢性乙肝病毒感染者中血清载脂蛋白A1(APOA1)临床价值。方法收集377例慢性乙肝病毒感染者,分为慢性乙型肝炎组233例,肝炎肝硬化组105例,原发性肝癌组39例。检测血清APOA1水平,并与HBVDNA、谷丙转氨酶(ALT)水平进行统计分析。结果①随着疾病进展,APOA1水平、HBVDNA载量、ALT水平均逐渐下降,肝癌组中位数最低,APOA1水平各组间比较差异有统计学意义(P<0.05);HBVDNA载量、ALT水平在慢性乙型肝炎组分别与肝硬化组及肝癌组比较差异有统计学意义(P<0.05),但肝硬化组及肝癌组比较差异无统计学意义(P>0.05)。②APOA1水平与HBVDNA载量呈负相关(P<0.05),而与ALT无显著相关性(P>0.05)。结论血清APOA1水平是反映慢性乙肝严重程度的敏感指标,对于判断病情及预后有一定临床价值。

两种检测乙型肝炎病毒核酸的聚合酶链反应比较

目的 :评价普通聚合酶链式反应 (C PCR)和荧光定量聚合酶链式反应 (FQ PCR)检测乙型肝炎病毒核酸 (HBVDNA)的临床应用价值。方法 :用C PCR和FQ PCR分别检测 2 4 9例乙型肝炎患者和 5 1例健康体检者血清HBVDVA。乙型肝炎血清学标志物用ELISA测定。结果 :用C PCR和FQ PCR检测HBVDVA阳性率分别为 :HBeAg (+)组 80 5 0 %和 10 0 0 0 % (P <0 0 1) ;抗HBe (+)组 17 39%和 82 6 0 % (P<0 0 1) ;HBeAg ( )抗HBe ( )组 14 5 1%和 4 0 32 % (P <0 0 1)。健康体检者两法均为阴性。结论 :FQ PCR对乙型肝炎诊断、传染性的判断和抗病毒药物疗效评价方面比C PCR更具有临床应用价值。

HBVM阳性人群PreS1抗原检测临床意义探讨

目的探索PreS1抗原检测在HBVM阳性人群中的临床意义及临床应用价值。方法选取1000例HBVM阳性人群分别行乙肝三系、HBVDNA、PreS1抗原及肝功能检测。结果按HBeAg阳性、HBVDNA阳性;HBeAg阴性、HB-VDNA阳性;HBeAg阳性,HBVDNA阴性;HBeAg阴性、HBVDNA阴性各随机计入的250例HBVM阳性人群中,前S1抗原阳性分别为227例(90.8%)、131例(52.4%)、41例(16.4%)、18例(7.2%)4组人群间前S1抗原阳性率差异有统计学意义(P<0.05);HBVDNA阳性组与HBVDNA阴性组前S1抗原阳性分别为358例(71.6%)、59例(11.8%),两组间前S1抗原阳性率差异有统计学意义(P<0.05);前S抗原阳性组154例ALT升高(36.9%),175例AST升高(41.9%);前S1抗原阴性组41例ALT升高(7.03%),52例AST升高(8.92%),两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论联合检测HBV血清标志物,PreS1,并动态监测HBVDNA的含量,在观察HBVM阳性人群HBV复制具有重要的临床应用价值。前sl抗原与慢性乙型肝炎患者肝细胞损害呈正相关,对前S1抗原持续阳性的HBVM阳性人群,应尽早作进一步检查及时作抗病毒治疗,以避免严重肝损害的发性。