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Analysis and Verification of the Conserved MYB Binding Element in the DFR Promoter in Compositae
1
作者 Jialei Guo Fengzhen Li +2 位作者 Guomin Shi Weimin Zhao Tao He 《Phyton-International Journal of Experimental Botany》 SCIE 2024年第2期343-353,共11页
Anthocyanins,ubiquitous in the Compositae family,are regulated by MYB(v-myb avian myeloblastosis viral oncogene homolog),playing an important role in anthocyanin synthesis.In this study,we analyzed the regulation path... Anthocyanins,ubiquitous in the Compositae family,are regulated by MYB(v-myb avian myeloblastosis viral oncogene homolog),playing an important role in anthocyanin synthesis.In this study,we analyzed the regulation pathway in which the MYB protein of subgroup 6 promotes dihydroflavonol reductase(DFR)expression in Compositae,and validated this law in Saussurea medusa through yeast one-hybrid experiments.Our results showed that MYB and DFR underwent purification selection,DFR promoter analysis revealed the presence of MYB binding site(GAGTTGAATGG)and bHLH binding site(CANNTG)at the sense strand of 84–116 nucleotide residues from the start codon.These two motifs were separated by 9–10 nucleotide residues,as existed in the DFR promoters of many Compositae plants.Furthermore,the yeast one-hybrid experiment demonstrated that SmMYB1 can activate the promoter of SmDFR.Our results provide a reference for further functional study of DFR in Compositae. 展开更多
关键词 COMPOSITAE ANTHOCYANIN dfr gene MYB gene
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石斛兰dfr基因植物表达载体的构建 被引量:7
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作者 潘丽晶 范干群 +2 位作者 张妙彬 肖杨 曹友培 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期71-75,共5页
石斛兰花瓣缺乏橙色、蓝色,这与其二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)活性有着密切的关系。根据已报道的石斛兰dfr基因序列设计引物,从Den.Burana Emerald中分离了dfr基因。将该基因序列正向与反向连接到植物表达载体... 石斛兰花瓣缺乏橙色、蓝色,这与其二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)活性有着密切的关系。根据已报道的石斛兰dfr基因序列设计引物,从Den.Burana Emerald中分离了dfr基因。将该基因序列正向与反向连接到植物表达载体pCAM BIA1301中,并由组成型启动子CaMV35S驱动,成功构建了dfr基因的正义和反义植物表达载体pC-SDN1和pCSDN2,并导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefacien)EHA105,以期利用转基因技术培育出石斛兰花色新品种。 展开更多
关键词 石斛兰 dfr基因 正义 反义 植物表达载体
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甜樱桃DFR基因内含子2和内含子3的多态性 被引量:5
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作者 王廿 鄢锦辉 +3 位作者 张开春 王晶 张晓明 闫国华 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期320-329,共10页
【目的】研究70个甜樱桃品种DFR基因多态性与果皮颜色的相关性。【方法】通过DNA序列分析,以不同果皮颜色的10个甜樱桃品种(Prunus avium L.)为材料,检测DFR基因的多态性。根据多态性出现的位点设计特异引物,通过PCR扩增检测70个甜樱桃... 【目的】研究70个甜樱桃品种DFR基因多态性与果皮颜色的相关性。【方法】通过DNA序列分析,以不同果皮颜色的10个甜樱桃品种(Prunus avium L.)为材料,检测DFR基因的多态性。根据多态性出现的位点设计特异引物,通过PCR扩增检测70个甜樱桃品种DFR基因的多态性。【结果】获得甜樱桃DFR基因约1 kb的片段,测序结果用BLAST分析发现,其核苷酸序列与樱桃李(Prunus cerasifera)的核苷酸相似性为80%,预测的氨基酸序列与已知的甜樱桃(P.avium)DFR氨基酸序列相似性达99%。该片段由3个外显子和3个内含子组成,2个多态性位点分别在内含子2和内含子3上。在黄色、黄底红晕和红色果皮3个组的70个甜樱桃品种中发现3个单倍型,共5种单倍型组合。通过SAS 9.0软件分析发现,所检测到的DFR基因的等位基因频率在黄底红晕果皮品种组和红色品种果皮组中的分布无显著差异。【结论】本研究在甜樱桃DFR基因座上得到2个差异位点,分别在内含子2和内含子3内,其优势基因频率依次为:0.864和0.679;但未发现DFR基因内含子2和内含子3的多态性与果皮颜色之间存在直接关系。 展开更多
关键词 甜樱桃 dfr基因 果皮颜色 等位基因频率 基因多态性
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红花石榴二氢黄酮醇还原酶(DFR)基因cDNA片段克隆及序列分析 被引量:12
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作者 招雪晴 苑兆和 +2 位作者 陶吉寒 尹艳雷 冯立娟 《山东农业科学》 2012年第2期1-4,共4页
二氢黄酮醇还原酶(DFR)是植物花色苷生物合成途径中的关键酶。以红花石榴"泰山红"的花瓣总RNA为模板,利用简并引物,采用RT-PCR方法,扩增出一条长446 bp的cDNA片段,序列分析结果表明,该cDNA片段与GenBank中的甜樱桃、葡萄等物... 二氢黄酮醇还原酶(DFR)是植物花色苷生物合成途径中的关键酶。以红花石榴"泰山红"的花瓣总RNA为模板,利用简并引物,采用RT-PCR方法,扩增出一条长446 bp的cDNA片段,序列分析结果表明,该cDNA片段与GenBank中的甜樱桃、葡萄等物种的DFR氨基酸同源性为78%~81%,说明该二氢黄酮醇还原酶片段为石榴花DFR基因的cDNA片段,GenBank登录号为JN316028。 展开更多
关键词 石榴 dfr基因 克隆 序列分析
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花青素生成相关基因dfr研究进展 被引量:16
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作者 吴少华 张大生 《福建林学院学报》 CSCD 北大核心 2002年第2期189-192,共4页
概述近 1 0 a对 dfr基因的研究进展 ,简述对 dfr基因的结构基因和调节基因及其功能 ,并展望
关键词 生成相关基因 花青素 dfr基因 研究进展 果实
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刺葡萄DFR基因克隆及生物信息学分析 被引量:4
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作者 赖呈纯 黄贤贵 +2 位作者 甘煌灿 潘红 范丽华 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第7期683-689,共7页
根据葡萄DFR基因CDS序列设计刺葡萄开放阅读框(ORF)特异引物,利用RT-PCR技术克隆获得其DFR基因序列,并通过生物信息学方法分析其生物学特性。结果表明,刺葡萄DFR基因ORF序列全长1 014bp,编码337个氨基酸,命名为Vitis davidii dihydrofla... 根据葡萄DFR基因CDS序列设计刺葡萄开放阅读框(ORF)特异引物,利用RT-PCR技术克隆获得其DFR基因序列,并通过生物信息学方法分析其生物学特性。结果表明,刺葡萄DFR基因ORF序列全长1 014bp,编码337个氨基酸,命名为Vitis davidii dihydroflavonol 4-reductase gene(VdDFR),GenBank登录号为KF915803。刺葡萄DFR蛋白预测分子量为37 593.2Da,理论等电点pI为5.81,是一个跨膜亲水蛋白,无典型信号肽,不属于分泌蛋白,并且亚细胞定位主要位于细胞质中(70%);二级结构以无规则卷曲为主(52.82%),是一种mixed类蛋白;该蛋白有潜在的7个糖基化位点和16个磷酸化位点,具有NAD(P)结合位点,有NAD依赖型的表异构酶/脱氢酶的N端结构域,属于NADB_Rossmann超家族成员。核苷酸序列分析表明,刺葡萄DFR基因与美丽葡萄、山葡萄和酿酒葡萄的同源性为99%,与圆叶葡萄同源性为98%,与显齿蛇葡萄同源性为94%,进化上比较保守,利用DFR基因编码区碱基序列所建立的系统关系树与真实的植物进化基本一致。 展开更多
关键词 刺葡萄 二氢黄酮醇4-还原酶 dfr基因 克隆 生物信息学
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茄萼花色苷合成相关基因DFR和MYB克隆及表达分析 被引量:6
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作者 王海竹 曲红云 +1 位作者 周婷婷 徐启江 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第14期2781-2792,共12页
【目的】花色苷是一类通过类黄酮途径合成的水溶性次生代谢产物,既能使植物的不同器官呈现红、紫、蓝等颜色,还有利于人体健康。紫茄富含花色苷,但是有关茄萼花色苷生物合成的分子机制还不是很清楚。本研究旨在通过克隆茄萼花色苷合成... 【目的】花色苷是一类通过类黄酮途径合成的水溶性次生代谢产物,既能使植物的不同器官呈现红、紫、蓝等颜色,还有利于人体健康。紫茄富含花色苷,但是有关茄萼花色苷生物合成的分子机制还不是很清楚。本研究旨在通过克隆茄萼花色苷合成相关基因DFR和MYB,测定其在不同发育时期不同颜色茄萼中的表达量,探究DFR和MYB在茄萼花色苷合成中的作用。【方法】选用绿萼和紫萼长茄(Solanum melongena L.)果萼为试材,测定不同p H条件下茄萼花色苷含量;通过RACE方法分离克隆DFR和MYB cDNA全长序列,分析DFR和MYB的保守结构域及序列特征;分别对DFR和MYB及其同源蛋白序列进行系统进化分析,构建系统进化树来进一步分析鉴定基因;使用Ex PASy网站提供的在线分析软件SOPMA预测蛋白质二级结构;利用实时荧光定量PCR方法检测目的基因在不同发育阶段果萼中的表达情况。【结果】从绿萼和紫萼长茄果萼中克隆了DFR和MYB片段,分别命名为ouSmDFR、dongSmDFR和ouSmMYB、dongSmMYB,Gen Bank登录号分别为:KX224250、KX224251和KX224253、KX224254。ouSmDFR和dongSmDFR全长分别为1 285 bp和1 249 bp,开放阅读框为858 bp和864 bp,分别编码285个和287个氨基酸;ouSmMYB和dongSmMYB全长分别为969 bp和959 bp,开放阅读框均为462 bp,编码153个氨基酸。蛋白质二级结构分析表明α-螺旋和无规则卷曲均为两个DFR蛋白和两个MYB蛋白的主要二级结构元件。序列比对表明DFR蛋白具有NADPH结构域(NADPH binding domain)和底物特异性结合结构域(Substrate specific binding domain),属于NADB-Rossmann超基因家族;MYB蛋白属于R2R3-MYB转录因子,具有R2、R3两个MYB结构域和b HLH结合域。ouSmDFR和dongSmDFR与St DFR和Sl DFR具有相对较高的同源性;ouSmMYB和dongSmMYB与Es MYB同源性较高。花色苷含量测定显示,紫萼果茄萼花色苷含量较高且随着果实的发育成熟而逐渐增加;而绿萼茄萼几乎检测不到花色苷。荧光实时定量PCR分析表明,DFR和MYB在紫萼长茄果萼中表达量均远高于绿萼长茄;从初蕾期到盛花期,紫萼长茄果萼中DFR和MYB表达量逐渐升高,而绿萼长茄则几乎没有变化,与两个品种茄萼颜色变化相一致。【结论】ouSmDFR和dongSmDFR属于NADB-Rossmann超基因家族,ouSmMYB和dongSmMYB为典型R2R3-MYB转录因子,DFR和MYB在紫萼长茄果萼中表达明显高于绿萼长茄。推测DFR和MYB在茄萼呈色中发挥作用,并且参与花色苷生物合成。 展开更多
关键词 萼片 花色苷 dfr MYB 基因表达
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荔枝DFR基因的克隆及其序列分析 被引量:3
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作者 赵志常 胡福初 +2 位作者 胡桂兵 杨转英 肖靖 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第5期512-517,共6页
采用同源克隆的方法从荔枝果皮中克隆得到一个二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)基因,该基因开放阅读框全长1062 bp,编码353个氨基酸.基因组扩增得到长度为2321 bp的片段,分析发现:该基因含有5个内含子,分别在119-255、426-1158、1353-1470、1632... 采用同源克隆的方法从荔枝果皮中克隆得到一个二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)基因,该基因开放阅读框全长1062 bp,编码353个氨基酸.基因组扩增得到长度为2321 bp的片段,分析发现:该基因含有5个内含子,分别在119-255、426-1158、1353-1470、1632-1819、2013-2095 bp之间.通过系统发育分析发现,该基因编码的蛋白与山葡萄、海棠和山竹子等果树具有较近的亲缘关系. 展开更多
关键词 荔枝 二氢黄酮醇4-还原酶(dfr)基因 基因克隆 序列分析
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矮牵牛DFR-A基因的克隆与表达分析 被引量:3
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作者 褚云霞 陈海荣 +3 位作者 潘俊松 吴爱忠 蔡润 邓姗 《中国农学通报》 CSCD 2014年第10期163-169,共7页
通过分离矮牵牛DFR-A基因,研究其在不同部位的表达规律和酶活性变化,为花色素苷合成的结构基因分离及其他研究奠定基础。基于已公布的矮牵牛DFR序列,直接从矮牵牛花瓣中分离了DFRA基因序列,利用实时荧光定量PCR技术研究其在不同器官中... 通过分离矮牵牛DFR-A基因,研究其在不同部位的表达规律和酶活性变化,为花色素苷合成的结构基因分离及其他研究奠定基础。基于已公布的矮牵牛DFR序列,直接从矮牵牛花瓣中分离了DFRA基因序列,利用实时荧光定量PCR技术研究其在不同器官中的表达特性,同时测定了不同器官中的DFR酶活性。(1)矮牵牛DFR-A基因cDNA序列为1473 bp,该基因最大开放阅读框为1143 bp,编码380个氨基酸。(2)DFR-A基因在矮牵牛各种器官中均有表达,但不同组织中表达量存在差异,在花药中的表达量最高,其次是初开和盛开花瓣中,各期花蕾中的表达量都较低,而在叶中表达量最低。(3)DFR酶在叶片及花药中几乎无活性。在初开花瓣中达到最高峰。(4)除花药以外的部位,DFR酶活性与DFR mRNA浓度存在线性相关性。矮牵牛DFR酶活性主要受转录调控,活性在初开花瓣中最高。 展开更多
关键词 矮牵牛 dfr 基因克隆 实时荧光定量PCR dfr酶活性
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风信子DFR基因全长cDNA的克隆及序列分析 被引量:5
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作者 祁银燕 刘雅莉 +1 位作者 李莉 王跃进 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第24期62-67,共6页
以蓝色风信子完全露出蓝色的花蕾为材料,利用RT-PCR和RACE技术,获得风信子DFR基因的全长cDNA。该cDNA全长1252bp,开放阅读框为1098bp,编码366个氨基酸。Blast搜索结果显示,风信子DFR基因核苷酸序列与其它植物已报道的DFR基因具有66%~77... 以蓝色风信子完全露出蓝色的花蕾为材料,利用RT-PCR和RACE技术,获得风信子DFR基因的全长cDNA。该cDNA全长1252bp,开放阅读框为1098bp,编码366个氨基酸。Blast搜索结果显示,风信子DFR基因核苷酸序列与其它植物已报道的DFR基因具有66%~77%的相似性,氨基酸序列有62%~73%的相似性。聚类分析表明,最先与风信子聚类合并的是鸢尾,其次与其它单子叶植物聚类,最后与双子叶植物聚类。 展开更多
关键词 dfr CDNA克隆 风信子 基因
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观赏羽衣甘蓝BoDFR基因的克隆及表达分析 被引量:5
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作者 王玉书 杨旭妍 +4 位作者 付震 夏爽 段钰萌 罗大森 曹蕾 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1483-1489,共7页
为揭示羽衣甘蓝二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)基因调控花青素合成的功能,该研究对不同叶色羽衣甘蓝的叶片花青素含量进行测定,根据结球甘蓝DFR序列信息,利用RT-PCR技术克隆羽衣甘蓝BoDFR基因并进行实时荧光定量表达分析。结果表明:BoDFR的cDN... 为揭示羽衣甘蓝二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)基因调控花青素合成的功能,该研究对不同叶色羽衣甘蓝的叶片花青素含量进行测定,根据结球甘蓝DFR序列信息,利用RT-PCR技术克隆羽衣甘蓝BoDFR基因并进行实时荧光定量表达分析。结果表明:BoDFR的cDNA全长为1158 bp,编码385个氨基酸,其蛋白相对分子质量为42925.06 Da,预测亚细胞定位为细胞质;蛋白质二级结构分析表明α-螺旋和无规则卷曲为DFR蛋白的主要二级结构元件。序列比对显示DFR蛋白具有NADPH结合位点和底物结合位点,属于NADB-Rossmann超基因家族。系统进化分析表明,BoDFR与结球甘蓝(Brassica oleracea var.capitata)DFR亲缘关系最近。花青素含量测定显示,紫叶羽衣甘蓝叶片中花青素含量最高,粉叶羽衣甘蓝含量较高,而白叶羽衣甘蓝叶片中检测不到花青素。实时荧光定量PCR分析表明,BoDFR基因表达量与花青素含量高低一致,其中紫叶羽衣甘蓝叶片中BoDFR基因的表达量最高,而白叶羽衣甘蓝心叶中仅微量表达。 展开更多
关键词 羽衣甘蓝 花青素 二氢黄酮醇4-还原酶(dfr)基因 基因克隆 基因表达
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观赏植物DFR基因的研究进展 被引量:4
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作者 符红艳 于晓英 廖祯妮 《天津农业科学》 CAS 2012年第6期14-19,共6页
从二氢黄酮醇4-还原酶基因结构、基因的进化、基因的表达特性及其在基因工程方面的研究进展进行了概述和总结。
关键词 dfr 基因结构 表达特性 基因进化 基因工程
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Transcriptome Profiling of Flower Development Reveals Key Genes Mediating Yellow Formation in Tree Peony
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作者 Yanzhao Zhang Chenyang Yu +1 位作者 Xi Lu Yanwei Cheng 《Phyton-International Journal of Experimental Botany》 SCIE 2022年第11期2505-2518,共14页
Tree peony cultivars with yellow flowers are rare and valuable,but the molecular mechanism of pigment accumulation is not clear.In this study,the petal transcriptome of three developmental stages were sequenced to det... Tree peony cultivars with yellow flowers are rare and valuable,but the molecular mechanism of pigment accumulation is not clear.In this study,the petal transcriptome of three developmental stages were sequenced to determine the differentially expressed genes(DEGs)regulating yellow flowers color.The results showed that 10,842 and 12,022 DEGs were screened in stage 1 vs.stage 2 and in stage 2 vs.stage 3,respectively.Through analysis of flavonoid structural genes(FSGs),we found that the transcription level of DFR was very low in the three developmental stages.In a small group of cultivars,the DFR transcription level of red flowers was 862 times higher than that of yellow flowers.These data suggested that the flavonoid pathway is interrupted in the later stage due to the low transcriptional level of DFR,which limits the biosynthesis of anthocyanins in yellow flowers.The transcription levels of F3’H and FLS were upregulated from stage 1 to stage 2,while those of CHI and FLS were downregulated from stage 2 to stage 3.In addition,67 MYBs and 44 bHLHs showed similar transcription profiles with different members of FSGs.The results deepen our understanding of the molecular mechanism of yellow pigment accumulation in tree peony. 展开更多
关键词 Tree peony yellow flower TRANSCRIPTOME FLAVONOIDS dfr gene
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苦荞和甜荞二氢黄酮醇4-还原酶基因(dfr)的克隆及序列分析 被引量:7
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作者 祝婷 李成磊 +3 位作者 吴琦 蒙华 陈惠 邵继荣 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第13期219-223,共5页
采用同源基因克隆的方法,以苦荞和甜荞叶片为材料,提取总RNA,经RT-PCR扩增获得其二氢黄酮醇4-还原酶基因(dfr)cDNA序列,并通过T载体克隆后测序。序列分析表明,获得了苦荞和甜荞dfr的全长cDNA编码序列,其1026bp的全长开放阅读框(ORF)均编... 采用同源基因克隆的方法,以苦荞和甜荞叶片为材料,提取总RNA,经RT-PCR扩增获得其二氢黄酮醇4-还原酶基因(dfr)cDNA序列,并通过T载体克隆后测序。序列分析表明,获得了苦荞和甜荞dfr的全长cDNA编码序列,其1026bp的全长开放阅读框(ORF)均编码341个氨基酸,并具典型的dfr结构特征和功能模块。同源性分析显示,苦荞和甜荞与其他植物的dfr基因核苷酸相似性为71%~98%;根据氨基酸序列构建系统进化树表明,二者与豆科、桑科和蔷薇科聚为一类。 展开更多
关键词 苦荞 甜荞 二氢黄酮醇4-还原酶基因 克隆 序列分析
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刺葡萄DFR基因植物表达载体构建及转化茉莉花愈伤组织的研究 被引量:4
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作者 甘煌灿 赖呈纯 +1 位作者 潘红 朱育菁 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1128-1136,共9页
本研究以从刺葡萄克隆获得的DFR基因为目的基因,同时从质粒p CAMBIA1302中扩增获得Ca MV35S启动子和NOS终止子,并利用双酶切法构建由Ca MV35S启动子驱动DFR基因且带有NOS终止子的表达载体,验证测序结果显示成功构建了p CAMBIA1302-35S-D... 本研究以从刺葡萄克隆获得的DFR基因为目的基因,同时从质粒p CAMBIA1302中扩增获得Ca MV35S启动子和NOS终止子,并利用双酶切法构建由Ca MV35S启动子驱动DFR基因且带有NOS终止子的表达载体,验证测序结果显示成功构建了p CAMBIA1302-35S-DFR-NOS植物表达载体,并将该载体转化到农杆菌EHA105中。采用农杆菌注射渗透法转化烟草叶片进行瞬时表达,经鉴定,转化后的烟草叶片中能检测到GFP基因的表达。采用农杆菌介导法将该植物表达载体转化受体茉莉花愈伤组织,经多轮抗性筛选获得了转基因抗性愈伤组织,经PCR鉴定,茉莉花转基因抗性愈伤组织中检测到GFP、Hyg和DFR基因等的存在,初步证明目的基因DFR已成功整合到宿主的基因组中。茉莉花愈伤组织遗传转化体系的建立,验证了花色苷合成相关基因转化茉莉花愈伤组织的可行性,为今后通过植物转基因技术丰富茉莉花的花色奠定基础。 展开更多
关键词 茉莉花 dfr基因 植物表达载体 愈伤组织 遗传转化
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矮牵牛PhDFR基因和抗除草剂Bar基因植物表达载体的构建及对烟草的遗传转化研究
16
作者 曾闻 肖向文 +4 位作者 刘海峰 王俊铎 罗城 李晓波 郑巨云 《安徽农业科学》 CAS 2014年第17期5380-5384,共5页
[目的]构建矮牵牛PhDFR基因的植物表达载体,并对烟草进行遗传转化。[方法]从不同花色的矮牵牛中克隆了2个PhDFR基因,通过目的基因序列克隆、多步载体酶切、连接、转化等技术手段,将其连入通用植物表达载体pCAMBIA2300及pCAMBIA3301。利... [目的]构建矮牵牛PhDFR基因的植物表达载体,并对烟草进行遗传转化。[方法]从不同花色的矮牵牛中克隆了2个PhDFR基因,通过目的基因序列克隆、多步载体酶切、连接、转化等技术手段,将其连入通用植物表达载体pCAMBIA2300及pCAMBIA3301。利用冻融法将重组质粒导入农杆菌GV3101继而转化烟草。[结果]构建了含卡那霉素抗性筛选标记基因NPTII和除草剂抗性筛选标记基因Bar的GFP融合蛋白植物表达载体pCAMBIA2300-PhDFR-GFP和pCAMBIA3301-PhDFR-GFP。转基因植株的GUS染色结果进一步验证了所构建表达载体的正确性和实用性。[结论]所构建的表达载体为进一步研究PhDFR基因在植物花色调控效应的功能及开展植物花色改良基因工程研究奠定了基础,为植物基因工程科研工作提供了优良的备选植物表达载体。 展开更多
关键词 dfr基因 植物表达载体 烟草遗传转化 BAR
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番茄抗病品种吉美08 SlDFR基因的克隆与表达 被引量:2
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作者 梁思桃 高雁茹 +4 位作者 刘广清 黄瑞基 刘强 任振新 乔清华 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期813-820,共8页
【目的】克隆番茄(Solanum lycopersicum)抗病品种吉美08二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)基因,并分析枯萎病菌尖孢镰刀菌番茄专化型(Fol4287)诱导下其在番茄不同组织中的表达模式,为深入研究SlDFR基因在番茄抗病... 【目的】克隆番茄(Solanum lycopersicum)抗病品种吉美08二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)基因,并分析枯萎病菌尖孢镰刀菌番茄专化型(Fol4287)诱导下其在番茄不同组织中的表达模式,为深入研究SlDFR基因在番茄抗病过程中的调控机制提供理论依据。【方法】采用同源克隆技术从番茄中克隆SlDFR基因cDNA全长序列,并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测番茄根、茎、叶中SlDFR基因在枯萎病菌诱导下的表达模式。【结果】从番茄抗病栽培品种吉美08中克隆得到SlDFR基因,cDNA序列全长1659 bp,包含1个1149 bp的开放阅读框(ORF),编码379个氨基酸。SlDFR蛋白的相对分子质量为42.43 kD,等电点(pI)为6.08,是一个亲水的、稳定的酸性蛋白,亚细胞定位在高尔基体上,无信号肽和跨膜结构域,有38个磷酸化位点,其中,丝氨酸18个,苏氨酸15个,酪氨酸5个。SlDFR蛋白的二级结构中α-螺旋占37.73%,延伸链占13.98%,无规则卷曲占40.69%。系统发育进化树分析结果表明,SlDFR蛋白序列与同属茄科马铃薯(Solanum pennellii)亲缘关系较近,其次为黑果枸杞(Lycium ruthenicum)。qRT-PCR分析结果显示,SlDFR基因在番茄叶中表达量最高,在根中表达量最低。SlDFR基因在番茄根、茎、叶中表达量受番茄枯萎病菌诱导,均呈现不同程度上调,其中,在根中表达量变化最大,在叶中表达量变化较小,推测SlDFR基因的表达量与番茄枯萎病菌胁迫响应有关,且番茄根部类黄酮的合成为重要胁迫响应途径。【结论】SlDFR基因表达量受Fol4287的诱导,可能参与番茄枯萎病胁迫响应过程,且对番茄枯萎病菌的响应在番茄根部更强烈,并通过调控番茄根部黄酮类物质的合成提高根系分泌物的抑菌活性从而增强番茄对枯萎病的抗性。 展开更多
关键词 番茄 二氢黄酮醇4-还原酶(dfr) 基因克隆 表达分析
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甘薯二羟基黄酮醇还原酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:5
18
作者 赵宝杰 侯夫云 +2 位作者 王庆美 李爱贤 张立明 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第3期583-586,共4页
根据其它作物的二羟基黄酮醇还原酶(DFR)基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR方法从甘薯块根中分离出花青素合成相关基因DFR基因,并定名为ibDFR。该基因全长1232bp,编码398aa。核甘酸序列分析表明,与牵牛相似系数达85%,与烟草的相似系数... 根据其它作物的二羟基黄酮醇还原酶(DFR)基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR方法从甘薯块根中分离出花青素合成相关基因DFR基因,并定名为ibDFR。该基因全长1232bp,编码398aa。核甘酸序列分析表明,与牵牛相似系数达85%,与烟草的相似系数达到67%,与马铃薯的相似系数达75%。将ibDFR连接到pET30a(+)载体中,检测ibDFR在大肠杆菌中的表达。实验结果表明ibDFR蛋白质分子量大小与推算一致,能在大肠杆菌中转录表达。 展开更多
关键词 甘薯 花青素 dfr基因 克隆
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二氢黄酮醇-4-还原酶基因的结构与功能研究 被引量:6
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作者 李云 卢其能 +1 位作者 赵昶灵 沈春修 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第26期15858-15859,15861,共3页
二氢黄酮醇-4-还原酶(DFR)是花色素苷生物合成途径的关键酶,其基因已从多种植物中克隆出来。从该基因的结构、功能和表达特性等方面进行了总结,为DFR基因的进一步研究和利用提供参考。
关键词 dfr 基因 结构和功能 表达特性
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洋葱二氢黄酮醇-4-还原酶基因的分子克隆
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作者 缪军 杨妍妍 +5 位作者 张一卉 刘冰江 霍雨猛 霍凤梅 修景润 吴雄 《山东农业科学》 2010年第2期8-12,共5页
鳞茎的皮色是洋葱的重要经济性状之一。洋葱的二氢黄酮醇-4-还原酶基因AcDFR1的开放阅读框为1 158 bp,编码385个氨基酸残基;具有5个内含子,均符合GT-AG规则。本研究为阐明洋葱皮色形成的分子机制以及开发分子标记奠定了基础。
关键词 二氢黄酮醇-4-还原酶基因 基因克隆 序列分析 洋葱
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