DICER1 rs13078和RAN rs3803012基因多态性与妊娠期高血压疾病发病风险的病例对照研究

目的探讨DICER1 rs13078和RAN rs3803012基因多态性与妊娠期高血压疾病发病风险的关系。方法选取2021年6月至2022年3月在本院住院单胎妊娠且诊断为妊娠期高血压疾病的患者321例作为研究对象,其中妊娠期高血压患者147例(妊娠期高血压组),子痫前期患者174例(子痫前期组),同时选取同期在本院分娩的正常孕妇180例作为对照组。对比分析三组患者的临床资料及基因测试序列结果。结果妊娠期高血压组和子痫前期组的年龄显著高于对照组(P<0.05),妊娠期高血压组和子痫前期组的分娩孕周低于对照组(P<0.05),收缩压和舒张压高于对照组,糖尿病史和家族妊娠期高血压疾病史占比明显高于对照组(P<0.05);对照组、妊娠期高血压组和子痫前期组DICER1 rs13078位点有T和A两种基因,TT、TA、AA三种基因型;对照组、妊娠期高血压组和子痫前期组RAN rs3803012位点有A和G两种基因,AA、AG、GG三种基因型;对照组、妊娠期高血压组和子痫前期组DICER1 rs13078和RAN rs3803012位点基因型的实际值和预测值均符合Hardy-Weinberg平衡检验(P>0.05);对照组、妊娠期高血压组和子痫前期组DICER1 rs13078和RAN rs3803012位点基因型基因分布情况比较,差异具有统计学意义(P<0.05);校正其他混杂因素,包括年龄、孕周、收缩压、舒张压和糖尿病史和家族妊娠期高血压疾病史,DICER1 rs13078 T<A基因是子痫前期发病的发病危险因素(P<0.05);而RANrs3803012 A<G基因是妊娠期高血压疾病发病的危险因素(P<0.05)。结论DICER1 rs13078 T<A基因与子痫前期发病相关,RANrs3803012 A<G基因与妊娠期高血压的发病相关,携带DICER1 rs13078 T<A和RAN rs3803012 A<G基因的患者发生妊娠高血压和子痫前期的风险较高。

银屑病关节炎Dicer mRNA低表达对TNF-ɑ、IL-6表达的影响

目的在银屑病关节炎(PsA)患者中检测Dicer mRNA的表达,分析Dicer mRNA表达及与PsA临床特征的相关性,探讨Dicer在PsA发病机制中的作用。方法收集分离30例PsA患者和25例健康对照者外周血单核细胞(PBMCs),采用实时荧光定量聚合酶链反应检测PBMCs中Dicer mRNA的表达。通过DAPSA评估PsA患者的疾病活动度。通过细胞转染和刺激研究Dicer在PBMCs中的生物功能。采用酶联免疫法检测Dicer对肿瘤坏死因子ɑ(TNF-ɑ)、IL-6表达的影响。结果PsA患者PBMCs中Dicer mRNA表达水平较健康对照组显著降低(P=0.0014),PsA患者PBMCs中的Dicer mRNA表达水平与PsA患者的DAPSA评分呈负相关(r=-0.5181,P=0.0034)。LPS刺激后,PsA患者PBMCs可以分泌更高水平的TNF-ɑ和IL-6,转染Dicer小干扰RNA的PBMCs亦可以升高TNF-ɑ和IL-6蛋白表达。结论Dicer mRNA在PsA患者中表达降低。Dicer mRNA表达与PsA疾病的活动相关,可以作为PsA活动性指标。改变Dicer可以调控TNF-ɑ、IL-6的表达,提示Dicer对PsA患者炎症细胞因子TNF-ɑ、IL-6起到重要的调控作用。

植物Dicer-like功能的研究进展

Dicer是一种核酸内切酶,是RNA酶Ⅲ(RNaseⅢ)家族成员之一。植物中Dicer的同源蛋白称为Dicer-like(DCL)。通常情况下,Dicer蛋白由DEAD box、RNA解旋酶结构域、DUF283、PAZ、RNaseⅢ和双链RNA结合结构域(ds RNA binding domain,ds RBD)6部分组成,各个结构域之间紧密联系,共同作用。为了进一步深化对植物中DCL功能的认识,本研究归纳了DCL的蛋白结构域、DCL在小RNA生成中的剪切作用以及几种模式植物中DCL的生化作用,提出了不同类型的DCL在小RNA合成机制中相对独立又密切联系的作用。DCL识别何种RNA底物以及对底物剪切位置的确定,将会成为研究Dicer生化功能的重点内容。

Dicer蛋白分子的进化与结构研究进展

Dicer蛋白在RNA干扰(RNA interference,RNAi)途径中起着非常重要的作用,不同生物来源的Dicer蛋白在数量和结构上均存在着一定的差异。在植物界的生物进化过程中,Dicer蛋白的数量逐渐增多,功能逐步出现分化;而在动物界的生物进化过程中,Dicer蛋白的数量逐渐减少,功能却逐步整合。不同Dicer蛋白之间存在着一定的结构差异,但一般均含有RNA解旋酶(RNA helicase)结构域、PAZ结构域、RnaseⅢ结构域和双链RNA结合结构域等。从Dicer蛋白的种类及分子进化、结构功能域和作用模型等方面对Dicer蛋白分子的进化与结构的研究进展进行了综述。

Dicer结构和功能研究进展

Dicer蛋白是RNA干扰机制的关键组分,负责siRNA和miRNA的产生。它主要由RNA解旋酶结构域、PAZ结构域、RNaseⅢ结构域和双链RNA结合结构域构成。Dicer的结构特点决定了它所产生的小RNA的结构特点。不同生物体具有不同数量的Dicer,各Dicer既有功能上各自独立的特点,同时又有功能的冗余和交叉,而在进化过程中,Dicer的数量逐渐减少,功能却逐步整合从而表现出多功能的特点。对Dicer结构和功能进行深入研究,有助于了解Dicer乃至整个RNAi及相关途径的作用机制,也有助于揭示它们在进化过程中所表现出的规律和特点。文章对上述Dicer结构及功能特点作简要综述。

miRNA的重要调节者Dicer和Drosha与子宫内膜异位症的相关性研究

利用荧光定量PCR和Western blot检测证实,在异位的子宫内膜组织中Dicer和Drosha的表达低于在位子宫内膜组织,随后体外培养在位子宫内膜组织,采用siRNA干扰Dicer和Drosha,发现与干扰对照组相比,子宫内膜细胞的增殖加快而凋亡减少;同时ELISA检测显示转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)的表达上调;Western blot检测显示凋亡抑制蛋白Bcl2表达增加而促凋亡蛋白Bax的表达减少.结果表明,miRNA的重要调节者Dicer和Drosha可以影响TGF-β1及Bcl2/Bax的表达进而影响细胞的增殖和凋亡,从而参与了子宫内膜异位症的形成.

miR-107靶向调控Dicer1促进卵巢癌细胞系侵袭转移

目的检测microRNA-107(miR-107)在卵巢癌中的表达水平,探讨其对卵巢癌细胞系侵袭转移的调控作用及分子机制。方法 qRT-PCR法比较卵巢癌组织、正常卵巢组织、卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞中miR-107表达差异,用生物信息学的方法特异预测出miR-107靶基因Dicer1后,通过双荧光素酶报告体系进行验证。上调miR-107表达后,Western blot检测Dicer1的表达变化;划痕实验、Tr-answell实验观察卵巢癌细胞运动和侵袭能力的改变;qRT-PCR及Confocal观察EMT相关分子E-cad-herin、β-Catenin、N-cadherin、Vimentin、Fibronectin、ICAM-1、MMP-9的表达。结果 miR-107在上皮性卵巢癌组织的表达较正常卵巢组织显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因系统验证预测结果正确。上调miR-107后,Western blot结果显示Dicer1蛋白质水平被显著抑制,卵巢癌细胞系SKOV3细胞形态发生间质细胞样转变,间质标志分子β-Catenin、N-cadherin及MMP-9表达上升;体外实验表明卵巢癌细胞的运动和侵袭能力得到明显促进。结论本研究表明miR-107促进卵巢癌侵袭转移的分子机制是通过下调miRNA加工机器Dicer1,从而介导卵巢癌细胞EMT的发生;抑制miR-107或恢复Dicer1水平可能成为上皮性卵巢癌治疗的有效手段。

胃癌源性外泌体对HLA-DR^(neg)leukocytes中Dicer1、PTEN基因的调控

目的通过观察胃癌源性的外泌体对HLA-DR^(^(neg))leukocytes中Dicer1、PTEN基因表达的影响,探讨肿瘤源性外泌体调控机体免疫抑制功能的机制。方法提取胃癌患者血清外泌体并鉴定,免疫磁珠法分选HLA-DR^(neg)leukocytes,吖啶橙染色后的外泌体与CFSE染色后的HLA-DR^(neg)leukocytes在37℃,5%CO_2条件下共培养12 h;采用QRT-PCR和Western blot方法分别检测共培养后胃癌患者与健康对照组中Dicer1、PTEN基因和蛋白的表达。结果成功分离胃癌患者外周血外泌体;同时观察到外泌体被HLA-DR^(neg)leukocytes有效摄取。QRT-PCR检测结果显示Dicer1 m RNA、PTEN m RNA的相对表达量分别是健康对照组的0.46±0.19、0.48±0.27倍(P<0.05);Western blot结果显示Dicer1、PTEN蛋白表达量是健康对照组的0.15±0.11、0.33±0.19倍(P<0.05)。结论胃癌来源的外泌体可以抑制HLA-DR^(neg)leukocytes中Dicer1、PTEN基因的表达,为今后进一步研究肿瘤来源的外泌体的免疫调控作用提供线索。

血清miR-103和Dicer1表达及在结直肠癌中的诊断价值

目的:探讨结直肠癌患者血清miR-103和Dicer1表达情况,分析miR-103联合Dicer1检测在结直肠癌诊断中的应用前景。方法:72例经病理确诊的结直肠癌患者为实验组,72例健康体检者为对照组。应用实时定量PCR法检测实验组和对照组血清miR-103和Dicer1表达水平。分析两种生物标志物联合诊断结直肠癌的价值。结果:与对照组相比,miR-103在实验组患者血清中表达水平显著上调(P<0.01),Dicer1水平显著下调(P<0.05)。miR-103表达水平与结直肠癌临床分期、肿瘤转移情况以及Dicer1水平密切相关(P均<0.05)。miR-103与Dicer1联合在结直肠癌检测的敏感度和特异度最高可达82.1%和95.6%,Logistic分析受试者工作特征曲线(ROC)曲线下面积(AUC)为0.754。结论:miR-103高表达与结直肠癌分期、转移及Dicer1表达关系密切,与Dicer1联合有望成为结直肠癌的早期诊断指标。

Dicer及其miRNAs是血管平滑肌细胞分化和增殖所必需的基因和调节因子

为了研究Dicer及其所产生的miRNAs在血管平滑肌细胞(VSMC)中的作用,本研究采用条件性基因打靶法敲除了小鼠VSMC中的Dicer外显子23,通过采用连续性剖检妊娠小鼠法、病理组织学、免疫荧光、PCR、Western blot和实时PCR等技术对条件性敲除Dicer(Dicer c KO)胚胎的血管病变和VSMC中的Dicer、miRNAs和信号转导通路蛋白变化进行了详细研究.结果发现,在培育条件性敲除Dicer小鼠的过程可产生三种不同基因型小鼠,即野生型、杂合型和纯合型(Dicer c KO)小鼠.其中野生型和杂合型小鼠出生后无明显临床异常,而Dicer c KO小鼠却死于腹中而不能出生.Dicer c KO胚胎在胚胎发育的第12.5天(E12.5)就出现发育迟滞变化,在E14.5,皮肤、骨骼肌和肝脏的血管极度扩张、血液淤滞和广泛的弥漫性出血,在E15.5死亡.Dicer c KO胚胎血管壁的病变于E13.5即出现,主要表现为血管中膜的VSMC排列不整,增生减少;E14.5血管壁变薄、塌陷,管腔不规则,细胞增生明显减少;E15.5血管壁的结构完全破坏,细胞增生停止,血管壁的屏障作用破坏,通透性增强,向外渗血.在胚胎发育的E14.5,VSMC标志性基因的表达明显下调,VSMC中大部分受检miRNAs的表达也明显降低,磷酸化的信号转导通路蛋白,即细胞外信号调节激酶和蛋白激酶明显衰减.研究证明,Dicer是血管发育所必需的基因,它可通过控制mi RNA产生和成熟来调节VSMC标志性基因的表达,借以促进VSMC的增殖与分化,保障血管壁结构的完整.

实时荧光定量RT-PCR检测原发性肝细胞癌中Dicer mRNA的表达

目的:建立Dicer mRNA表达量检测的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chainreaction,RT-PCR)系统,检测肝癌细胞系与20例原发性肝细胞癌(primary hepatocellular carcinoma,PHC)组织中Dicer mR-NA的表达水平。方法:根据Dicer mRNA的全序列设计特异性引物,结合荧光染料SYBR GreenⅠ,RT-PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,进行熔解曲线分析排除非特异性扩增,根据标准品绘制标准曲线,由软件自动计算出待测样品Dicer mRNA的准确含量,并以Dicer mRNA和18S rRNA含量的比值作为Dicer表达水平的指标。结果:该方法检测的线性范围为5×102~5×109copies/μl,样本的批内变异系数与批间变异系数为4.13%~19.72%和6.25%~18.76%。Dicer mR-NA在HBV阳性肝癌细胞系HepG2.2.15和HBV阴性肝癌细胞系HepG2的表达水平明显低于正常肝细胞系WRL-68(P<0.05);在PHC组织的表达水平明显低于癌旁配对组织(P<0.05)。结论:该方法具有较好的灵敏度、特异性和重复性。Dic-er mRNA表达量在肝癌细胞系和PHC组织中的检测为以后更好的研究PHC的发病机制奠定了理论基础。

Dicer调节生殖功能的研究进展

Dicer是微小非编码RNA生成的关键内切酶,介导微小RNA(micro RNA,mi RNA)和小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)的产生,通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)途径实现转录或转录后水平基因调控,在调节细胞增殖、分化、凋亡等方面起重要作用。近年来Dicer基因在生殖领域的研究越来越受关注,最近的研究表明Dicer与男性生精细胞发育、精子形成及成熟、精子活力和形态生成、卵泡发育、排卵及黄体形成、性激素合成、输卵管功能、子宫内膜容受性等方面都有密切关系。繁衍后代需要精子和卵子的共同参与,Dicer可能通过影响精子和卵子的数量或者质量进而导致胚胎发育异常,因此理解Dicer在雄性与雌性生殖的重要调节作用对于理解生殖调节异常相关的疾病如无精子症、复发性流产等的发病机制具有重要的作用。本文对Dicer在雄性生殖道与雌性生殖中的关键作用进行了综述,旨在进一步从分子层面深入理解Dicer与生殖相关疾病的关系。

Dicer1在卵巢癌间质成纤维细胞中调控DNA损伤修复相关基因

目的:检测Dicer1在卵巢癌间质肿瘤相关成纤维细胞中的表达情况,探讨其对DNA双键断裂损伤(DSB)修复相关基因的影响。方法:应用基因集合富集分析(GSEA)方法分析卵巢癌间质和正常卵巢间质基因表达公共数据库GSE40595,探索Dicer1对DSB修复相关通路及关键基因的调控作用,并筛选出相关差异基因。应用重组人转化生长因子β1(h TGFβ1)细胞因子诱导成纤维细胞系MRC5细胞活化成为肿瘤相关成纤维细胞(CAFs),即MRC5-CAFs。以靶向Dicer1基因的siRNA转染MRC5-CAFs,下调其Dicer1表达水平。qRT-PCR、Western blot法分别检测Dicer1及分析所得相关基因,如XRCC6、TP53BP1、H2AFX、BRCA1、ATR、RAD51 mRNA水平及Dicer1和DSB损伤修复关键基因γ-H2AX(磷酸化H2AX)、RAD51蛋白水平。荧光共聚焦检测细胞核蛋白γ-H2AX表达;采用CCK8试验检测细胞活性。结果:GSEA分析结果显示,Dicer1表达水平与DSB(NES=1.7942109,FDRq=0.0067545176)及DNA损伤修复(NES=2.4433048,FDRq=0)显著正相关,进一步通过相关分析筛选出在上述通路中与Dicer1表达正相关的显著基因集。沉默MRC5-CAFs细胞中Dicer1表达后,DSB相关基因,如XRCC6、TP53BP1、H2AFX及损伤修复相关基因BRCA1、ATR、RAD51均较对照组显著下降,与GSEA分析结果一致。荧光共聚焦显微镜检测到沉默Dicer1 MRC5-CAFs细胞内聚集较少的DSB。CCK8试验结果显示,MRC5-CAFs细胞在20μmol/L顺铂作用下,Dicer1-si组不同时间梯度的细胞活性率均低于NC-si组。结论:Dicer1在卵巢癌间质成纤维细胞中正向调控DNA损伤修复相关基因,抑制Dicer1表达后其对顺铂敏感性显著增加。

Dicer在舌癌细胞中的表达及意义

目的探讨Dicer基因在口腔上皮细胞和舌鳞癌细胞中的表达及意义。方法应用免疫组织化学技术(SV-0002两步法)、蛋白印迹分析(Western blot)和实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测人口腔上皮细胞和舌鳞细胞株Tca-8113、UM-1中Dicer的蛋白质和mRNA表达。结果 Dicer在口腔上皮细胞中的蛋白质和mRNA表达高于Tca-8113和UM-1,Tca-8113的蛋白质表达水平高于UM-1。结论 Dicer在舌鳞细胞株中的表达较正常口腔上皮细胞者下降,且其低表达可能促进了舌鳞癌的发展。

Dicer在胃癌细胞和胃癌组织的表达及意义

目的:探讨Dicer在胃癌(Gastric carcinoma)细胞和胃癌组织中的表达及意义。方法:应用Western-Blot和逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测正常胃粘膜细胞株GES-1、人胃癌细胞株SGC-7901,25例胃癌手术标本及癌旁配对组织Dicer的含量。结果:1.Western-Blot和RT-PCR结果表明Dicer在人胃癌细胞株SGC-7901的表达水平明显低于正常胃粘膜细胞株GES-1(P<0.05),在胃癌手术标本组织的表达水平明显低于癌旁配对组织(P<0.05);2.Dicer表达水平与胃癌分化程度有关。低分化组低于中分化组(P<0.05),中分化组低于高分化组(P<0.05)。结论:在胃癌细胞株和胃癌组织中Dicer表达明显降低并且Dicer表达与胃癌分化程度相关。

Dicer1转基因小鼠模型的建立

目的建立Dicer1转基因小鼠模型。方法构建pcDNA3.1-Dicer1转基因构件,经酶切、纯化后通过显微注射方法导入BDF1小鼠受精卵原核并移植到同期受孕的ICR受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型,通过免疫组化检测Dicer1基因表达。结果显微注射172枚卵,移植119枚卵于3只受体输卵管中,2只怀孕,共产仔15只,经PCR检测获得6只阳性鼠,Southern检测6只均为阳性。对Southern检测阳性转基因小鼠子代进行RT-PCR检测和免疫组化分析证明Dicer1基因在肝脏、肾脏、肺内均有表达。对腹腔肿胀的转基因阳性1号鼠解剖发现肝脏、脾脏明显增大,胚胎发育异常。结论成功建立Dicer1基因表达的转基因小鼠模型,该模型为进一步研究DICER1基因功能及miRNA的表达及功能等奠定基础。

MiR-10b及其前体和Dicer在乳腺癌中的表达

目的比较癌组织与正常组织中mi R-10b及其前体和Dicer表达的差异,了解乳腺癌与其表达的关系.方法通过SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌组织和正常乳腺组织中mi R-10b及其前体的含量.结果 (1)mi R-10b和Dicer在乳腺癌组织中的表达均显著低于癌旁正常组织中的表达(P<0.05);(2)正常组织中的mi R-10b的表达与C-erb B-2成负相关相关(rs=-0.42,P<0.05),正常组织中的Dicer与C-erb B-2的表达与成正相关(rs=0.60,P<0.05).结论 mi R-10b和Dicer在乳腺癌组织中处于低表达状态,可能在乳腺癌的发生发展中起到抑制作用.

DICER1在急性髓细胞白血病中的表达及其与预后关系的探讨

目的检测DICER1基因在急性髓细胞白血病(AML)中的表达水平,探讨其表达与AML预后的关系。方法 Real-time PCR方法检测AML患者中DICER1 mRNA的表达水平;Western blot方法检测AML患者中DICER1的蛋白表达水平;采用Logistic相关分析DICER1表达与临床特征的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析DICER1表达与患者总生存期的关系。结果成人AML骨髓标本中DICER1表达水平显著高于正常对照组(P<0.05)。DICER1 mRNA高表达与初诊时高白细胞数、初次化疗效果差相关(OR值分别是7.51、0.058;P分别为0.032、0.003)。DICER1高表达组患者(中位总生存期17.9个月)较低表达组(中位总生存期29.3个月)总生存期短,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DICER1在AML中高表达,其高表达可能是AML的不良预后因素。

Dicer基因

Dicer编码RNaseⅢ家族,是一进化保守基因。它包含四个ORF框架:DExH/DEAH盒解旋酶、PAZ、两个RNaseⅢ催化区与双链RNA结合区DS-RBD。目前发现Dicer在RNA干扰以及异时发育中起重要作用,它可以切割长的双链RNA成长度为22nt左右的小干扰RNA-siRNA,异时基因stRNA的成熟也与需要Dicer的参与。Dicer行使切割功能需要RDE-1或其同源基因ALG1/ALG2的协同。随着研究的深入,Dicer的其它生物功能将进一步被发现。

急性髓系白血病细胞中DICER1基因的表达及其功能研究

目的:检测急性髓系白血病细胞株HL-60、KG-1细胞中DICER1基因的表达水平,研究DICER1基因沉默对HL-60、KG-1细胞增殖、凋亡的影响,探寻DICER1在白血病发病机制中的作用。方法:应用Real-time PCR和Western blot检测DICER1在白血病细胞株HL-60、KG-1中mRNA和蛋白的相对表达水平。用LipofectamineTMLTX将DICER-shRNA载体转染HL-60、KG-1细胞,Real-time PCR和Western blot的方法从mRNA和蛋白水平检测DICER1的干扰效率。CCK-8法检测DICER1干扰后对白血病细胞增殖的影响,流式细胞仪检测DICER1干扰后白血病细胞凋亡率。结果:以正常HEK293细胞为对照,白血病细胞株HL-60、KG-1中DICER1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于正常HEK293细胞(P<0.05)。DICER1-shRNA转染HL-60、KG-1细胞5天后,DICER1 mRNA和蛋白表达水平显著下降,干扰效果显著(P<0.05);CCK-8实验结果表明:与对照组细胞相比,DICER1干扰后白血病细胞增殖力显著降低(P<0.05);流式细胞分析表明:与正常细胞和对照组细胞比较,DICER1干扰后白血病细胞凋亡显著增加(P<0.01)。结论:DICER1在白血病细胞株HL-60、KG-1中高表达,具有促进白血病细胞增殖,抑制凋亡的作用。