棕榈酸通过上调ACC/FAS/DGAT2通路表达诱导BRL 3A细胞脂肪变性

为探究棕榈酸诱导BRL 3A细胞脂肪变性的机制,以不同浓度的PA(0、0.2、0.4、0.6 mmol·L^-1)处理BRL 3A细胞24 h,用CCK-8法、RTCA技术检测细胞增殖情况;油红O染色,观察细胞脂滴生成情况;DAPI/F-actin双染,观察细胞核及骨架形态;采用比色法测定TG含量;采用RT-PCR检测脂肪合成相关基因Acaca、Fasn、Dgat 2转录水平;采用Western blot检测脂肪合成关键蛋白ACC、FAS、SCD1、GPAM、DGAT 2表达量。结果显示:与对照组相比,0.2、0.4 mmol·L^-1 PA对细胞增殖无影响,0.6 mmol·L^-1 PA抑制细胞增殖;油红O染色结果显示0.4 mmol·L^-1 PA处理细胞24 h,脂滴大量蓄积,发生明显脂肪变性;随PA浓度升高,细胞核发生皱缩、变形、碎裂,细胞骨架被破坏,微丝断裂;TG含量极显著增加(P<0.01);不同浓度PA(0.2、0.4、0.6 mmol·L^-1)处理组脂肪合成关键基因Acaca、Fasn、Dgat 2 mRNA转录水平均显著升高(P<0.05),ACC、FAS、SCD1、GPAM、DGAT2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);0.6 mmol·L^-1 PA组与0.4 mmol·L^-1 PA组相比,SCD1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。高浓度棕榈酸抑制BRL 3A细胞增殖,对细胞核及骨架产生损伤;棕榈酸诱导细胞发生脂滴蓄积,TG增加,通过上调脂肪合成关键基因Acaca、Fasn、Dgat 2 mRNA转录水平及ACC/FAS/DGAT2通路蛋白表达水平诱导细胞发生脂肪变性。

在基因家族背景下对四种植物中DGAT2的鉴定和序列分析

二酰甘油酰基转移酶2(Diacylglycerol O-acyltransferase 2,DGAT2)是植物中三羧酸甘油酯(TAG)合成途径的限速酶,其编码基因属于酰基转移酶基因超家族。本研究依托植物全基因组数据库Phytozome,通过BLAST搜索获得了蓖麻(Ricinus communis L.)、拟南芥(Arabidopsis thaliana Heynh.)、毛果杨(Populus tricho-carpa Torr.&A.Gray.)和木薯(Manihot esculenta Crantz.)4种双子叶植物酰基转移酶基因超家族所编码的73条多肽序列,并从中鉴定出5条DGAT2序列。理化性质和跨膜结构域分析表明,5条DGAT2序列均为疏水性跨膜蛋白,其中木薯DGAT2为一次跨膜蛋白且在叶绿体膜中大量分布,这与其他植物的DGAT2序列存在差异;木薯DGAT2蛋白在进化过程中发生了功能分化且可能与木薯的抗逆作用有关。

DGAT1基因K378N多态性与2型糖尿病及糖尿病肾病的关系

目的:探讨二酰基甘油酰基转移酶1(DGAT1)K378N基因多态性与中国人2型糖尿病(T2DM)及糖尿病肾病(DN)的关系.方法:运用荧光偏振-模板依赖的染料掺入反应法(TDI-FP)技术检测DGAT1K378N基因多态性在71例T2DM患者[29例糖尿病肾病患者(DN+组)和42例糖尿病非肾病患者(DN-组)]和45例健康对照者中的等位基因和基因型分布频率.结果:KK,KN和NN基因型在T2DM组的分布分别为:42,40,12例;DN+组:14,11,4例;DN-组:22,14,6例;正常对照组:13,23,9例.①T2DM患者DGAT1K378等位基因频率(66.0%)高于健康对照组(54.4%),但未达显著性水平;②DN+组与DN-组K378N等位基因及基因型分布无显著差异(P>0.05).结论:K378等位基因频率在T2DM患者组有升高,但未见DGAT1K378N基因多态性与中国人T2DM及DN发生的明显相关关系.

2型糖尿病患者家系DGAT1基因K378N多态性研究

目的:探讨西安地区汉族人DGAT1基因K378N多态性及其与2型糖尿病(T2DM)的相关性。方法:应用荧光偏振-模板依赖的染料掺入反应法(TDI-FP)对T2DM患者(T2DM组)76例、T2DM患者家系中非DM一级亲属(NDR组)59例的DGAT1基因K378N多态性进行检测,同时测定相关临床和生化指标,并与45名正常人(NC组)相比较。结果:DGAT1 K378等位基因频率在T2DM组和NDR组依次为87.5%和83.9%,而NC组为54.4%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。T2DM组、NDR组和NC组不同基因型DGAT1受检者血浆甘油三酯(TG)水平差异无显著性(P>0.05)。结论:DGAT1基因K378N多态性与西安地区人群T2DM的发病相关,该多态性与患者血浆TG水平无明显相关。

芒果苷改善高果糖所致HepG2细胞内甘油三酯沉积机制研究

目的研究芒果苷改善高果糖诱导的Hep G2细胞内甘油三酯沉积的可能机制。方法低糖(1 g/L葡萄糖)条件下培养的Hep G2细胞分为对照组(1 g/L葡萄糖,无果糖)、果糖组(1 g/L葡萄糖+30 mmol/L果糖)、果糖+芒果苷组(同时加入葡萄糖浓度1 g/L+30 mmol/L果糖+不同剂量的芒果苷,使其药物终浓度分别为6.25、12.5、25、50μmol/L),药物干预24 h之后,油红O染色观察细胞内脂滴的沉积情况,酶法测定细胞内甘油三酯(TG)的含量,Real-time PCR检测碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、肝型丙酮酸激酶(LPK)、二酯酰甘油酰基转移酶2(DGAT-2)mRNA表达的变化。结果油红O染色结果显示,与对照组相比,果糖组的Hep G2细胞脂滴显著增多,细胞内TG含量也明显升高(P<0.05)。与果糖组对比,低剂量的芒果苷对果糖导致的细胞内脂滴的沉积无影响,较高剂量的芒果苷(25μmol/L和50μmol/L)使细胞内的脂滴数量明显减少,细胞内TG含量显著降低(P<0.05),以50μmol/L的芒果苷干预效果最好。Real-time PCR结果显示,与对照组相比,果糖组Hep G2细胞ChREBP、SREBP-1c、LPK、DGAT-2 mRNA明显升高,50μmol/L芒果苷能够下调Hep G2细胞ChREBP、LPK、DGAT-2 mRNA的高表达(P<0.05),但对SREBP-1c mRNA表达影响不明显。结论芒果苷能够改善高果糖诱导的Hep G2细胞内TG的沉积,可能与抑制脂质合成相关基因ChREBP、LPK、DGAT-2 mRNA的表达密切相关。

化浊解毒方对脂代谢异常伴胰岛素抵抗大鼠肝脏组织DGAT2 mRNA表达的影响

目的探讨化浊解毒方改善脂代谢异常伴胰岛素抵抗(IR)的作用机制。方法 30只SD大鼠随机选取10只为空白对照组,其余大鼠采用一次性尾静脉注射小剂量链脲佐菌素加高脂饲料诱导脂代谢异常伴IR模型,将造模成功的16只大鼠随机分为模型组、化浊解毒方组各8只;化浊解毒方组给予化浊解毒颗粒3g生药/(kg·d),空白对照组与模型组给予等量生理盐水,各组均连续灌胃8周。8周后检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、血中胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA),采用实时定量PCR检测模型组和化浊解毒方组大鼠肝脏二酰基甘油酰基转移酶2(DGAT2)mR-NA表达。结果与空白对照组比较,模型组FBG、FINS、TG、TC、FFA均明显升高(P<0.01);与模型组比较,化浊解毒方组FBG、FINS、TG、TC、FFA均显著下降(P<0.05或P<0.01);化浊解毒方组DGAT2mRNA表达较模型组显著降低(P<0.01)。结论化浊解毒方可抑制脂代谢异常伴IR大鼠肝脏DGAT2 mRNA表达,可能是其改善脂代谢异常伴IR的机制之一。

生姜乙醇提取物改善果糖所致大鼠脂肪肝的作用机制研究

目的观察姜提取物改善果糖所致大鼠脂肪肝的作用,并探讨其可能的作用机制。方法取SD大鼠24只,随机分为4组,每组6只,即正常对照组(给予正常饮食饮水),模型组(给予10%果糖水),姜提取物低、高剂量组20,50 mg·kg^(-1),给予姜提取物灌胃,连续28 d。用酶法和ELISA检测血浆葡萄糖、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)和胰岛素含量,苏木精-伊红(HE)染色和油红-O染色观察肝脏组织中的脂肪沉积程度,RT-PCR和Western blot法检测肝脏相关基因和蛋白表达。结果姜提取物逆转了果糖过量消耗引起的大鼠肝脏甘油三酯的过度堆积(P<0.05)、肝细胞空泡化的增加和肝脏油红-O染色面积的增加(P<0.05)。然而,姜提取物并不影响大鼠食物摄入量和体质量。姜提取物能够抑制肝脏二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT)-2 mRNA和蛋白的过表达(P<0.05),但对肝X受体(LXR)、DGAT-1、单酰甘油酰基转移酶(MGAT)-1、MGAT-2、激素敏感脂肪酶(HSL)和脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)mRNA的表达无影响。结论姜提取物可能通过抑制介导肝脏甘油三酯生物合成的关键酶DGAT-2的过表达,从而改善果糖所致大鼠脂肪肝。

四氯化碳对HL-7702肝细胞甘油三酯含量影响

目的探讨四氯化碳(CCl4)对人正常二倍体HL-7702肝细胞内甘油三酯含量(TG)和极低密度脂蛋白(VLDL)分泌影响。方法实验设阴性对照组、CCl4组(10 mmol/L)和阳性对照组(1 mmol/L油酸),染毒结束后检测TG含量,采用磷钨酸盐沉淀和蛋白印迹法检测VLDL含量,用蛋白印记法检测甘油三酯转移蛋白(MTP),二脂酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)和肉碱酰基转移酶(CPT1A)蛋白表达水平,用酶联免疫法检测ApoB100含量。结果染毒24 h后,CCl4组细胞内TG含量[(3.235 3±1.116 8)mmol/g prot]明显高于阴性对照组[(1.221 8±0.527 2)mmol/g prot](P<0.05);VLDL分泌水平无明显改变;细胞内MTP、DGAT2蛋白表达量明显增加;染毒24、48 h后,CCl4处理组肝细胞培养上清中ApoB100蛋白含量分别为231.79、263.33 ng/mL,较阴性对照组(135.12、143.59 ng/mL)明显增加(P<0.05)。结论四氯化碳可能通过促进DGAT2蛋白表达而引起肝细胞内TG含量增加,或通过MTP途径促进ApoB100分泌,但对VLDL分泌无影响。

高山被孢霉中二酰甘油酰基转移酶2同源基因的克隆、表达和活性分析

【背景】高山被孢霉(Mortierella alpina)是一种可积累大量花生四烯酸(Arachidonic Acid,AA)的产油丝状真菌,其所产脂肪酸主要被组装到甘油骨架上以三酰甘油(Triacylglycerol,TAG)形式存在。二酰甘油酰基转移酶(Diacylglycerol Acyltransferase,DGAT)是TAG生物合成途径的关键酶,对于高山被孢霉TAG的生产具有重要意义。【目的】通过探究高山被孢霉DGAT2在TAG生物合成方面的功能特点,以期为提高产油真菌的TAG产量及改善TAG的脂肪酸组成提供参考。【方法】利用序列比对在高山被孢霉ATCC 32222基因组中筛选出2个编码DGAT2的候选基因MaDGAT2A/2B,在酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)中异源表达后进行功能分析,并在外源添加AA条件下通过检测TAG产量进一步分析MaDGAT2A/2B的活性,最后在高山被孢霉中同源过表达MaDGAT2A/2B,通过检测重组菌总脂肪酸产量及组分以分析MaDGAT2A/2B的体内活性。【结果】MaDGAT2A在S.cerevisiae中异源表达时,重组酵母菌TAG的产量达到细胞干重的3.06%,为对照组的4.91倍;而MaDGAT2B未明显提高重组酵母菌TAG的产量。在外源添加AA时,MaDGAT2A/2B均可显著促进重组酵母菌中TAG合成,表达MaDGAT2A的重组酵母菌TAG含量为对照组的3.67倍,表达MaDGAT2B的重组酵母菌TAG含量为对照组的2.61倍。MaDGAT2A/2B在高山被孢霉中过表达对其总脂肪酸产量无显著影响,但可显著提高总脂肪酸中AA的含量,AA占总脂肪酸比例最高达到39.15%,相比对照组提高16.14%。【结论】MaDGAT2A/2B可以参与TAG的生物合成,表明2个候选基因编码的蛋白具有DGAT活性,并且可提高高山被孢霉脂肪酸中AA的含量,对于改善产油真菌的脂肪酸组成从而提高其应用价值具有重要意义。

用于治疗肥胖和糖尿病的二酰甘油酰基转移酶抑制剂研究进展

人体内的二酰甘油酰基转移酶是催化三酰甘油最终合成的关键酶,其基因缺失或酶活受抑时,机体不会因高脂饮食而发生肥胖,且对胰岛素的敏感性增强,因此该酶可作为肥胖和糖尿病治疗药物的靶点。综述二酰甘油酰基转移酶的功能研究以及天然来源和合成的二酰甘油酰基转移酶抑制剂的药理活性和构效关系。