人毛囊真皮鞘细胞移植治疗兔跟腱炎实验研究

目的:探讨人毛囊真皮鞘细胞(hHF-DSCs)移植对兔跟腱炎的治疗效果。方法:采集人后枕部毛囊单位,并进行分离培养获得hHF-DSCs。选取30只雄性大白兔随机分为对照组、模型组和治疗组,每组10只。模型组及治疗组于兔左侧跟腱止点上1 cm处多点注射Ⅰ型胶原酶建立跟腱炎兔模型。建立跟腱炎模型成功后于第0、3、6、13天,治疗组在兔跟腱患侧注射0.5 ml的hHF-DSCs,模型组与对照组在兔跟腱相同部位注射相同体积0.9%氯化钠溶液。观察各组兔跟腱外观以及组织病理学染色结果。采用ELISA法检测跟腱组织羟脯氨酸(HYP)含量以及肌腱蛋白C(TNC)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。采用免疫组化法检测跟腱组织Ⅰ、Ⅲ型胶原(collagenⅠ、Ⅲ)表达水平。采用牵拉法检测跟腱组织生物力学。结果:分离培养后的hHF-DSCs表面CD14、CD34、CD45和人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)几乎不表达,CD49d、CD90、CD73和CD105表达率接近100%。与对照组比较,模型组步态改变明显,跟腱红肿、无弹性、无光泽。HE染色结果显示,模型组胶原纤维排列疏松,原核细胞较少,分布紊乱不均匀,表明跟腱炎兔模型构建成功。治疗组跟腱组织弹性和光泽度好于模型组,且治疗组HE染色显示胶原纤维排列整齐,无明显纤维坏死,炎症细胞较少,胶原纤维原核细胞数量正常。模型组HYP含量低于对照组和治疗组,对照组高于治疗组(均P<0.05)。模型组MMP-9水平高于对照组和治疗组,治疗组高于对照组(均P<0.05)。模型组TNC水平低于对照组和治疗组,治疗组低于对照组(均P<0.05)。与对照组比较,治疗组和模型组兔跟腱组织IL-1β、IL-6、IL-10及TNF-α表达水平升高(均P<0.05)。与模型组比较,治疗组IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平降低(均P<0.05)。与模型组比较,治疗组collagenⅠ、Ⅲ升高(均P<0.05)。与对照组比较,模型组collagenⅠ、Ⅲ降低(均P<0.05)。模型组跟腱最大负荷低于对照组,治疗组高于模型组(均P<0.05)。结论:hHF-DSCs移植治疗兔跟腱炎,能够促进受损跟腱组织修复及胶原合成,降低胶原降解,减轻炎症反应。

人毛囊细胞来源双层皮肤替代物的构建和组织学特征

目的探索人毛囊细胞构建的双层皮肤替代物的组织学特征。方法用毛乳头细胞、真皮鞘细胞分别与外根鞘细胞构建复合壳多糖双层皮肤替代物,分析其体外和移植至大白鼠后的组织学特征。结果毛囊来源细胞构建的皮肤替代物中表皮细胞排列更紧密、角化突出,真皮内可见与表皮相连的上皮细胞柱及球形膨大细胞团形成。结论毛囊细胞是构建皮肤替代物的良好细胞来源。

毛囊真皮细胞的培养和组织化学研究

目的为了提高毛乳头细胞培养的成功率和工作效率，并观察体外培养条件下毛乳头细胞的组织化学性质。材料与方法采用0．2％胶原酶D直接消化人产砂皮毛囊下部真皮鞘组织，分离出来的毛乳头予以悬浮培养，真皮鞘细胞和毛乳头细胞分别用DMEM培养基进行传代培训和多种组织化学染色。结果消化法显著降低了劳动强度，提高了培养成功率，加快了毛乳头细胞的生长，组织化学染色表明，毛乳头细胞阿新兰、甲苯胺O和PAS染色阳性，有异染性，龙是细胞凝集区和多层化细胞团中呈强阳性，而真皮勒细胞对阿新兰和甲苯胶蓝O染色呈阳性，无异染性，PAS阴性。结论消化法是一种简捷快速的高效培养毛乳头细胞的新方法，而毛乳头细胞是一类高度特殊化了的成纤维细胞，真皮鞘细胞与之关系紧密。

毛乳头细胞的高效快捷培养方法

目的：为了提高分离毛乳头的效率和培养细胞的成功率，建立一种新的培养方法。方法：采用０．２％胶原酶直接消化人头皮毛囊下部的真皮组织，对分离出来的真皮鞘细胞和毛乳头细胞分别用ＤＭＥＭ培养基进行培养。结果：消化法显著降低了劳动强度，提高了培养成功率，加快了毛乳头细胞的生长。结论：消化法是一种简捷快速的。

人毛囊外根鞘隆起、真皮鞘和毛乳头细胞高效同步分离培养的方法

目的寻求一种快速高效同步分离培养人头皮毛囊外根鞘隆起（Bulge）细胞、真皮鞘细胞和毛乳头细胞的方法。方法将人头皮标本剪成小块,中性蛋白酶中37℃孵育2h后镜下将带外根鞘的毛干从真皮鞘中拔出,组织块法培养外根鞘隆起（Bulge）细胞;从真皮-皮下组织交界处横断头皮,拔出含毛乳头的真皮鞘,胶原酶D37℃孵育6-8h,多次低速离心,毛乳头沉淀重悬后培养,收集的真皮鞘细胞上清液经高速离心后重悬培养;培养的细胞分别用K19或α-平滑肌动蛋白组化鉴定。结果同一标本可获得纯化的外根鞘Bulge细胞,真皮鞘细胞和毛乳头细胞。结论将现有的分离方法改进和综合运用,可以从同一毛囊标本同步高效获取3种成分细胞。

人毛乳头细胞增殖和胶原合成测定

目的:观察毛乳头细胞、真皮鞘细胞与成纤维细胞的增殖和胶原合成情况。方法:采用3H-胸腺嘧啶摄人、3H-脯氨酸摄入方法,观察体外培养的人毛乳头细胞、真皮鞘细胞、成纤维细胞的增殖活性和胶原合成情况。结果:3H-胸腺嘧啶掺人结果表明,细胞繁殖具有明显的活跃高峰,3种细胞在基础培养基中第11天达掺入高峰,而在常规培养基中有两个掺入高峰,即第5天和第11天。3H-脯氨酸摄人结果表明,细胞内摄入无明显差异,而递质中的胶原含量有明显差异,成纤维细胞显著高于毛乳头细胞和真皮鞘细胞,表明两者的功能有一定的差异。结论:常规培养基是这3种真皮细胞很好的培养基,能够明显促进它们的生长和繁殖,而毛乳头细胞和真皮鞘细胞分泌胶原的能力低于成纤维细胞,说明它们在合成胶原的功能方面有一定的差异。

正常人毛乳头细胞和真皮鞘细胞的生长特性观察

目的 观察毛乳头细胞和真皮鞘细胞在体外培养条件下的生长特性。方法 采用胶原酶消化法培养正常人头皮毛囊的毛乳头细胞和真皮鞘细胞 ,在体外进行传代培养 ,测定毛乳头细胞不同时相点的细胞数 ,并观察表皮细胞生长因子、氢化可的松 +胰岛素、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对毛乳头细胞和真皮鞘细胞增殖的影响。结果 毛乳头细胞、真皮鞘成纤维细胞和真皮成纤维细胞的生长呈现 3个时相 ,即停滞期、指数生长期和缓慢生长期。 3种细胞都有 4d的停滞期 ,5～ 11d为指数生长期 ,之后呈现出缓慢生长。EGF对 3种细胞都有明显的促进作用 (P <0 .0 0 1) ,尤其是对真皮鞘成纤维细胞的作用更强。氢化可的松和胰岛素、GM CSF对 3种细胞的作用不明显。毛乳头细胞、真皮鞘细胞和成纤维细胞的倍增时间分别为 6 0、5 9.2、76 .8h。结论 EGF对毛乳头细胞、真皮鞘细胞和成纤维细胞具有显著促生长作用 。

毛囊真皮鞘细胞的生物学特性研究进展

真皮鞘包绕于毛囊外周,是维持和再生毛乳头的重要物质基础,是毛囊再生的必要条件。近年研究表明,毛囊真皮鞘细胞不但参与皮肤创伤修复,而且具有成体干细胞特性,有望为皮肤创伤愈合研究和组织工程学研究提供新的思路。本文就毛囊真皮鞘细胞生物学特性研究进展作一综述。

小鼠触须毛囊外根鞘细胞的体外培养及uPA和uPAR表达研究

目的 建立小鼠毛囊外根鞘细胞的体外培养方法及研究尿激酶型纤溶酶原激活剂及其受体 (uPA uPAR)的表达。方法 建立以毛囊真皮鞘细胞为滋养层 ,培养外根鞘细胞并对uPA uPAR的表达进行免疫细胞化学鉴定。结果 外根鞘细胞在此滋养层上生长较好 ,并有uPA uPAR的表达。结论 毛囊真皮鞘细胞是外根鞘细胞较好的滋养层 。

在双层皮肤替代物中诱导毛囊形成的初步研究

目的探索人毛乳头细胞和外根鞘细胞在双层皮肤替代物中诱导毛囊形成的可能性。方法用毛乳头细胞和与外根鞘细胞构建复方壳多糖双层皮肤替代物,观察其体外和大白鼠移植后的组织学特征。结果体外毛乳头细胞和外根鞘细胞构建的皮肤替代物表皮细胞排列更紧密、角化突出,真皮内可见与表皮相连的上皮细胞柱及球形膨大细胞团。但移植后未见肯定的毛囊样结构形成。结论目前的细胞培养技术尚不能在双层皮肤替代物中诱导毛囊形成。

雄激素与体外培养的人毛乳头细胞和外根鞘细胞相互作用的研究

目的观察不同浓度雄激素(睾酮)对体外培养人毛乳头细胞和外根鞘细胞增殖活性的影响。方法采用脱发和非脱发成人头皮标本,用胶原酶消化法分离毛乳头,在角质形成细胞无血清培养基上,对其进行体外培养。采用非脱发成人头皮标本,组织法培养毛囊外根鞘细胞。然后将不同浓度睾酮加入两种毛乳头细胞与外根鞘细胞的共同培养基中,比较其对外根鞘细胞的增殖活性的影响。结果不同浓度睾酮对单独培养的两种毛乳头细胞和外根鞘细胞的增殖性均无作用(与对照组相比P>0.05)。10-9ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-8ml/L浓度、10-7ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与非脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,可促进外根鞘细胞增殖。而10-10ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-9ml/L浓度、10-8ml/L浓度、10-7ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,对外根鞘细胞出现增殖抑制作用。结论睾酮对外根鞘细胞的影响,与其剂量和毛乳头细胞的存在有关。在这个过程中,毛乳头细胞可能起介导作用。

毛囊混合细胞诱导毛囊重建的研究

目的分离培养人毛囊外根鞘细胞株(ORSC)和人毛囊毛乳头(DPC),在体内和体外诱导毛囊形成。方法利用酶消化法和组织块法获得第三代DPC和ORSC,将上述两种细胞混合后接种于海藻酸钠3D细胞支架,构建毛囊的体外三维模型,同时将该三维模型移植入SD大鼠皮下,8周后移植部位取材,行HE染色、免疫组化和电镜观察毛囊形成情况。结果 SD大鼠移植部位取材,HE染色可见细胞聚集成团状的毛囊样结构,CK14,CK15和波形蛋白染色阳性,电镜下可见支架中有散在细胞分布。结论 SD大鼠体内三维模型培养,证明在该模型中诱导出了具有向毛囊分化倾向的毛囊样结构,为以后成功重建毛囊做出了有益探索。

某些中药煎剂对阿霉素抑制的猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响

目的:探讨何首乌、女贞子等中药煎剂对阿霉素抑制的猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响。方法:用MTT法通过比色分析测定吸光度值(OD),检测不同剂量(0、5、10、20)mg/L阿霉素作用24h和10mg/L阿霉素作用不同时间(4、8、12、24、48h)对猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测不同剂量的阿霉素作用24h后猪毛囊真皮鞘细胞的凋亡率,从而找出用于以下研究中阿霉素的最适浓度。用MTT法检测不同剂量中药煎剂和10mg/L阿霉素同时给药共同作用24h以及先给予不同剂量中药煎剂作用24h,然后给予10mg/L阿霉素作用24h两种条件下对猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响。结果:阿霉素抑制体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞增殖,其抑制效应随阿霉素浓度的增大和作用时间的延长而增强;细胞凋亡率以阿霉素浓度为10mg/L时最高。中药煎剂和阿霉素10mg/L同时给药条件下,前者不能有效升高OD值(P>0.05);如果先给予中药煎剂处理,后给10mg/L阿霉素,则中等剂量的中药煎剂即能有效升高OD值(P<0.001)。结论:阿霉素抑制体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞增殖,先给予适当剂量的中药煎剂处理细胞,能在一定程度上减轻阿霉素对细胞的损伤。

毛囊真皮鞘细胞中过表达Noggin对皮肤及毛囊生长的作用

背景:Noggin蛋白是一个抑制BMP信号通路的重要分子,可以与BMP2/4结合形成复合物,从而阻断BMP信号,影响生物有机体的正常发育过程。研究认为真皮鞘细胞是一类能够长期自我更新的真皮干细胞,参与毛囊再生过程中真皮毛乳头和真皮鞘的形成。在毛囊发育过程中,真皮毛乳头中Noggin参与毛囊的起始,Noggin的缺失会导致毛囊数量的减少和毛囊生长缓慢,但人们对于Noggin蛋白在毛囊真皮鞘中的作用所知甚少。目的:研究Noggin蛋白在毛囊真皮鞘中的生物学功能。方法:利用真皮鞘特异的αSMA-Cre ERT2工具鼠在真皮鞘中特异过表达Noggin蛋白,分别在出生后8,9 d对实验组αSMA-CreER;pMES-Noggin小鼠和对照组αSMA-CreER小鼠注射4-羟基他莫昔芬,在出生后21,23,28 d获取皮肤组织,苏木精-伊红染色观察毛囊生长情况和皮下脂肪层厚度,免疫组化染色分析表型。结果与结论:通过苏木精-伊红染色结果发现毛囊生长并没有受到影响,但毛囊皮下脂肪组织生长发育受到严重影响,小鼠皮下脂肪层变薄。免疫组化结果说明BMP信号降低可能是导致毛囊脂肪层变薄的原因。这一发现拓展了人们对于真皮鞘细胞和Noggin蛋白的认识,也为人们更加准确理解毛囊再生和组织生长机制提供了重要依据。

毛囊真皮鞘细胞在皮肤创伤愈合中作用的实验研究

目的:通过体外培养毛囊真皮鞘细胞移植于大鼠皮肤创面的实验研究,探讨真皮鞘细胞在皮肤创伤愈合中的作用。方法:组织块法原代培养Wistar大鼠触须毛囊真皮鞘细胞,5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记。Wistar大鼠22只,采用背部皮肤缺损模型,分细胞移植组和生理盐水对照组。术后3 d、7 d、14 d、1个月和2个月取材,图像分析计算创面收缩率,免疫组化观察植入细胞在体内的转归,光镜和扫描电镜观察创面愈合病理过程。结果:术后各时间点细胞移植组创面收缩率均大于对照组(P<0.01);术后7 d移植组新生肉芽组织中见不均匀分布的标记细胞,14 d标记细胞减少并出现凋亡;移植组愈合过程中肉芽组织形成、表皮再生、胶原增生和组织改建均较对照组有所提前。结论:毛囊真皮鞘细胞在皮肤创伤修复过程中参与肉芽组织形成,具有加速创面收缩和促进愈合进程的作用。

体外培养大鼠触须毛囊真皮鞘细胞的生物学特性及其超微结构

目的：探讨大鼠触须毛囊真皮鞘细胞体外培养生长特性和电镜下超微结构特征。方法：显微分离大鼠触须毛囊真皮鞘，组织块法原代培养获得真皮鞘细胞，免疫组化和免疫荧光染色进行细胞鉴定，MTT法测定细胞生长曲线，并通过扫描电镜和透射电镜观察其超微结构。结果：真皮鞘细胞原代培养5—7d仅有少量细胞由组织块中长出，培养14d方可传代。传代后细胞呈克隆样丛状生长，细胞丛相互连接呈网状，3～5d传一代，可连续传10代以上。扫描电镜见毛囊真皮鞘内有许多散在的纺锤形细胞，胞体丰满，表面不光滑，有较长的细胞突起。透射电镜下见细胞核大，富含常染色质，核仁明显，胞浆中细胞器少，胞膜下可见由细丝样结构组成的致密斑。结论：大鼠触须毛囊真皮鞘细胞原代生长迟缓，传代后细胞增殖旺盛，其超微结构特点提示该细胞分化程度较低，属于成体中较为幼稚的间充质细胞。

体外分离培养大鼠毛囊真皮鞘细胞

目的 :扩增培养纯化的大鼠毛囊真皮鞘细胞。方法 :以新生SD大鼠毛囊为原材料 ,机械法分离真皮鞘 ,胶原酶消化 ,获取毛囊真皮鞘细胞 ,体外培养 ,并免疫组化方法鉴定细胞。结果 :通过消化法成功培养了大鼠毛囊真皮鞘细胞 ,并扩增至第六代。结论 :本方法可以快速高效的获得大量真皮鞘细胞。

毛囊及相关干细胞在创面无瘢痕愈合中的研究进展

目的综述毛囊及相关干细胞在创面无瘢痕愈合中的研究进展。方法广泛查阅近年国内外毛囊及相关干细胞与创面愈合及瘢痕形成的相关文献,从细胞功能及分子机制等方面进行总结讨论。结果创面经毛囊及相关干细胞移植治疗愈合后形成的瘢痕更轻微,甚至无瘢痕形成。上述现象涉及的细胞种类及分子机制复杂,目前主要明确了与BMP信号通路及Wnt信号通路强相关。结论毛囊及相关干细胞在创面无瘢痕愈合方面的研究尚处于起步阶段,需要加强机制研究,以期为创面和瘢痕的治疗提供新思路。