全脑放射促进顺铂通过血脑屏障的研究

目的：通过检测顺铂 (cis-diamminedichloroplatinum,DDP)在脑脊液中的浓度变化，定量观察脑放射促进 DDP透过血脑屏障的作用。方法： 20例非小细胞肺癌 (non-small cell lung cancer,NSCLC)脑转移患者接受脑放射， DDP 20mg/m2分别于脑放射前、脑放射 10 Gy、 20 Gy、 30 Gy及 40 Gy时静滴，于之后 3h采集脑脊液与血标本。 10例 NSCLC无脑转移者于首次用 DDP后 3h采集脑脊液与血标本。采用石墨炉原子吸收光谱法检测 DDP浓度。结果：脑转移可评价者 20例，无脑转移者 10例。脑转移者放疗前脑脊液中 DDP浓度平均 1.02mg/L，明显高于无脑转移者脑脊液中 DDP浓度 (平均 0.33mg/L)；脑转移者全脑放疗 10～ 30Gy，脑脊液中 DDP浓度随脑放射剂量的增加而增加，全脑照射 30Gy时浓度最高，平均 2.36mg/L。结论： DDP可透过脑转移者受损的血脑屏障进入脑脊液中，并可以达到治疗浓度；全脑放射可以促进 DDP透过血脑屏障，全脑放疗 10～ 30Gy时 DDP进入脑脊液中的浓度随放射剂量的增加而增加， 30Gy时浓度最高； DDP可少量通过正常的血脑屏障，但未达有效治疗浓度。

miRNA765高表达对胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响

目的观察miRNA765高表达对胃癌顺铂(CDDP)耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响。方法将PCR扩增的包含miRNA765前体的基因序列克隆至真核表达载体,构建miRNA重组表达载体;阳离子脂质体转染重组质粒到BGC-823/CDDP细胞。转染后48 h,Real-Time PCR和Western blotting法分别检测细胞中miRNA765和细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)蛋白的相对表达量;采用不同浓度CDDP处理转染后48 h的BGC-823/CDDP细胞,24和48 h后MTT法检测细胞活性并计算细胞对于CDDP的半抑制浓度(IC50)。采用终质量浓度为1μg/mL的CDDP处理基因干预后的BGC-823/CDDP细胞,双染法检测细胞凋亡率。结果 BGC-823/CDDP细胞内miRNA765的相对表达量明显低于其亲本细胞BGC-823,CIAPIN1蛋白相对表达量则明显高于其亲本细胞株(均P<0.01)。在BGC-823/CDDP细胞内高表达miRNA765可明显抑制CIAPIN1蛋白的表达,转染后48 h的CIAPIN1蛋白表达量明显低于未转染组(P<0.01);miRNA765高表达可明显降低BGC-823/CDDP细胞的耐药能力,48 h后IC50值从(18.27±3.92)μg/mL降至(1.50±0.43)μg/mL(P<0.05)。转染48 h后,BGC-823/CDDP细胞的凋亡率从(10.1±1.7)%上升至(53.4±7.9)%(P<0.01)。结论 miRNA765高表达可以明显降低胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP的耐药能力。

葡萄籽原花青素对顺铂导致H9c2细胞毒性的保护作用

目的:研究葡萄籽原花青素对顺铂诱导大鼠H9c2心肌细胞损伤的影响并探讨其可能机理。方法:体外培养H9c2细胞,噻唑蓝法测定葡萄籽原花青素、顺铂对H9c2细胞生长的影响及葡萄籽原花青素对顺铂所致H9c2细胞毒性的影响,观察细胞的形态变化,并通过检测H9c2细胞及培养液中超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量研究其可能机理。结果:葡萄籽原花青素能明显改善顺铂所致H9c2细胞形态变化,并抑制顺铂所致H9c2细胞及培养液中超氧化物歧化酶活性的降低、丙二醛含量的升高。结论:体外培养条件下葡萄籽原花青素能改善顺铂诱导的H9c2细胞的损伤,其作用机制可能与调高H9c2细胞的抗氧化能力有关。

姜黄素联合顺铂对卵巢癌细胞COC1的体外抗肿瘤作用

利用MTT比色法研究了姜黄素(Cur)联合顺铂(DDP)对卵巢癌COC1细胞的抑制作用。结果表明,当ρ(DDP)为2.5～10 mg/L,ρ(Cur)=5 mg/L时,与DDP相比,二者联合用药对卵巢癌COC1细胞可产生协同抑制作用;ρ(Cur)=5 mg/L就可明显增强COC1细胞对顺铂的敏感性,增敏倍数为2.66倍;光学显微镜观察发现,药物作用后COC1细胞的形态发生了改变,细胞折光度下降,大小不一、形态各异、排列疏散和胞浆空泡化严重。为探讨姜黄素协同顺铂抑制肿瘤的机制,本研究采用高效液相色谱法测定姜黄素辅助用药前后细胞内DDP含量的变化。结果表明,在加入姜黄素前后,COC1细胞内顺铂含量虽然略有下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。由此可见,姜黄素与顺铂联合用药对人卵巢癌COC1细胞增殖具有协同抑制作用,且姜黄素可同时增加COC1细胞对顺铂的敏感性,但姜黄素可能并未明显改变顺铂在细胞内的含量,即姜黄素可能不是通过影响顺铂进入细胞的通路而起协同抑制作用的。

SH3GL2基因对喉癌细胞增殖、凋亡的影响及在化疗增敏中的作用

目的探讨SH3GL2基因对喉癌细胞凋亡、侵袭能力的影响,及其对化疗药物顺铂(DDP)敏感性的影响。方法构建重组载体pcDNA3.1-SH3GL2,转染Hep2细胞;RT-PCR、Westernblot检测转染后SH3GL2基因的表达改变;MTT法测定细胞毒性指数,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;应用DDP后检测细胞的凋亡和增殖情况。结果成功构建重组载体;转染Hep2细胞后SH3GL2基因的表达与对照组比较有明显增强,凋亡明显升高(P<0.05),增殖能力明显下降(P<0.05);与DDP处理组比较,联合处理组细胞的凋亡增加更为明显(P<0.05),对细胞增殖能力的抑制也更为显著(P<0.05)。结论 SH3GL2基因表达增高能够抑制Hep2细胞的增殖,促进细胞凋亡,并能够在一定程度上增强Hep2细胞对化疗药物DDP的敏感性。

miR-193b在宫颈癌中的表达与功能及其对化疗敏感性的影响

目的:探讨微小RNA-193b(miR-193b)在不同宫颈组织中的表达以及其对顺铂作用于宫颈癌细胞敏感性的影响,并初步探讨其作用机制。方法:实时荧光定量PCR(qPCR)检测不同宫颈组织中miR-193b的表达水平。采用脂质体将miR-193b-inhibitor转染至HeLa细胞,Transwell法、CCK-8法和免疫蛋白印迹法分别检测细胞迁移数、细胞对顺铂的敏感性以及细胞中PTEN、Akt、p-Akt和P-糖蛋白(P-gp)的蛋白水平。结果:qPCR结果显示miR-193b在正常宫颈组织及宫颈糜烂组织中呈低表达,在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中的表达明显上升;转染miR-193b-inhibitor后,HeLa细胞迁移数明显减少(P<0.05),顺铂对HeLa细胞活力的抑制作用进一步增强(P<0.05),细胞中PTEN的蛋白表达明显上调(P<0.05),Akt的蛋白表达无明显变化,p-Akt和P-gp的蛋白水平明显下调(P<0.05)。结论:miR-193b在宫颈癌组织中呈高表达,沉默miR-193b可增加HeLa细胞对顺铂的敏感性,作用机制可能与PTEN-PI3K/Akt通路有关。

曲普瑞林对化疗药物引起卵巢损伤的预防作用

目的:探讨化疗对卵巢的损害和促性腺激素激动剂(GnRHa)曲普瑞林对化疗中卵巢的保护作用及机制。方法:选用2～3月龄、体重(250±10)g的SD雌性大鼠40只,随机分为正常对照组、顺铂(DDP)组、GnRHa组及GnRHa+DDP组,比较用药后4组大鼠卵巢、子宫湿重和形态学变化,采用放射免疫法测大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡生成素(FSH)水平,免疫组织化学方法检测4组大鼠卵巢中Bcl-2、Caspase-3的表达。结果:DDP组与对照组比较大鼠体重明显减轻(P<0.05),卵巢、子宫重量明显下降(P<0.05);光镜下DDP组各期卵泡总数显著减少,GnRHa使生长卵泡数、成熟卵泡数减少,初级卵泡数及总卵泡数增加。GnRHa+DDP组可见GnRHa能明显改善化疗药物对卵巢的损害,保存了大部分初级卵泡且总卵泡数增加。结论:GnRHa的先期预防性应用对化疗所致的大鼠卵巢损伤有一定的保护作用。

雷帕霉素对顺铂作用下人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、侵袭、黏附及自噬凋亡的影响

目的:研究雷帕霉素(Rap)对顺铂(DDP)作用下人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、迁移、黏附及其自噬凋亡的影响。方法:培养人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞株,利用MTT方法分别检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞增殖抑制率的影响;Transwell方法检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞体外侵袭能力的影响;黏附实验检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞体外侵袭能力的影响;流式细胞术检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞凋亡的影响;Western blotting检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞自噬标志蛋白beclin-1和LC3表达的影响。结果:与Rap或DDP单独作用组相比,Rap和DDP联合作用能够同时显著抑制人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、体外侵袭能力及细胞黏附能力,并能够促进细胞凋亡和自噬标志蛋白beclin-1和LC3的表达(均P<0.05)。结论:Rap能够通过促进细胞自噬而增强DDP的作用,进而抑制人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞的增殖、侵袭、黏附并促进细胞凋亡作用,具有协同作用。

鸦胆子油乳联合顺铂胸腔注射治疗癌性胸水68例疗效观察

目的观察鸦胆子油乳、顺铂联合胸腔注射治疗癌性胸水的疗效。方法将123例癌性胸腔积液患者分为观察组(n=66)和对照组(n=55)。观察组以顺铂60mg及鸦胆子油乳50ml分别注入胸腔;对照组用顺铂100mg注入胸腔。结果观察组比对照组完全缓解(CR)率明显提高(57.35%vs29.09%,P<0.05),而毒副作用减少。结论鸦胆子油乳是一个安全有效的抗癌性胸水的中药制剂。

河鲀Ⅰ型胶原蛋白提取物防治环磷酰胺、顺铂或阿糖胞苷诱发小鼠骨髓抑制的研究

目的:观察河鲀Ⅰ型胶原蛋白提取物(Puff-erfishtypeⅠcollagen extract,PTICE)对环磷酰胺(CTX)、顺铂(DDP)或阿糖胞苷(Ara-c)诱发的小鼠骨髓抑制的影响。方法:分别用CTX、DDP、Ara-c腹腔注射(i.p.)诱发小鼠骨髓抑制、免疫抑制等毒副反应,PTICE灌胃(i.g.)预防治疗,观察小鼠的一般状况,测定外周血细胞分类、脾脏指数和骨髓DNA含量。结果:PTICE可改善应用上述化疗药物小鼠的一般状况,保护小鼠毛发,升高外周血中的白细胞、血小板、中性粒细胞、淋巴细胞数,增加脾脏指数和骨髓DNA含量;PTICE显著降低DDP导致的小鼠死亡率。结论:PTICE可降低化疗药物引起的小鼠骨髓抑制等毒副作用。

TP与GP方案治疗晚期非小细胞肺癌的临床对照研究

目的 评价TP方案（多西他赛TXT，顺铂DDP）与GP方案（吉西他滨GEM，顺铂DDP）治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效及毒副反应。方法 82例不能手术的晚期非小细胞肺癌患者随机分为二组，分别采用TP方案和GP方案化疗。结果 TP组和GP组化疗方案有效率分别为47．5％（19／40）及50．o％（21／42），两组中位无进展时间分别为5．5个月和6个月，中位生存时间分别为10．5个月和10．8个月，1年生存率分别为40．O％（16／40）和42．8％（18／42），经统计学处理，两组无显著差异，两组均显示初治比复治疗效好。骨髓抑制为剂量限制性毒性，恶心、呕吐等消化道反应以Ⅰ～Ⅱ度为主。结论 TP及GP方案治疗晚期非小细胞肺癌，疗效相当，毒副反应均可耐受，都可以作为一线首选的化疗方案。

米非司酮合用顺铂对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增殖及凋亡的影响

目的:探讨米非司酮合用顺铂对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增殖及凋亡率的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的米非司酮合用顺铂对COC1/DDP细胞株增殖活力的影响,采用流式细胞术观察不同浓度的米非司酮合用顺铂对COC1/DDP细胞株凋亡率的影响。结果:对照组和顺铂组比较,米非司酮加顺铂组细胞增殖活力OD值明显下降,细胞凋亡率明显升高,且随着米非司酮浓度的升高变化愈加显著(P<0.05和P<0.01)。结论:米非司酮联合顺铂对COC1/DDP细胞增殖活力均具有显著抑制作用,米非司酮可提高顺铂化疗的敏感性,其增敏作用与促进细胞凋亡有关,且与米非司酮的浓度呈剂量依赖关系。

p16基因对脑胶质瘤细胞顺铂化疗敏感性的影响

目的探索ｐ１６基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及其与脑胶质瘤细胞顺铂化疗敏感性的关系。方法采用脂质转染的方法．将外源野生型ｐ１６基因导入胶质瘤细胞株Ｕ２５１，观察ｐ１６基因长期稳定转染对胶质瘤细胞的作用，并筛选阳性克隆。同时以空载体质粒ＰＣＤＮＡ３为对照。免疫组化、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测ｐ１６基因表达，对转染后细胞生长情况、细胞周期及细胞对顺铂（ｃｉｓ－ｄｉａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎｕｍ，ＣＤＤＰ）敏感性的变化进行分析。结果外源ｐ１６基因的高水平表达显著掏了胶质瘤Ｕ２５１细胞的生长，克隆形成率减少，克隆形成率减少，肿瘤细胞发生了Ｇ１期阻滞，同时，细胞对顺铂的敏感性降低，化疗药物诱导的凋亡细胞数减少。结论外源野生型ｐ１６基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖，同时降低Ｕ２５１细胞对顺铂的化疗敏感性。ｐ１６基因转染后对顺铂诱导凋亡作用的抑制可能是其主要机制。

Apoptin与顺铂联用对膀胱癌T24细胞具有协同杀伤作用

目的探讨pApoptin-EGFP质粒转染与顺铂(DDP)联用对体外培养的膀胱癌T24细胞的协同杀伤作用。方法脂质体介导pApoptin-EGFP瞬时转染与梯度浓度DDP共同处理膀胱癌T24细胞,流式细胞仪检测细胞增殖变化;pApoptin-EGFP瞬时转染与10μg/ml的DDP处理T24细胞,Annexin V法检测凋亡变化;金氏法分析两种抗肿瘤方式的协同作用。结果 DDP、pEGFP-N1+DDP和pApoptin-EGFP+DDP 3组的IC50分别为10.61、7.9和2.4μg/ml,以金氏法计算,确认pApoptin-EGFP质粒转染与DDP处理对T24的抑制增殖效应具有协同作用,而转染空质粒与DDP干预仅仅为简单相加。同法检测DDP、pApoptin-EGFP、pApoptin-EGFP+DDP 3组的凋亡率分别为(6.96±1.32)%、(19.55±1.09)%和(32.5±1.15)%,3组凋亡率相互间均具有显著性差异(P<0.05)。按金氏法计算,确认转染pApoptin-EGFP重组质粒与10μg/ml浓度DDP处理对T24细胞具有协同的促凋亡作用。结论 Apoptin基因转染与顺铂联用对T24肿瘤抑制增殖及诱导凋亡具有协同作用。

丙戊酸对卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤生长抑制作用的研究

目的研究丙戊酸(valproic acid,VPA)对卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法建立人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠转移瘤模型,随机分4组,每组6只:对照组、VPA组、顺铂(diamminedichloroplatinum,DDP)组、VPA+DDP组。观察并记录各组裸鼠及其皮下移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤体积和肿瘤生长抑制率。采用流式细胞仪检测肿瘤组织细胞凋亡率、细胞周期时相、c-myc基因蛋白的表达、CA-125含量及人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)含量,检测裸鼠肝脏、脑组织细胞凋亡率。结果VPA能够明显抑制卵巢癌裸鼠移植瘤的生长,并能诱导肿瘤细胞凋亡,引起细胞周期G0/G1期阻滞,抑制原癌基因c-myc的表达,降低肿瘤组织中CA-125含量及hTERT含量。未见VPA引起明显肝、脑系统损害。与DDP合用时抑瘤作用增强。结论丙戊酸对卵巢癌裸鼠移植瘤有明显抑制作用,其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡和分化有关。VPA可增强卵巢癌裸鼠移植瘤对DDP的敏感性,而未增加其毒副作用。

盲肠扁桃体提取物免疫调节作用的初步研究

目的探讨盲肠扁桃体提取物的生物活性。方法利用顺铂造成雏鸡免疫抑制，运用淋巴细胞转化试验、四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和测定白细胞介素-2（IL-2）分泌水平对提取物进行生物活性检测。结果提取物组的淋巴细胞转化率和IL-2水平明显高于抑制组（P〈0．01）；不同剂量提取物（1：1000—1：10000）的吸收度值明显高于抑制组（P〈0．01）。结论盲肠扁桃体提取物在一定实验浓度能增强免疫抑制性机体的免疫功能，恢复正常免疫水平。

短小棒状杆菌与顺铂治疗恶性胸水的疗效评价

本组采用上海生物制品厂生产的短小棒状杆菌(CP)和顺铂(DDP)治疗恶性胸水34例,分为两组作对比分析评价。CP 组总有效率为94.1%(16/17),其中显效率为64.7%(11/17),有效率29.4%,无效率5.9%(1/17)。DDP 组总有效率82.1%,显效率23.5%(4/17),有效率为58.8%(10/17),无效率为17.6%(3/17)。CP 组优于DDP 组(P<0.01)。

HSP90抑制剂Ganetespib增强肺癌细胞对顺铂的敏感性

目的:研究HSP90抑制剂ganetespib对DNA修复相关蛋白表达的下调作用及其对顺铂(cisdiamminedichloroplatinum,DDP)的增敏作用。方法:采用Western印迹法检测ganetespib对肺癌细胞A549和H1975的DNA修复蛋白BRCA1及RAD51表达的下调作用;免疫荧光法检测细胞RAD51及核磷酸化的H2AX组蛋白(γ-H2AX)核焦点形成;流式细胞技术检测细胞凋亡;CKK-8试剂盒检测细胞的增殖,中效原理分析判断两种药物联合应用的协同作用;并通过SCID皮下移植瘤模型检测ganetespib与DDP联合应用的体内抑瘤作用。结果:Ganetespid明显下调DNA修复蛋白BRCA1和RAD51的表达,ganetespid及DDP处理诱导DNA重组修复标记RAD51核焦点的形成率为13%,明显少于单一DDP处理组(59%)。Ganetespid和DDP联合应用的细胞凋亡率为23%,明显高于单一ganetespid组(1 5%)或单一D D P组(1 6%),差异有统计学意义(P<0.0 1)。SCID小鼠移植瘤模型中ganetespid与DDP联合应用对肿瘤生长抑制作用明显优于单一ganetespi b或单一DDP处理组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:ganetespib可下调肺癌细胞DNA修复蛋白的表达并增加对DDP的敏感性。

甘露醇对非小细胞肺癌脑转移患者脑部顺铂浓度的影响

目的观察甘露醇对非小细胞肺癌多发脑转移患者脑脊液中顺铂(DDP)浓度的影响,探讨甘露醇对DDP透过血脑屏障的作用。方法 60例ⅢB?Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC)脑转移患者,随机分为A、B、C 3组。A组在DDP治疗开始前30min给予甘露醇,B组在DDP治疗开始前2h给予甘露醇,C组单纯使用DDP治疗。分别于DDP治疗后3h采集脑脊液与血标本,检测DDP浓度。参考KPS评分及症状评价患者生活质量、近期客观疗效以及不良反应。结果 3组脑脊液DDP浓度分别为:A组(2.82±1.46)mg/L,B组(1.24±1.11)mg/L,C组(1.03±0.92)mg/L,各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。3组KPS评分分别为:A组(66.82±7.31)分,B组(58.54±7.5)分和C组(42.29±8.73)分,各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。无进展生存期3组情况:A组(11.46±4.35)个月、B组(9.29±4.61)个月和C组(7.39±3.12)个月,生存期分别为A组(18.75±5.63)个月、B组(16.82±3.73)个月和C组(13.09±4.24)个月,各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。3组不良反应发生率分别为63.5%、65.2%和64.3%,组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论甘露醇可以促进DDP透过血脑屏障,且提前30min使用时效果更明显;甘露醇联合DDP治疗NSCLC脑转移患者,可提高疗效,改善患者的预后及生活质量,延长总生存时间,不良反应未增加。

MG132和顺铂的联合用药对Caov-3细胞中NF-κB和cyclinD1表达的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂MG132和顺铂的联合用药前后卵巢癌细胞株Caov-3细胞内NF-κB和cyclinD1的表达变化情况。方法免疫组织化学SP法测定用药前后Caov-3细胞中NF-κB和cyclinD1的表达情况。MTT法检测细胞的生长抑制情况。结果免疫组织化学结果显示MG132和顺铂联合用药作用24h后Caov-3细胞中NF-κB和cyclinD1的表达下调,与对照组和顺铂组比较差异有显著性(P<0.01),联合用药组中不同MG132浓度的各组间两两比较差异有显著性(P<0.01),联合用药能显著增加细胞的生长抑制率(P<0.01)。结论 MG132能诱导卵巢癌细胞Caov-3的凋亡,其重要的作用机制可能是通过抑制NF-κB和cyclinD1的表达来抑制肿瘤细胞的生长和诱导肿瘤细胞的凋亡。