Rapid <i>In-Vitro</i>and <i>In-Vitro</i>Detection of <i>Chalara fraxinea</i>by Means of Mass Spectrometric Techniques

For the first time, mass spectrometric (MS) techniques were employed to rapidly detect the pathogen Chalara fraxinea in-vitro and directly in-vivo in tissues of diseased ash trees caused by C. fraxinea, using a range of characteristic novel secondary metabolites of C. fraxinea as chemical markers for the presence of the pathogen. We have found an evident correlation between the presence and amount of these-only for C. fraxinea characteristic and novel-secondary metabolites (named chalarafraxinines) and the degree of disease of respective infected ash seedlings. As demonstrated in this work, the MS based high-throughput-screening approach constitute an alternative to the time consuming and expensive micro biological isolation procedures for detection of the pathogen C. fraxinea and furthermore, can be used to rapidly test ash genotypes for resistance / susceptibility to C. fraxinea infection.

复方丹参缓释片钙拮抗作用及体外缓释作用的综合评价

目的 采用4 5Ca跨膜内流测量技术确认复方丹参缓释片及其组分对电压依赖性钙通道(potentital depen-dent Ca2 + channel,PDC)钙离子内流的拮抗作用,探讨其体外缓释作用的综合评价方法。方法 将缓释制剂释放度测定法与4 5Ca跨膜内流测量技术相结合,在规定的时间点取复方丹参缓释片体外释放样品测定。取Wistar大鼠胸主动脉,分成小段依次置于复合电解质溶液(PSS)、“4 5Ca- PSS+药”混合液、“4 5Ca- PSS高钾+药”混合液中,取出动脉环用冷EGTA洗涤,消化。用液体闪烁计数器测量复方丹参缓释片、其组分及体外释放样品的放射性活度。结果 复方丹参缓释片、复方丹参片、丹参脂溶性部位、丹参水溶性部位、三七总皂苷、丹参酮 A、丹参素、原儿茶醛、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1均有极显著的钙拮抗作用,冰片有显著的钙拮抗作用;复方丹参缓释片4 h开始有显著钙拮抗作用,6 h后有极显著钙拮抗作用,而自制复方丹参片1h即有显著钙拮抗作用,2 h后有极显著钙拮抗作用。结论 复方丹参缓释片为钙拮抗剂;丹参脂溶性部位、丹参水溶性部位、三七总皂苷为钙拮抗有效部位,丹参酮 A、丹参素、原儿茶醛、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1和冰片为钙拮抗有效成分;与自制复方丹参片比较,复方丹参缓释片具有延缓起效作用,通过体外释放样品钙拮抗作用测定,可以对治疗心血管疾病的中药及天然药物制剂的体外缓释作用进行综合评价。

冬凌草甲素自微乳给药系统的体外释放动力学研究

目的：研究冬凌草甲素自微乳给药系统的体外释放特性，探讨释药机制。方法：利用HPLC测定冬凌草甲素的含量，以反向透析法进行冬凌草甲素自微乳的体外释放实验，考察释放介质、搅拌速度和处方因素对药物释放的影响。采用相似因子法比较释药曲线的相似性，利用药物释放模型方程拟合释放曲线。结果：释放介质对药物释放无显著影响；在50～100r·min^-1药物释放曲线具有相似性；冬凌草甲素自微乳与乙醇溶液的释放曲线相似；冬凌草甲素自微乳在pH7．8PBS中，30min释放达65％，释放曲线符合Hixson—Crowell方程。结论：冬凌草甲素自微乳释药较快，在水性环境中自发形成的微小乳滴在释药过程中粒径和表面积均发生改变，药物分子透膜为被动扩散过程。

酮洛芬自乳化制剂的释药动力学研究

目的探讨酮洛芬自乳化制剂 (SEDDS)的体外释药性能。方法测定酮洛芬在不同释放介质中的表观油水分配系数 ,并用HPLC法测定经释放介质稀释后药物含量的变化。采用反向透析技术测定体外释药性能 ,并对其释药曲线进行拟和。结果酮洛芬在 pH 6. 8PBS中的表观油水分配系数较大 ,药物释放较快 ,1 5h释放可达 90 %。经稀释后 4h内药物含量未改变。释药曲线符合Hixson -Crowell方程。结论酮洛芬的油水分配系数与释药速率有关 ,释药过程中 ,酮洛芬SEDDs乳化后乳滴粒径和表面积均发生改变 ,药物透膜过程属于被动扩散机制。

氟尿嘧啶白蛋白磁性亚微球特性研究

目的制备以牛血清白蛋白为载体的氟尿嘧啶白蛋白磁亚微球（FU-AMOM）并研究其有关特性。方法采用乳化-超声-固化法制备FU-AMOM并考察其外观、粒径及其分布;测定FU-AMOM的载药量及包封率;评价其释药特征并对释药曲线进行方程拟合;考察荷瘤小鼠体内靶向性。结果制得FU-AMOM平均粒径为（321±50）nm,分布范围为100～600nm;平均载药量为（9.69±0.19）%;平均包封率为（70.36±0.53）%;体外动态透析法释药模型符合Higuchi方程,具有明显的缓释作用;荷瘤小鼠试验结果表明,FU-AMOM于磁场作用下在肿瘤组织聚集,具有靶向性。结论FU-AMOM磁亚微球具有较好的缓释和靶向作用,有希望作为新型药物载体用于靶向给药系统。

尼群地平缓释微球的制备及其体内外相关性的研究

目的制备具有固体分散体结构的尼群地平缓释微球 ,并筛选具有良好体内外相关性的释放介质。方法采用球晶造粒法制备尼群地平缓释微球 ,考察微球的粒径、载药量、包封率及释放行为 ,并根据 6只试验犬体内药物动力学试验结果 ,将不同时间的吸收分数与不同释放介质的相应时间点的体外累积释放百分数作线性回归 ,筛选具有良好体内外相关性的释放介质。结果制备的微球的粒径随搅拌速度的增加而减少 ,包封率均在 96 80 %以上 ,药物从微球中的释放速度随处方中固体分散体载体量的增加而增加 ,随阻滞剂量的增加而减小。以 1 7 4mmol L十二烷基硫酸钠为释放介质时 ,体外累积释放百分数与体内吸收分数相关系数较好 (r =0 985 1 ) ,方程为Fa =1 64 5 8ft-2 7 64 2。结论该方法较适用于难溶性药物制备缓释微球。以 1 7 4mmol

奥美拉唑肠溶微丸片的制备及体外释放度考察

目的制备一种奥美拉唑肠溶片剂。方法采用挤出-滚圆法制备奥美拉唑微丸,将奥美拉唑微丸与辅料压片,再对片剂分别用HPMC E50和EudragitRL30D-55包衣,制成奥美拉唑肠溶片。结果体外释放度实验显示,制备的奥美拉唑片在酸性介质中2h稳定性良好,在碱性介质中45min基本释药完全。结论用该方法制备奥美拉唑肠溶片,稳定性好,工艺简便,易于操作。

喷雾干燥法制备神经毒素-Ⅰ壳聚糖鼻腔给药微球

采用喷雾干燥法制备神经毒素-Ⅰ壳聚糖微球,利用正交设计优化微球处方,所得微球平均载药量为(19.23±0.42)%、收率为(92.1±2.1)%。体外释药数据用Higuchi模型拟合得方程Q=11.42t1/2-5.89(r=0.9920),表明该微球具有缓释作用。

小金海棠高效脱毒检测体系的探讨

以小金海棠组培苗为试材,对其进行苹果潜隐病毒接种、脱毒及检测方法的研究,探讨了一种针对小金海棠的快速高效的脱毒检测体系。结果表明,恒温38℃处理20 d或变温38/22℃处理30 d并结合茎尖培养,对脱除小金海棠苹果褪绿叶斑病毒和苹果茎沟病毒的效果较好。离体条件下,指示植物‘苏俄苹果’和‘弗琴尼苹果’不适合检测该两种病毒,而用PAS-ELISA法检测结果较灵敏。

芎归散超临界CO_2萃取物固体脂质纳米粒的制备及体外释药特性评析

目的:研究芎归散超临界CO2萃取物固体脂质纳米粒的制备和体外释药特性。方法:采用熔融超声分散法制备芎归散超临界CO2萃取物固体脂质纳米粒混悬液,以包封率为考察指标,采用正交试验筛选最佳处方,并考察其物理化学性质;采用动态透析法考察其在不同介质中的释药特性。结果:最佳处方为大豆卵磷脂∶泊洛沙姆F-68:单甘酯=5∶2∶1,包封率为96.3%,所得纳米粒为类球形实体粒子,平均粒径为245.8 nm,平均zeta电位为-33.5 mV,在生理盐水中的释药特性符合Weibull模型,在pH7.4磷酸盐缓冲液(40%乙醇)中的释药特性符合单指数模型。结论:芎归散超临界CO2萃取物固体脂质纳米粒的制备工艺基本可行,药物释放较完全。

尼莫地平缓释软胶囊体内外相关性研究

目的考察不同释放介质中尼莫地平缓释软胶囊的释药动力学,研究尼莫地平缓释软胶囊在家兔体内的生物利用度,建立体内外相关性方程。方法释放度实验采用转篮法分别在两种介质中进行;以高效液相色谱法测定血药浓度,以3P87药动学软件进行拟合,并计算相对生物利用度;分别以室模型法和反卷积分法对体外累积释药和体内吸收分数进行拟合,求算体内外相关性方程。结果缓释软胶囊与普通软胶囊相比,tmax明显延长,ρmax显著降低,t1/2及MRT延长;相对生物利用度为113.4%;以0.5%SLS醋酸钠缓冲溶液(pH4.5)为释放介质时体外释放与体内生物利用相关性良好,在该介质中药物的释放为非Fickian扩散,释放机制为扩散和骨架溶蚀的协同作用。结论尼莫地平缓释软胶囊具有明显的缓释特征,在不同释放介质中呈现不同的释药机制;以0.5%SLS醋酸钠缓冲溶液(pH4.5)为介质可获得良好的体内外相关性。

五味子总木脂素肠溶纳米粒体外释药研究

目的:以难溶性药物五味子总木脂素为模型药物研究中药有效部位肠溶纳米粒的释药性质。方法:采用改良乳化-溶剂扩散法制备五味子总木脂素肠溶纳米粒,透射电镜考察肠溶纳米粒的形态,HPLC测定药物的包封率及体外释放特性。结果:制得的纳米粒在透射电镜下均呈圆球形,大小均一,五味子甲素和酯甲的包封率均在90%以上,并在pH 7.2含0.5%吐温-80的20%乙醇溶液中释放达到70%以上。结论:五味子总木脂素肠溶纳米粒体外释药良好,能达到良好肠溶效果。

内凝聚法制备姜油树脂海藻酸钙微囊

姜科植物姜（Zingiber officinale Roscoe）的干燥根茎具有抗氧化、降胆固醇、抗运动病、止痛抗炎及止吐等多种药理作用。用超临界CO2萃取得到的姜油树脂（ginger oleoresin，1）为深琥珀色黏稠液体，有较强的辛辣刺激性，主要成分为姜酚（gingerol）、姜烯酚、姜油酮等化合物。其中姜酚可作为评价1药用品质的主要指标之一。

胰高血糖素样肽-1长效注射微球的制备及其体外释放研究

目的:制备载胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的长效注射微球,并对微球的体外释放特性和生物活性进行考察。方法:采用复乳法(w/o/w)制备了载GLP-1的聚乳酸-乙醇酸嵌段共聚物(PLGA)微球;考察微球的粒径大小、外观、包封率等理化特性和体外释放特性;采用在体动物法评价了微球制备工艺和体外释放过程中GLP-1的生物学活性。结果:外水相中NaCl浓度为15%(w/v)时微球包封率在85%以上,微球圆整,表面致密,平均粒径30μm。使用低黏度PLGA并在油相中加入10%(w/w)的PEG 6000,显著提高了药物在1个月内的累积释放,可达83%。微球的制备工艺不影响GLP-1的生物学活性,在体外释放过程中GLP-1的生物学活性明显下降。结论:用可生物降解的聚合物PLGA作为载体材料,可以将GLP-1制备成缓释1个月的注射微球。

连钱草总黄酮缓释片的制备及体外释放度研究

目的:研究连钱草总黄酮缓释片的制备工艺及体外释放特性。方法:采用三因素三水平正交试验设计,以释放度综合评分为评价指标,确定连钱草总黄酮缓释片的最佳制备工艺条件。并对优化的试验结果进行体外释放效果考察。结果:最优处方为羟丙基甲基纤维素(HPMC-K4M)和卡波姆934p二元骨架系统用量占片重30%,二者用量比为2∶1,乳糖为填充剂,用量为20%,5%PVP乙醇为黏合剂,湿法制备连钱草总黄酮缓释片。其体外释药机理符合零级释放。结论:制备的连钱草总黄酮缓释片缓释效果良好,制备工艺简单易行,值得广泛推广。

复方丹参缓释片中冰片包合工艺的研究

目的为提高复方丹参缓释片中冰片的稳定性,改善其体外释放度,对冰片进行β-环糊精包合工艺的研究。方法采用饱和水溶液法、气质联用法和正交试验,以冰片与β-环糊精的比例、包合时间、静置时间和干燥方法为因素,以冰片的包合率、包合物收率为评价指标,优选冰片包合工艺技术参数,考察冰片包合前后的体外释放度。结果最佳工艺参数:冰片与β-环糊精的质量比为1∶6,包合时间为0.5 h,静置时间为1.5 h,常压50℃干燥;所制得的冰片包合率为96.16%,包合物收率为98.95%。结论该包合工艺简单,可操作性强,包合率与包合物收率高,适用于研制复方丹参缓释片。

伊曲康唑自微乳化释药系统体外释放的评价方法

目的:研究伊曲康唑自微乳化释药系统(ITRA-SMEDDS)体外释放的评价方法。方法:建立了伊曲康唑自微乳中药物含量和释放介质中药物含量的高效液相测定法;运用不同方法进行体外释放度实验,比较各评价方法的效果。结果:采用3种方法评价ITRA-SMEDDS体外释放的结果有显著性差异。结论:全体液平衡反相透析法评价ITRA-SMEDDS的体外释放能较好的模拟人体内释放的情况。

pH依赖-时滞型肠康宁结肠靶向片体内外评价研究

目的:对pH依赖-时滞型肠康宁结肠靶向片体内外释放性能进行评价,探讨制备中药结肠靶向制剂的可行性。方法:以盐酸小檗碱为指标,采用体外释放度测定法和硫酸钡造影技术对该制剂的体内外释放性能进行评价。结果:体外释放度试验表明,盐酸小糪碱在人工胃液2 h后未见释放,在人工小肠液4 h后累积释放百分率小于14%,在人工结肠液4h后大于90%;体内试验表明,在4名志愿者体内均能完整到达回盲部或升结肠,并在上述部位崩解释放药物。结论:该制剂能在结肠定位释药。

口蹄疫DNA疫苗聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒制备工艺及体外释药规律研究

目的优选制备口蹄疫DNA疫苗聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(DNAPBCANP)的工艺条件。方法以聚氰基丙烯酸正丁酯为载体,用乳液聚合二步法制备不同配方的DNAPBCANP,采用正交设计实验法,以包封率为指标,综合分析实验结果确定工艺条件。结果优选出的制备工艺条件为:在pH值为3的条件下制备聚氰基丙烯酸正丁酯空白纳米粒,以2mL·min-1的速度将1份口蹄疫DNA疫苗溶液滴入到5份空白纳米球乳液中,继续搅拌8h。运用优化的工艺条件制备的纳米粒平均粒径为(78.12±16.5)nm,分布范围为30～150nm,平均包封率为51.25%±3.92%。体外缓释试验表明释药符合双相动力学规律。结论所确定的制备口蹄疫DNA疫苗聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的工艺条件稳定、可行。

哮喘延迟定时释药片处方工艺及其稳定性研究

目的解决儿童哮喘药硫酸沙丁胺醇延迟定时释药难题。方法精选羟丙基甲基纤维素(HPMC)等缓释材料,制成缓释片芯,再包上肠溶衣。用紫外分光光度法(UV法)测定主药硫酸沙丁胺醇含量,对其体外释放度进行测定,并进行加速试验和室温留样观察考核其稳定性。结果硫酸沙丁胺醇浓度线性范围为2．5-40．0μg／mL,r=0．998 9。研制品在pH=1．2的人工胃液中2 h不崩解,在pH=6．8的人工肠液中20 min左右崩解释药;研制品在人工胃液、人工肠液中5 h释药50％左右,7 h释药达95％以上;稳定性考察结果显示研制品的使用期达2年以上。结论应用现代肠溶缓释制剂技术有望解决儿童哮喘药延迟定时释药的难题。